乳腺癌淋巴结转移动物模型的建立及评价

目的建立不同乳腺癌淋巴结转移的动物模型,并评价其效果。方法取6~8周龄BALB/c雌性小鼠60只,采用4T1乳腺癌细胞悬液注射小鼠不同部位等人工移植方法构建6种淋巴结转移动物模型(n=10),另采用小鼠乳腺肿瘤病毒介导多瘤病毒中间T抗原(mouse mammary tumor virus-polyoma middle T antigen,MMTV-PyMT)转基因小鼠作为肿瘤自发淋巴结转移模型(n=5),并从操作可行性、病理组织学观测、肿瘤生长速度及小鼠生存等多方面综合评价不同淋巴结转移模型的优劣特征。结果7种转移模型方法中有4种成功建立淋巴结转移的动物模型,其中PyMT小鼠自发淋巴结转移模型临床复现情况最佳,成瘤率可达100%,但存在实验标准化差的弊端;后脚掌-腘窝淋巴结模型淋巴结发生转移速度最快,易操作且重复性高,成瘤率也可达100%,适合用于淋巴结转移相关研究;腿部-腹股沟淋巴结模型操作简单,重复率高,可达100%,但是其转移时间较后脚掌-腘窝淋巴结模型略长;腹股沟淋巴结-对侧淋巴结模型存在操作较难、荷瘤成功率仅为50%、重复性差的缺陷;另外3种荷瘤模型(舌下-颈内静脉肩胛舌骨肌淋巴结模型、骨髓内-腹股沟淋巴结模型及右上背皮-腋窝淋巴结模型)均未能在短时间内成功建立淋巴结转移模型,在病理切片中未观察到肿瘤细胞的存在。结论后脚掌-腘窝淋巴结模型成瘤效果好,最适合用于开展乳腺癌淋巴结转移相关研究。

PD-L1表达对晚期肺腺癌患者培美曲塞化疗效果的影响及其机制

背景与目的:肺癌组织程序性死亡配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)表达水平不仅是程序性死亡[蛋白]-1(programmed death-1,PD-1)/PD-L1抑制剂最主要的疗效预测生物标志物,还可能影响表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)的疗效。然而,肺癌组织PD-L1表达水平能否影响肺腺癌患者化疗效果,目前相关文献报道较少。探讨肺腺癌组织PD-L1表达对培美曲塞为基础的化疗效果的影响及其潜在机制。方法:2015年10月—2018年12月于中国人民解放军西部战区总医院肿瘤诊治中心确诊为肺腺癌且符合研究入组条件的患者共185例。应用免疫组织化学法分别检测肺腺癌组织中PD-L1和培美曲塞疗效预测分子胸苷酸合酶(thymidylate synthase,TS)的表达。采用Kaplan-Meier法绘制患者的生存曲线,采用log-rank检验和COX回归模型分析影响患者无疾病进展生存(progression-free survival,PFS)的临床病理学因素,采用log-rank检验分别分析PD-L1和TS表达对患者PFS和总生存(overall survival,OS)的影响,采用Spearman秩相关性检验分析肺腺癌组织中PD-L1表达与TS表达的相关性。应用蛋白质印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)分别检测6种肺腺癌细胞系中PD-L1、TS的蛋白水平和mRNA表达。采用Pearson相关性检验分析PD-L1和TS在蛋白表达水平及mRNA表达水平的相关性。结果:在51例一线接受培美曲塞为基础化疗的晚期肺腺癌患者中,PD-L1表达阳性患者的客观有效率(objective response rate,ORR)和疾病控制率(disease control rate,DCR)与PD-L1表达阴性患者相比差异无统计学意义(ORR:20.0%vs 35.5%,χ~2=1.404,P=0.236;DCR:60.0%vs 80.6%,χ~2=2.602,P=0.107)。PD-L1表达阴性患者的中位无疾病进展生存(median progression-free survival,mPFS)显著优于PD-L1表达阳性患者(mPFS:5.6个月vs 4.1个月,log-rank=5.406,P=0.020),两组患者中位总生存(median overall survival,mOS)差异无统计学意义(mOS:15.9个月vs 12.7个月,log-rank=0.525,P=0.469)。单因素分析发现PD-L1和TS表达阳性是影响患者PFS的危险因素(P=0.023和P=0.003),多因素分析发现TS表达阳性是影响患者PFS的独立危险因素(P=0.034)。在51例一线接受培美曲塞为基础化疗的晚期肺腺癌患者中,患者肺腺癌组织PD-L1表达与TS表达呈显著正相关性(r_s=0.691,P<0.001);进一步扩大样本检测发现:在不同肿瘤分期和一线治疗模式的185例肺腺癌患者中,癌组织PD-L1表达与TS表达仍然呈显著正相关(r_s=0.588,P<0.001)。在包括A549在内的6种肺腺癌细胞系中PD-L1与TS在蛋白水平和mRNA表达均呈显著正相关(蛋白水平:r_s=0.899,P<0.05;mRNA表达:r_s=0.861,P<0.05)。结论:在一线接受培美曲塞为基础化疗的晚期肺腺癌患者中,PD-L1表达阳性患者的mPFS较PD-L1表达阴性患者显著缩短,提示PD-L1表达可能作为晚期肺腺癌患者培美曲塞为基础化疗的潜在疗效预测生物标志物。PD-L1和TS的表达不论在肺腺癌组织水平还是细胞系水平均存在显著相关性,可能是PD-L1表达影响培美曲塞化疗效果的潜在原因之一。

沉默HOXB7基因表达在电离辐射诱导肺腺癌细胞上皮间质转化和迁移中的作用

目的:探讨HOXB7对电离辐射诱导的肺腺癌细胞上皮间质转化和迁移能力的影响。方法:采用Western blot 检测蛋白表达变化,划痕实验和 Transwell迁移实验检测电离辐射对肺腺癌A549细胞迁移能力的影响。结果:用不同剂量X-射线辐照A549细胞,发现2 Gy X-射线辐照HOXB7表达量最高;用2 Gy X-射线辐照A549细胞,发现辐照后第3天HOXB7表达量最高;Western blot 检测发现电离辐射明显上调上皮间质转化标志蛋白的表达;划痕实验及Transwell 迁移实验证明电离辐射增强A549细胞迁移能力。沉默HOXB7 后,电离辐射诱导的A549细胞上皮间质转化及迁移能力明显减弱。结论: HOXB7是电离辐射诱导肺腺癌细胞上皮间质转化和迁移的关键蛋白。

敏感复发广泛期小细胞肺癌应用EP方案二线治疗的可行性,一项多中心、回顾性研究

目的:广泛期小细胞肺癌(extensive-stage small-cell lung cancer,ES-SCLC)一线治疗主要采用以化疗为基础的联合方案,进展后多推荐拓扑替康等二线化疗。对于一线使用依托泊苷联合铂类(etoposide-platin,EP)有效的人群,复发后亦可选择同方案再次治疗。但目前并无二种方案的疗效和安全性比对数据。本研究旨在探讨EP方案再治疗敏感复发ES-SCLC患者的疗效和安全性。方法:纳入153例就诊于四川省肿瘤医院等5所医疗中心并接受EP方案二线治疗的ES-SCLC患者。所有患者均接受标准一线EP方案化疗且有效。根据治疗间歇期、不同铂类方案、有无吸烟史、放疗与否等进行分组,进行回顾性分析。主要观察指标包括客观缓解率(objective response rate,ORR)、疾病控制率(disease control rate,DCR)、无进展生存时间(progression-free survival,PFS)以及药物不良反应。结果:153例患者中64例复发时间在3~6月间,89例复发时间>6个月。86例患者一线治疗中接受过胸部放疗,有长期吸烟史者占70.58%(108/153)。总体ORR为35.94%,DCR为57.51%,平均PFS为4.72个月。复发时间>6个月的患者PFS较复发时间3~6月者有明显延长趋势(5.24个月vs 4.0个月,P<0.001),客观缓解率为40.45%vs 29.68%(P=0.015)。是否有长期吸烟史、一线联合放疗与否、方案中铂类的选择与PFS无明显相关性(P>0.05)。结论:对于敏感复发的ES-SCLC,尤其是治疗间歇期长于6月者,EP方案再治疗是可选的临床策略之一。

ATM单核苷酸多态性与放射性肺损伤的研究现状

放射性肺损伤是胸部肿瘤患者放疗后常见的毒副反应。研究发现,放射性肺损伤除了与放疗剂量等临床因素相关外,还与患者遗传因素密切相关。ATM(ataxia telangiectasia mutated,ATM)是重要的双链DNA修复蛋白,在放射线损伤细胞DNA双链时参与同源重组修复。ATM基因在人群中的遗传多态性与放疗后发生放射性肺损伤易感性有密切相关性。本文总结国内外最新研究进展,就ATM基因单核苷酸多态性与放射性肺损伤发生风险之间的关联性研究进行综述,为放射性肺损伤易感基因筛查及今后个体化放疗的实施提供参考。

程序性死亡蛋白配体1在CD133^(+)人肝癌干样细胞中的表达及功能研究

目的探讨肝癌干样细胞(LCSLC)中程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)的表达及其对LCSLC肿瘤干细胞特性和肿瘤生物学功能的影响,探索LCSLC中调控PD-L1表达变化的上游信号通路和PD-L1调控干细胞特性和肿瘤生物学功能的下游分子机制。方法采用无血清球培养法培养肝癌细胞HepG2,获得LCSLC。采用流式细胞术检测LCSLC中CD133等干性标志物分子的表达,Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测其干性特征分子和PD-L1的表达,细胞功能实验检测其肿瘤生物学功能,确认所获得的LCSLC具备肿瘤干细胞特性。以细胞信号通路抑制剂处理LCSLC,明确介导PD-L1表达变化的相关上游信号通路。利用小干扰RNA(siRNA)下调LCSLC中PD-L1的表达,检测干性特征分子的表达变化、LCSLC体内外肿瘤生物学功能变化以及下游细胞信号通路的变化。结果与普通HepG2细胞比较,LCSLC中CD133的表达率升高[分别为(92.78±6.91)%和(1.40±1.77)%,P<0.001],干性特征分子CD133、Nanog、Oct4A和Snai1的表达水平升高(均P<0.05),第7天的成球细胞数增多[分别为(395.30±54.05)个和(124.70±19.30)个,P=0.001],细胞迁移率升高[分别为(35.41±6.78)%和(10.89±4.34)%,P=0.006],穿膜细胞数增多[分别为(75.77±10.85)个/视野和(20.00±7.94)个/视野,P=0.002],克隆细胞数增多[分别为(120.00±29.51)个和(62.67±16.77)个,P=0.043],G_(0)/G_(1)期细胞数增多[分别为(54.89±3.27)个和(32.36±1.50)个,P<0.001]。小鼠成瘤实验显示,LCSLC组移植瘤的重量为(1.32±0.17)g,体积为(1779.0±200.2)mm^(3),均高于HepG2细胞组[分别为(0.31±0.06)g和(645.6±154.9)mm^(3),均P<0.001]。LCSLC中PD-L1蛋白表达水平为1.88±0.52,mRNA的表达水平为2.53±0.62,均高于HepG2细胞(均P<0.05)。细胞信号通路相关蛋白磷酸化信号传导及转录活化因子3(p-STAT3)和p-Akt在LCSLC中的表达水平高于HepG2细胞(均P<0.05),经抑制剂处理下调p-STAT3和p-Akt的表达后,PD-L1的表达亦随之下调(均P<0.05);相反,磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)在LCSLC中的表达水平低于HepG2细胞(P<0.01),经抑制剂处理下调其表达后,PD-L1的表达无明显变化(P>0.05)。siRNA敲低PD-L1的表达后,与siRNA-NC组比较,siRNA-PD-L1组LCSLC中CD133、Nanog、Oct4A和Snai1的表达均降低(均P<0.05),成球细胞数减少[分别为(45.33±12.01)个和(282.00±29.21)个,P<0.001],细胞迁移率降低[分别为(20.86±2.74)%和(46.73±15.43)%,P=0.046],穿膜细胞数减少[分别为(39.67±1.53)个/视野和(102.70±11.59)个/视野,P=0.001],克隆细胞数下降[分别为(57.67±14.57)个和(120.70±15.04)个,P=0.007],G0/G1期细胞数减少[分别为(37.68±2.51)个和(57.27±0.92)个,P<0.001],S期细胞数增多[分别为(30.78±0.52)个和(15.52±0.83)个,P<0.001]。小鼠成瘤实验显示,shRNA-PD-L1组的肿瘤重量为(0.47±0.12)g,体积为(761.3±221.4)mm^(3),均低于shRNA-NC组[分别为(1.57±0.45)g和(1829.0±218.3)mm^(3),均P<0.001]。同时,siRNA-PD-L1组LCSLC中p-STAT3和p-Akt的表达水平降低(均P<0.05),而p-ERK1/2和β-catenin的表达水平无明显变化(均P>0.05)。结论CD133^(+)LCSLC中PD-L1高表达,对于维持其干性特征、促进其肿瘤生物学功能具有重要意义。

晚期非小细胞肺癌特殊人群免疫治疗临床研究进展

相较于传统放化疗,免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor,ICI)的单药或联合治疗使晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者5年生存率显著提高。但由于严苛的入组标准,绝大多数前瞻性临床研究并未纳入晚期NSCLC患者中多种不同类型的特殊人群,如免疫功能受损(慢性病毒感染和免疫抑制剂使用)、免疫系统失调(自身免疫疾病和移植)、合并严重疾病(器官功能障碍与中枢神经系统转移)、高危(孕妇、高ECOG/PS评分以及高龄)患者。本文旨在系统回顾与梳理ICI药物在这类特殊人群中的安全性和疗效数据,为临床上更好地应用ICI药物提供参考。