目的建立特异、稳定且可靠的血浆microRNA（miRNAs）实时荧光定量PCR技术。方法收集10例健康人血浆标本,采用mirVanaTM PARIS kit试剂盒法提取血浆miRNAs,以miRNA特异的茎环引物引导逆转录,通过SYBR Green实时荧光定量聚合酶链反应（PC...目的建立特异、稳定且可靠的血浆microRNA（miRNAs）实时荧光定量PCR技术。方法收集10例健康人血浆标本,采用mirVanaTM PARIS kit试剂盒法提取血浆miRNAs,以miRNA特异的茎环引物引导逆转录,通过SYBR Green实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）对外参照cel-miR-39、cel-miR-238及血浆miR-342-3p进行检测。结果健康人血浆miR-342-3p及外参cel-miR-39、cel-miR-238可以实现特异性扩增及定量。溶解曲线显示10例健康人血浆标本中cel-miR-39、cel-miR-238和miR-342-3p扩增产物分别在81.44、81.62、82.71℃时出现单一峰,无引物二聚体峰和其他非特异峰出现。血浆miR-342-3p批内批间重复性实验的标准差在0.13～0.20、变异系数（CV）在0.42%～0.66%,显示该方法重复性较好。以cel-miR-39、cel-miR-238作为外参照,同一血浆标本miR-342-3p的5次检测结果ΔCt的标准差为0.22、CV为1.68%,说明cel-miR0-39、cel-miR-238可作为血浆miRNAs实时荧光定量PCR检测的稳定外参。结论实时荧光定量PCR技术可作为研究血浆miRNAs较好的技术平台。展开更多
文摘目的建立特异、稳定且可靠的血浆microRNA（miRNAs）实时荧光定量PCR技术。方法收集10例健康人血浆标本,采用mirVanaTM PARIS kit试剂盒法提取血浆miRNAs,以miRNA特异的茎环引物引导逆转录,通过SYBR Green实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）对外参照cel-miR-39、cel-miR-238及血浆miR-342-3p进行检测。结果健康人血浆miR-342-3p及外参cel-miR-39、cel-miR-238可以实现特异性扩增及定量。溶解曲线显示10例健康人血浆标本中cel-miR-39、cel-miR-238和miR-342-3p扩增产物分别在81.44、81.62、82.71℃时出现单一峰,无引物二聚体峰和其他非特异峰出现。血浆miR-342-3p批内批间重复性实验的标准差在0.13～0.20、变异系数（CV）在0.42%～0.66%,显示该方法重复性较好。以cel-miR-39、cel-miR-238作为外参照,同一血浆标本miR-342-3p的5次检测结果ΔCt的标准差为0.22、CV为1.68%,说明cel-miR0-39、cel-miR-238可作为血浆miRNAs实时荧光定量PCR检测的稳定外参。结论实时荧光定量PCR技术可作为研究血浆miRNAs较好的技术平台。
