表达H5N1亚型禽流感HA、NA、M1基因的重组杆状病毒的鉴定

为证实插入了禽流感HA、NA和M1基因的重组杆状病毒(VLP01株)能表达HA、NA和M1蛋白并自行组装成具有禽流感形态的病毒样颗粒,对VLP01株的细胞培养上清进行离心纯化或透析处理,获得的表达产物用电镜、Western Blot、ELISA进行鉴定。电镜观察表达产物,可见禽流感病毒样颗粒;以Western Blot方法用HA、NA和M1抗体分别检测表达产物,可见特异性条带;以NA多抗为捕获抗体、HA单抗为检测抗体建立双抗体夹心ELISA方法检测表达产物,结果为阳性,说明表达产物为同时含有HA蛋白和NA蛋白的病毒样颗粒。结果显示,VLP01株能够表达HA、NA和M1蛋白,并自行组装成禽流感病毒样颗粒分泌到细胞培养上清中。