RecQL4在小细胞肺癌化疗耐药中的作用研究

目的分析人体解旋酶RecQL4在小细胞肺癌(SCLC)组织标本中的表达水平,并探讨其与化疗耐药性的关系。方法选取我院肿瘤科2011年9月—2016年9月确诊的SCLC患者31例,检测其癌组织病理切片中RecQL4、MDR1的表达情况,分析二者与临床病理特征、化疗耐药性和预后的关系。结果本组化疗总缓解率为45. 2%。RecQL4的表达水平与患者的年龄、性别、有无吸烟史、是否合并胸腔积液、淋巴结转移与否和临床分期等因素之间比较差异均无统计学意义(P> 0. 05),与化疗效果之间有显著统计学意义(P <0. 05)。RecQL4的表达水平与肿瘤进展时间(TTP)呈负相关(r=-0. 81,P <0. 05)。MDR1的表达水平与TTP呈负相关(r=-0. 76,P <0. 05)。RecQL4和MDR1的表达水平呈正相关(r=0. 61,P <0. 05)。结论 RecQL4表达水平相对较高的SCLC患者更易对化疗产生耐药,生存期短,预后差。

Cav-1表达对非小细胞肺癌患者吉非替尼治疗敏感性的影响

目的观察表皮生长因子受体(EGFR)敏感突变非小细胞肺癌(NSCLC)组织及细胞株PC-9中小凹蛋白-1(Cav-1)的表达,分析其表达对肿瘤细胞吉非替尼敏感性的影响。方法观察2012—2019年21例不同无进展生存期(PFS)NSCLC患者吉非替尼治疗耐药后癌组织Cav-1表达情况。将PC-9细胞分别转染为PC-9/Cav-1和PC-9/pcDNA3.1细胞,再用无或有吉非替尼培养基培养。Western blot检测Cav-1蛋白及信号通路蛋白磷酸化水平的变化,MTT法、划痕修复实验、Transwell法检测Cav-1表达对细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力的影响。结果PFS≤9.5个月患者癌组织Cav-1表达阳性率高于>9.5个月患者(P<0.05)。PC-9/Cav-1细胞Cav-1蛋白相对表达水平较PC-9/pcDNA3.1细胞明显增高(P<0.05)。PC-9/Cav-1细胞吉非替尼的半数抑制浓度值高于PC-9/pcDNA3.1细胞(P<0.05)。无或有吉非替尼培养基培养6、12、18 h,PC-9/Cav-1细胞迁移率分别高于PC-9/pcDNA3.1细胞(P<0.05)。无或有吉非替尼作用下,PC-9/Cav-1细胞穿膜细胞数均多于PC-9/pcDNA3.1细胞(P<0.01)。无或有吉非替尼培养基培养的PC-9/Cav-1细胞pY-EGFR、p-ERK、p-AKT表达水平均明显高于PC-9/pcDNA3.1细胞(P<0.01)。结论Cav-1与吉非替尼治疗耐药有关,其机制可能与改变MAPK/ERK、PI3K/AKT信号通路有关,Cav-1有可能成为预防吉非替尼治疗耐药的潜在靶点。

转录因子BATF3通过调控波形蛋白促进肾透明细胞癌细胞的恶性生物学行为

目的:探讨碱性亮氨酸拉链转录因子ATF样蛋白3(BATF3)在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达及其调控ccRCC细胞恶性生物学行为的分子机制。方法:收集2019年3月至2022年1月间在中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院手术切除的64例ccRCC组织和相应癌旁组织,qPCR法检测ccRCC组织、癌旁组织和肾癌ACHN、786-O细胞中BATF3 mRNA的表达,免疫组化检测ccRCC组织、癌旁组织中BATF3蛋白的表达,并分析其与临床病理特征的关系。构建BATF3敲减及过表达质粒,分别转染786-O、ACHN细胞,通过MTS法、Transwell实验检测BATF3对786-O或ACHN细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,qPCR法检测敲减或过表达BATF3对786-O或ACHN细胞EMT相关基因表达的影响,CHIP、双荧光素酶报告基因实验检测BATF3是否与波形蛋白(VIM)启动子区结合并调控其转录,MTS法、Transwell实验检测同时过表达BATF3及敲减VIM对786-O细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果:与癌旁组织比较,ccRCC组织中BATF3的mRNA和蛋白均呈高表达(均P<0.01),并且BATF3 mRNA与ccRCC的分化程度和TNM分期密切关联(均P<0.01);与正常肾上皮细胞293T相比,BATF3在ACHN及786-O细胞中均呈高表达(均P<0.01)。敲减BATF3表达均能明显抑制786-O细胞的增殖、迁移、侵袭能力(均P<0.01),过表达BATF3则均能促进ACHN细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01),敲减或过表达BATF3能抑制786-O细胞或促进ACHN细胞的EMT相关基因的表达(均P<0.01)。BATF3可与VIM启动子区的位点结合,直接调控VIM的转录表达。同时过表达BATF3及敲减VIM可逆转过表达BATF3对786-O细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结论:BATF3在ccRCC组织中呈高表达,并与其分化程度和TNM分期密切关联;BATF3通过调控VIM的表达影响ACHN、786-O细胞的恶性生物学行为,其可作为临床治疗ccRCC的潜在靶点。

Cav-1对EGFR敏感基因突变非小细胞肺癌患者厄洛替尼治疗耐药的机制研究

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)敏感基因突变非小细胞肺癌(NSCLC)患者接受表皮生长因子受体厄洛替尼治疗耐药前后肿瘤组织小凹蛋白-1(Cav-1)表达情况,以及Cav-1表达情况对细胞株侵袭能力、厄洛替尼耐药的影响和作用机制。方法选取2012—2019年我院收治的30例EGFR敏感基因突变NSCLC患者,应用免疫组织化学染色法检测患者肿瘤组织厄洛替尼治疗耐药后Cav-1表达情况;采用MTS比色分析法检测PC-9细胞和Cav-1过表达的PC-9细胞不同厄洛替尼浓度干预下对增殖能力的影响;采用Transwell法检测厄洛替尼对不同Cav-1表达的PC-9细胞侵袭能力的影响;采用Western blot法检测MAPK/ERK信号通路活化程度。结果经厄洛替尼治疗耐药后患者肿瘤组织中Cav-1表达阳性率及表达强度明显增高或增强;厄洛替尼可抑制稳定转染Cav-1细胞株增殖;稳定转染Cav-1细胞株侵袭能力增加;Cav-1高表达使MAPK/ERK信号通路活化能力增强。结论Cav-1高表达与厄洛替尼治疗耐药相关,其有望成为EGFR-TKIs耐药的有效预测蛋白及潜在治疗靶点。

LINC00520通过miR-519b-3p/HIF1A轴促进胃癌的侵袭转移

目的探讨LINC00520在胃癌中的功能和分子机制,揭示其在胃癌发展中潜在作用。方法筛选GEO数据库中胃癌样本,寻找与胃癌恶性进展相关的差异表达基因。qPCR检测LINC00520在胃癌中的表达水平,细胞功能实验探索LINC00520对胃癌进展的潜在影响。生物信息学分析LINC00520与miR-519b-3p和HIF1A之间的关联,并利用双荧光素酶报告基因和RNA免疫沉淀实验验证它们之间的结合活性。结果胃癌中LINC00520表达显著上调(P<0.01),LINC00520过表达促进胃癌细胞的恶性进展(均P<0.01)。LINC00520通过竞争性靶向miR-519b-3p,上调HIF1A表达(均P<0.01)。结论LINC00520在胃癌中高表达,通过靶向miR-519b-3p/HIF1A轴发挥着关键调节作用,为胃癌诊断和治疗提供新的靶点。

乌头碱调控miR-150-5p表达对心力衰竭模型大鼠心功能及心室重构的影响

目的探究乌头碱对心力衰竭模型大鼠心功能及心室重构的影响及对miR-150-5p的调控作用。方法将SPF级SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、曲美他嗪组、乌头碱组、乌头碱+antagomir-NC组、乌头碱+miR-150-5p antagomir组,每组15只。除假手术组外,其余组均利用结扎左前降支冠状动脉法建立心力衰竭大鼠模型。测定各组大鼠心功能指标左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室射血分数(LVEF);ELISA检测各组大鼠心肌损伤指标心肌肌钙蛋白I(CTnI)、脑钠肽(BNP)和N末端B型脑钠肽前体(NT-pro BNP)的水平;测定各组大鼠心脏和左心室质量指数;Masson染色观察各组大鼠心肌组织形态;TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡率;RT-qRCR检测各组大鼠心肌组织中miR-150-5p和细胞周期蛋白D2(CCND2)的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与CCND2的靶向关系;Western blotting检测心肌细胞中CCND2蛋白的表达。结果与模型组相比,乌头碱组大鼠心功能指标LVEDD、LVESD、心肌损伤指标CTnI、BNP和NT-pro BNP水平、心脏质量指数、左心室质量指数、心肌纤维化区域、心肌细胞凋亡率和CCND2m RNA水平均降低(P<0.05),LVEF、miR-150-5p水平升高(P<0.05);使用miR-150-5p antagomir进行回补实验,结果显示,乌头碱对心力衰竭大鼠心功能和心室重构的保护作用被逆转,且CCND2 m RNA水平升高(P<0.05);与miR-150-5p mimic-NC组相比,miR-150-5pmimic组心肌细胞CCND2蛋白表达显著降低(P<0.05),且双荧光素酶报告基因实验验证了miR-150-5p与CCND2之间存在靶向关系。结论乌头碱通过上调miR-150-5p表达对心力衰竭大鼠心功能和心室重构发挥保护作用。

信号转导和转录激活因子4通过波形蛋白影响肾癌进展

目的探讨信号转导和转录激活因子4(STAT4)在肾透明细胞癌中的表达及其机制。方法基于基因表达综合数据库(GEO)数据库,比较肾癌中STAT4的表达差异。收集2018年6月至2022年1月联勤保障部队第九八〇医院收治的72例肾癌患者,实时荧光定量聚合酶联反应(qRT-PCR)及免疫组织化学(IHC)法检测肾癌中STAT4的表达。细胞的活力测定(MTS)法检测增殖活性,划痕实验检测迁移能力,Transwell小室检测侵袭能力。染色体免疫共沉淀(ChIP)和荧光素酶实验验证STAT4可作为转录因子与波形蛋白(VIM)结合。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果STAT4 mRNA在肾癌中高于正常组织(2.671±2.054比1.012±0.174,t=5.004,P<0.01),STAT4蛋白的阳性率高于正常组织[73.6%(53/72)比31.9%(23/72),χ^(2)=25.077,P<0.01]。将STAT4敲低质粒转染到786-O中,sh-STAT4组的增殖能力降低(2.050±0.139比1.606±0.018,t=6.339,P<0.01),迁移能力下降(0.303±0.050比0.537±0.050,t=-5.678,P<0.01),侵袭能力受到抑制(820.667±16.563比374.667±17.156,t=32.394,P<0.01)。荧光素酶实验及ChIP实验发现STAT4与VIM启动子结合,调控VIM转录表达。结论STAT4在肾透明细胞癌中高表达,并促进肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭。STAT4可作为VIM的上游转录因子参与肾癌的发生发展。