肺癌线粒体DNA诱导小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3恶性转化的研究

目的观察转染了A549及H226肺癌细胞线粒体DNA(mtDNA)的小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3的生物学行为的变化。方法将重组载体pcDNA3.1(+)-A549 mtDNA、pcDNA3.1(+)-H226 mtDNA通过Lipofection2000TM转染NIH3T3细胞;荧光原位杂交(FISH)法观察mtDNA在核内的整合情况;分析转染前后细胞染色体核型;流式细胞仪(FCM)检测转染细胞的凋亡;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)测定不同组别细胞的增殖率。结果转染A549-mtDNA、H226-mtDNA的NIH3T3细胞染色体出现了易位、断裂的结构畸形,其畸形的多倍体数目百分比(11.78±0.60)%、(11.33±1.05)%和染色体数目(3.55±0.57)%、(5.02±0.72)%高于未转染的NIH3T3细胞(1.38±0.17)%、(0.54±0.10)%。荧光显微镜观察到mtDNA能够整合在转染A549-mtDNA、H226-mtDNA的NIH3T3细胞染色体间期核中。同时,转染了A549-mtDNA、H226-mtDNA重组表达载体,A549-mtDNA组(5.20±0.20)%、H226-mtDNA组(7.75±0.11)%较NIH3T3组(19.04±0.08)%细胞的凋亡率明显下降(F=8381.21,P<0.001)。分别培养24 h、48 h、72 h,对MTT的吸光度,NIH3T3/A549-mtDNA组(0.58±0.06)、(0.96±0.08)、(1.45±0.06),NIH3T3/H226-mtDNA组(0.64±0.04)、(1.02±0.06)、(1.52±0.03)高于空NIH3T3组(0.26±0.04)、(0.42±0.03)、(0.81±0.04)、(1.18±0.09)。结论突变的肺癌mtDNA通过在核内的整合从而影响NIH3T3细胞的染色体核型及细胞增殖、凋亡等生物学行为。