去细胞神经移植物重建面神经缺损的研究进展

面神经损伤是较常见的周围神经损伤类型之一,面神经缺损的重建是亟待解决的重要问题。作为近年新兴的神经修复材料,去细胞神经移植物已应用于面神经修复的研究中,并取得了一系列进展。去细胞神经保留的基膜结构和细胞外基质除支撑作用外,还可以招募细胞或诱导细胞分化。去细胞技术的改进可以使神经移植物具有更好的生物活性和组织相容性。本文对去细胞技术和去细胞神经在面神经修复中的研究进展进行综述,以期为今后该领域的研究提供基础。

骨质疏松性头颈型股骨颈骨折股骨头的显微CT观察

目的对骨质疏松性头颈型股骨颈骨折的股骨头标本的结构性薄弱区展开研究,为股骨颈骨折发生机制的相关研究提供理论依据。方法对首都医科大学附属北京朝阳医院收集的头颈型股骨颈骨折的6个股骨头标本进行显微CT扫描,其中男性标本5个,女性标本1个;年龄68~82岁,平均(73.17±4.92)岁;左侧3个,右侧3个。在股骨头内周围区和股骨头外上区、骨折线最下区选取兴趣区进行重建和分析,比较骨形态结构参数。结果股骨头外上区与股骨头内周围区相比,骨小梁间隔、骨小梁厚度、骨小梁数量、结构模型指数、骨小梁连接密度、组织骨密度、体积骨密度、骨体积分数、骨表面积体积比,差异均无统计学意义(P>0.05)。三维重建图像显示股骨头外上区骨小梁间隔增加、厚度减少,骨小梁发生断裂、变细甚至消失,骨小梁结构更接近杆状。股骨颈骨折线最下区与股骨头内周围区相比,骨小梁厚度、骨密度以及骨体积分数增高,骨表面积体积比、结构模型指数减低,差异具有统计学意义(P<0.05),骨小梁间隔、数量以及骨小梁连接密度比较差异无统计学意义(P>0.05)。三维重建图像显示,与周围区相比,骨折线最下区内骨小梁厚度明显增加,骨小梁结构更接近板状。结论股骨头外上方结构存在一定程度薄弱,可能与骨折易由此处发生有关。骨折线最下方股骨颈中段内侧未显示骨质减弱。

脂肪干细胞向软骨细胞方向诱导的初步研究

目的 :研究脂肪干细胞的分离及向软骨方向定向诱导的方法。方法 :从成年兔颈后部或腹股沟处脂肪组织取材 ,酶消化法分离、培养脂肪干细胞 ;免疫荧光测定CD3 4 抗原的表达 ;流式细胞仪测定CD3 4 抗原百分比 ;分别用15 %牛血清、少血清 (5 % )及无血清诱导培养基定向软骨细胞方向诱导 ;组化及免疫组化鉴定软骨细胞特性。结果 :从兔脂肪组织中能分离出生长旺盛的干细胞 ,CD3 4 抗原表达阳性 ,表达百分比与骨髓干细胞无明显差异 ;定向诱导后表现出软骨细胞的特性 ,诱导效果无血清诱导培养基效果最好。结论 :从兔脂肪组织中能分离出干细胞 ;生物学特性与骨髓干细胞相似 ;能向软骨细胞方向诱导 ;无血清诱导培养基效果最好。

体外冲击波促进兔ACL重建后腱骨愈合的实验研究

[目的]观察采用体外冲击波(extracorporeal shock waves,ESW)治疗对ACL重建后腱骨愈合的影响。[方法]采用趾长伸肌肌腱建立兔ACL重建动物模型,2～3个月龄雌雄不限健康新西兰大白兔18只随机分为2组,ESW组ACL重建术后24h给予冲击波治疗,对照组ACL重建术后不给予冲击波处理,术后2、4、8周处死动物取标本做HE和Masson三色染色观察组织愈合病理学改变,血管墨汁灌注观察愈合组织新生血管含量。[结果]ESW组术后4周腱骨界面成纤维细胞和成软骨细胞增生活跃,胶原纤维合成明显增多、排列规则。术后8周腱骨界面由致密结缔组织连接,胶原纤维大量合成,呈垂直纵向规则排列,部分区域出现胶原纤维-纤维软骨组织-骨组织的移行带改变,形成类似韧带直接止点样结构。腱骨界面组织愈合较对照组迅速。术后4周和8周腱骨界面新生血管的含量ESW组显著高于对照组(P=0.028,P=0.008)。[结论]体外冲击波治疗可显著促进兔ACL重建后早期腱骨愈合。

骨髓基质细胞与关节软骨细胞生物学特性的比较研究

目的 观察兔骨髓基质细胞 (MSCs)诱导和基因修饰后的主要生物学特性 ,并与关节软骨细胞进行比较。 方法 抽取成年雄性新西兰大白兔髂骨骨髓 ,密度梯度离心获得骨髓基质细胞 ,培养传至第 5代 ,按处理方法分为常规培养液组 (A组 )、条件培养液组 (B组 )及重组缺陷型腺病毒携带肝细胞生长因子 c DNA转染组 (C组 )。条件培养液为常规培养液中含转化生长因子 - β1 (10 ng/ml)、碱性成纤维细胞生长因子 (2 5 ng/ml)和地塞米松 (10 - 7mol/L)。切取兔膝关节软骨 ,3mg/ml 型胶原酶消化传代培养至第 3代 (D组 )。观察原代 MSCs及第 5代 MSCs(体外培养 8～ 10周后 )细胞形态 ,对第 5代 MSCs及第 3代软骨细胞进行 、 型胶原免疫组织化学染色 ,MTT法检测细胞增殖情况。阿利新蓝法检测细胞培养上清液中糖胺多糖 (GAG)含量。提取各组培养细胞总 RNA,RT- PCR检测 、 型胶原表达。 结果 原代 MSCs为短梭形、簇状生长 ,传代细胞呈长梭形、旋涡样生长。A组细胞爬片 型胶原免疫组织化学染色阳性 , 型胶原免疫组织化学染色阴性 ,GAG含量低 ,与 D组比较 ,差异有统计学意义 (P<0 .0 5 )。B组细胞爬片 、 型胶原免疫组织化学染色阳性 ,GAG含量升高 ,与 D组比较差异无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ;C组转染后第

血管修复材料的一维拉伸实验研究

目的:从生物力学的角度筛选适合进行血管修复的生物材料。方法:选择兔的深筋膜、腹膜,和去抗原处理的脱细胞颈动脉、冷冻干燥颈动脉和经过戊二醛处理的犬股动脉、腹膜等进行一维力学拉伸实验,以兔正常的颈动脉、静脉作为对照。结果:所有组材料的力学强度都明显大于静脉对照组,深筋膜和腹膜组又显著大于其他组;伸长率、伸长比、Lagrange张应变检测值以静脉对照组和脱细胞组最大,经过戊二醛处理组的最小;经过戊二醛处理的组织材料,滞后环变化小且不明显,伸展性降低,脆性增加,但对破坏载荷和Lagrange张应力影响不大。结论:脱细胞、冻干颈动脉的力学性质和粘弹性最接近于正常血管,正常深筋膜组次之,而经过戊二醛处理的组织材料,力学强度虽好,但粘弹性较差。

修复周围神经缺损的组织工程研究

取有限的自体可牺牲的神经组织剥去外膜及束膜制成粗品雪旺氏细胞，并保留其中部分基质，与2％壳聚糖凝胶制成混合材料，加入外源性神经生长因子，注满硅胶管内用以套接修复大鼠坐骨神经10mm之缺损，术后12周神经电生理测试及再生神经横断面图像分析形态计量提示：比之单纯内含同样浓度神经生长因子的硅胶管套接修复，本法具有较好的功能效果及极显著高的形态计量结果，可望为临床修复神经缺损提供新的材料与方法。

周围神经损伤与再生:新型修补材料的应用研究与进展

背景:虽然自体神经移植是当前治疗大段神经缺损的金标准,但因其应用受到诸多限制,因此科学家从未放弃探索新型神经修补材料。目的:回顾近年来周围神经损伤领域产生的新观点、再生过程中的关键细胞及新型神经导管的应用。方法:由第一作者检索2001至2016年Pub Med数据库收录的与组织工程神经支架材料相关的文献,检索词为"peripheral nerve injury,peripheral nerve regeneration,nerve scaffold",按纳入、排除标准最后共纳入文献76篇进行综述。结果与结论:周围神经的修复主要集中在如何让再生的神经长得"快"与长得"准"上,未来除了应继续拓展开发生物相容性更好的材料外,还应优化设计,在分子细胞和组织层面多层次模拟神经再生微环境,模拟建立取向纳米结构、化学组分、生物信号时空分布等多重仿生神经移植物。应明确的是,神经导管不应只是简单的力学支撑,还应具有一定功能,如导电、细胞因子梯度缓释等。仿生也不应只局限于形态学上,还应拓展到如细胞因子的时空变化、细胞生物电刺激等方面上来。

经皮神经电刺激预防失神经肌萎缩的实验研究

目的:观察经皮神经电刺激(TENS)在减轻失神经肌肉萎缩和提高神经端侧缝合侧枝萌出率中的作用。方法:18只成年新西兰白兔,随机分为A、B、C3组,切断双侧腓神经后与外膜开窗的胫神经端侧缝合。左后肢为实验侧,给予TENS,持续6周。右后肢为对照侧,不给电刺激。分别于术后3、6、16周取材,进行大体观察、神经肌肉组织学、神经电生理、肌湿重和透射电镜检查。结果:各组实验侧胫前肌湿重和肌纤维截面积,腓神经有髓纤维数、传导速度和振幅均高于对照侧(P<0.05),A组两侧肌湿重及C组腓神经潜伏期差异无显著性(P>0.05)。结论:TENS在减轻失神经肌肉萎缩和提高神经端侧缝合侧枝萌出率方面有积极作用。

白细胞介素-12临床应用研究进展

白细胞介素-12(IL-12)最初称作自然杀伤细胞刺激因子(NKSF)或细胞毒性淋巴细胞成熟因子(CLMF),是一种异二聚体细胞因子。直接使用重组蛋白IL-12或转基因载体都有显著的抗肿瘤作用,它通过诱发NK,NKT和T细胞增殖活化而介导主动和被动免疫保护反应。除此之外,通过趋化因子IP-10诱生IFN-γ阻止肿瘤血管发生。在动物肿瘤模型中,IL-12对移植瘤、化学诱变瘤及自发肿瘤均有明显治疗作用。IL-12可以刺激抗原特异性免疫反应而促进Th1和CTL的消瘤作用。大量的临床治疗肿瘤试验表明,IL-12在抗肿瘤方面效果明显。治疗中出现的不良反应应引起重视,需要制定合理的治疗方案以降低毒副反应确保临床效果。

表面改性TiNi记忆合金棒的回复力学实验研究

采用直径为6～7mm钛铌涂层TiNi记忆合金棒与未经表面改性的TiNi记忆合金棒。相变温度平均为33．0℃．低温下在三点弯卡具上进行预弯．挠度分别为5．0、10．0、15．0和20．0mm，保持位移恒定．分别在37℃及50℃的生理盐水溶液恒温水浴箱中测量其三点弯回复力变化特性。结果表明，TiNi记忆合金棒的回复力随回复温度、棒直径、变形量增加而增加；经钛铌表面喷涂后6mm及6．5mm棒的回复力有一定降低，但7mm棒回复力没有显著性差异。依照以上数据可以为临床设计脊柱侧弯矫形棒提供参考。

乳鼠心肌细胞的体外培养及生物学特性研究

目的探讨乳鼠心肌细胞的体外培养方法并对其生物学特性进行观察。方法1～3日龄新生SD大鼠10只,用无酶消化法行含血清培养基原代心肌细胞培养,连续观察细胞生长及传代情况40天。α-横纹肌肌动蛋白抗体标记培养细胞,以流式细胞仪行心肌细胞纯度鉴定,Giemsa染色观察培养心肌细胞形态,吖啶橙-碘化丙啶(AO-PI)染色法检测培养细胞活性。记录培养心肌细胞总数,计算单个乳鼠心脏细胞产量。结果原代组织块和单个心肌细胞在接种后24～48h贴壁,其中部分出现搏动并持续至观察期末。培养细胞群鉴定心肌细胞纯度为94.1%,活细胞比例95.3%,95%可信区间(CI)为91.6%～99.0%。平均每个乳鼠心脏单细胞产量为3.3×106个,95%CI为2.1×106～4.5×106个。结论无酶消化法培养的乳鼠心肌细胞纯度、活力及产量能够满足心肌细胞研究的需要。

软骨细胞形态、表型与胞间通讯研究

目的 探讨体外培养下新生兔软骨细胞的缝隙连接与软骨细胞形态、表型的关系。方法 向 96孔板内的第 5代新生兔膝关节软骨细胞培养基内加入荧光染料 CFDA- AM,激光共聚焦显微镜测量不同形态的单个软骨细胞内的荧光强度 ;以激光淬灭软骨细胞内的荧光后定时测量荧光恢复曲线。将因股骨颈骨折行人工关节置换的人股骨头关节软骨切成 2 0μm薄片 ,同样加入荧光染料后测定激光淬灭前后荧光强度。结果 各种形态的扁平状软骨细胞摄入CFDA- AM后平均荧光强度差异很大平均 83(1～ 2 74 ) ,平均值明显低于单个球形软骨细胞者平均 2 0 5 7(340～ 35 38) ;只有集落中央的球形软骨细胞才有逐渐的荧光恢复 ;但关节软骨陷窝内软骨细胞内的荧光经激光淬灭后可以恢复。结论 软骨细胞的形态影响其荧光染料的摄入量 ;缝隙连接只出现在球形软骨细胞之间 ,与软骨细胞的特有表型同时出现 ;股骨头人关节软骨陷窝内的软骨细胞间有缝隙连接存在 。

股骨上段髓腔解剖学研究进展

随着人工髋关节置换术的广泛开展和随访时间的延长,与假体有关的并发症也明显增多,其原因虽然多种多样,但假体的设计不合理是其重要原因之一.在我国使用的多是西方国家设计生产的假体,由于国人股骨髓腔等形态与西方人种的差异,常出现不完全匹配的情况,所以研究国人股骨上段髓腔的形态学特点,设计制造适合的人工髋关节就成了一个十分重要的课题,这对于提高人民健康水平,以及加入WTO以后提高我国民族工业的竞争实力都有着十分重要的意义.为此我国学者相继开展了一系列的研究工作,现就有关研究进行简要综述.

基于显微CT的骨微观三维变形场测量系统的研究

目的初步构建一套集成显微CT与力学加载装置的测试系统,结合数字体相关技术(digital volume correla-tion,DVC)实现骨组织内部微观三维变形场的测量。方法选用微型力学加载装置进行单轴压缩试验,维持载荷不变的同时对试样进行CT扫描;采用DVC方法对连续CT图像序列进行相关匹配和搜索计算,测量载荷变化前后试样内部结构沿三维方向的微观位移值;通过零位移重复扫描和刚体平移评价该系统的测量精度及准确度;利用该系统测试牛松质骨块的三维位移场分布。结果零位移重复扫描结果显示该系统测量加载方向的位移准确度最高,测量精度低于CT扫描分辨率的1/10;刚体平移结果显示计算位移标准差为0.001～0.002μm;松质骨块测试区域在600 N载荷作用下沿加载方向的微观位移范围为100.35～110.25μm,位移场呈现多层逐级分布。结论该系统能够满足数字体相关法测量位移的准确度及精度要求,能够实现骨组织内部微观结构的三维变形场测量,可以作为进一步研究骨组织内部变形分布与结构成分响应关系的测量平台。

腰椎椎管狭窄症的生物力学研究

目的：从生物力学角度对腰椎椎管狭窄症的病因、病理、临床表现、诊断和手术治疗进行研究。方法：采用三维有限元模型、三维运动学测量、腰椎尸体测量、影像学测量等方法，探讨腰椎椎管狭窄症的生物力学改变，并对该疾病手术治疗作改进。结果：椎间盘纤维环后外侧、椎体后表面、椎弓根部、椎弓峡部和关节突关节等部位均产生明显的应力集中，而椎间盘退变及腰椎后伸均使这一趋势加剧。后部结构切除手术对于腰椎的生物力学行为有明确的影响。改进的手术术式取得了满意的临床疗效。结论：腰椎的应力集中是导致退行性腰椎椎管狭窄的主要原因，椎间盘退变是这一过程的起始环节，而腰椎的后伸又加重了病情。功能位摄片及功能性脊髓造影有助于腰椎椎管狭窄症的诊断。手术治疗应在彻底减压基础上尽量减少对后部结构的破坏，减压后植骨融合是一种行之有效的方法。对于发育性椎管狭窄合并椎间盘突出者，可经椎板间开窗行单纯椎间盘切除手术。

BMP-2基因转染兔骨骼肌干细胞修复骨缺损实验研究

目的探讨AdrhBMP 2修饰的兔骨骼肌干细胞(RRSMSCs)为种子细胞、脱钙骨基质(DBM)为支架材料构建组织工程化人工骨修复兔桡骨大段骨缺损的可行性。方法建立兔桡骨干骨缺损(20 mm)模型,50 只新西兰兔分为5 组:AdrhBMP- 2 转染RSMSCs/DBM组(A组)、AdGFP转染RSMSCs/DBM组(B组)、未转染RSMSCs/DBM组(C组)、单纯DBM组(D组)和对照组(E组)。术后4周和6周分别行骨密度、X线、生物力学及组织学检查。结果术后4周,A组骨修复达到X线愈合标准,但髓腔不通;术后6周,各组的愈合率分别为A组100%、B组50%、C组33%,D组和E组为0。结论AdrhBMP -2 修饰的RSMSCs为种子细胞、DBM为支架材料构建的基因强化组织工程骨能修复兔桡骨长20 mm的大段骨缺损,为临床上大范围骨缺损的修复提供了一种更为有效的方法和材料。