巢式PCR在献血者隐匿性乙肝病毒感染检测中的应用

目的探讨巢式PCR在献血者隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)检测中的应用,提高输血前血液筛查OBI的检出率。方法2021年7月至2022年8月在解放军济南血液中心的献血者,经血清学实验与核酸扩增实验共检出HBsAg-、NAT+的献血员37例,记录核酸扩增实验的Ct值,使用荧光定量PCR对HBV DNA进行定量检测;设计常规PCR引物与巢式PCR引物,分别使用常规PCR与巢式PCR扩增HBV S基因与preS基因,并对扩增结果进行基因测序。结果37例HBsAg-、NAT+献血者中有33例核酸检测Ct值处于灰区范围,荧光定量PCR检测HBV DNA值与核酸检测Ct值呈负相关性;37例HBsAg-、NAT+献血者使用常规PCR无法扩增出条带,改用巢式PCR后,34例可检测到HBV病毒S基因,28例可检测到HBV病毒preS基因;扩增条带经基因测序显示均为HBV基因组序列。结论HBsAg-、NAT+献血者血浆中HBV病毒载量极低;巢式PCR灵敏度高,可提高HBV病毒preS/S基因的检出率,对于OBI的输血前筛查及后续研究有一定应用价值。

献血者和慢性乙肝患者隐匿性乙肝病毒感染特征比较

目的研究献血者和慢性乙肝患者(chronic hepatitis B,CHB)隐匿性乙型肝炎病毒感染(occult hepatitis B infection,OBI)血清学和分子生物学特征与差异。方法收集19份献血者OBI样本与19份CHB患者OBI样本,分别设为A组和B组,采用化学发光方法进行乙肝五项检测,荧光定量PCR方法进行乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA定量,巢式PCR扩增HBV S基因并测序。结果A组HBV DNA载量显著低于B组(P<0.05),两组血清学结果无明显差异,B组S基因的"a"决定簇突变率明显高于A组(P<0.05)。结论与CHB患者相比,OBI献血者病毒复制水平更低、S基因突变几率更小,血液筛查过程中使用高灵敏度的核酸检测试剂和方法才能最大限度保障输血安全。

一例无偿献血者间歇性检出乙肝病毒DNA的血清学及S区基因特征分析

目的分析一例无偿献血者乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA间歇性检出的血清学特征及其S基因测序情况,为正确解释间歇性检出献血者HBVDNA、更好的保证血液安全提供依据。方法收集HBV DNA呈间歇性检出的献血者两次献血标本,使用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)双试剂检测HBV表面抗原(HBsAg),血筛核酸检测(nucleic acid testing,NAT)筛查HBV DNA。使用电化学发光法进行乙肝五项检测。使用巢式PCR扩增HBV S基因并进行基因测序和分析。结果针对两次标本,ELISA双试剂检测HBsAg均为阴性;NAT结果一次为无反应性,一次为反应性(Ct值为40.52);乙肝五项结果显示HBV e抗体(anti-HBe)、HBV核心抗体(anti-HBc)均为阳性;该献血者两次标本经扩增测序均得到相同的S基因序列,分型为HBV基因型C;与S基因同基因型参考序列比对未发现基因突变。结论该献血者存在隐匿性HBV感染(occult hepatitis B infection,OBI),且表现为常规血筛核酸检测试剂间歇性检出的情况,极易发生HBV漏检,严重影响输血安全。灵敏度高的血筛检测试剂和方法对输血安全至关重要。