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血管内皮生长因子基因转染的人脂肪干细胞具有较强的增殖和分化能力 被引量:7
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作者 陈犹白 张启旭 +4 位作者 Charles E.Butler 吴叶文 张丽萍 董江陵 韩岩 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期352-356,361,共6页
目的研究过表达血管内皮生长因子(VEGF)对人脂肪干细胞(hADSC)的细胞表型、增殖能力和多向分化潜能的影响。方法利用脂质体法将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转染第2代hADSC,对照组为脂质体空载体。免疫荧光染色验证转染成功,流式细胞术检测两... 目的研究过表达血管内皮生长因子(VEGF)对人脂肪干细胞(hADSC)的细胞表型、增殖能力和多向分化潜能的影响。方法利用脂质体法将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转染第2代hADSC,对照组为脂质体空载体。免疫荧光染色验证转染成功,流式细胞术检测两组细胞表型的差异,MTT法检测细胞增殖能力,诱导其成脂和成骨分化并进行油红O和茜素红染色。结果转染组可见EGFP和VEGF的表达,对照组无EGFP表达。两组细胞均高表达CD29、CD44、CD90,低表达CD31、CD45。转染组hADSC的增殖能力显著强于对照组,且诱导分化后的脂滴和钙结节的数量和面积均显著高于对照组。结论过表达VEGF可增强hADSC的增殖能力,促进其成脂和成骨分化,但并未显著改变细胞表型。 展开更多
关键词 人脂肪干细胞(hADSC) 血管内皮细胞生长因子 转染 增殖 分化
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MAGE-A9结构域缺失突变体对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响 被引量:2
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作者 周欣亮 桑梅香 +4 位作者 单保恩 连易水 丁春艳 刘贤德 陈文雪 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期721-728,共8页
背景与目的:人类黑色素瘤相关抗原(melanoma antigen gene,MAGE)是癌-睾丸抗原(cancer/testis antigens,CTA)家族中一组很典型的成员,除睾丸外几乎在正常成年组织中均不表达,但在很多种肿瘤组织中高表达,因此被认为是一种肿瘤特异性抗原... 背景与目的:人类黑色素瘤相关抗原(melanoma antigen gene,MAGE)是癌-睾丸抗原(cancer/testis antigens,CTA)家族中一组很典型的成员,除睾丸外几乎在正常成年组织中均不表达,但在很多种肿瘤组织中高表达,因此被认为是一种肿瘤特异性抗原,其中MAGE-A家族包括12个成员,分别为MAGE-A1~MAGE-A12。本研究旨在观察4种MAGE-A9结构域缺失突变体pcDNA3.1 MAGE-A9(1~29)、pcDNA3.1MAGE-A9(1~114)、pcDNA3.1 MAGE-A9(115~285)、pcDNA3.1 MAGE-A9(286~315)对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。方法:构建以上4种MAGE-A9结构域缺失突变体,转染4种MAGE-A9的结构域和对照组Myc-His-pcDNA3.1(-),采用RT-PCR方法检测MCF-7细胞中MAGE-A9各结构域的表达,并用MTT和克隆形成的方法观察MAGE-A9结构域缺失突变体对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。结果:与对照组Myc-His-pcDNA3.1(-)组相比,MAGE-A9结构域缺失突变体pcDNA3.1 MAGE-A9(1~29)组、pcDNA3.1 MAGE-A9(1~114)组和pcDNA3.1MAGE-A9(286~315)组没有导致克隆形成率的明显变化(P>0.05),而pcDNA3.1 MAGE-A9(115~285)导致克隆形成率的明显增加(P<0.05)。结论:pcDNA3.1 MAGE-A9(115~285)能增加乳腺癌MCF-7细胞株的增殖,表明MAGE-A9(115~285)可能为MAGE-A9的功能区域。 展开更多
关键词 MAGE—A9 结构域缺失突变体 MCF-7 增殖
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细胞自噬的调节机制与选择性降解(英文) 被引量:4
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作者 刘贤德 周欣亮 +2 位作者 单保恩 桑梅香 陈文雪 《徐州师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2010年第4期1-7,共7页
细胞自噬是一个多步骤的降解过程.当细胞自噬发生时,具有双层膜结构的自噬小体先把待降解的细胞内容物包裹起来,然后与溶酶体融合将内容物降解.细胞自噬起初仅被认为是对营养缺乏的适应性机制,是一个非选择性降解过程.近些年来不断深入... 细胞自噬是一个多步骤的降解过程.当细胞自噬发生时,具有双层膜结构的自噬小体先把待降解的细胞内容物包裹起来,然后与溶酶体融合将内容物降解.细胞自噬起初仅被认为是对营养缺乏的适应性机制,是一个非选择性降解过程.近些年来不断深入的研究表明,细胞自噬同时还参与了抵抗炎症、肿瘤、神经退行性变及心脏病等重要生理过程.随着细胞自噬受体蛋白p62的发现,人们进一步认识到细胞自噬还是一个具有高度选择性的降解过程.本文综述了细胞自噬的调节机制及其对一些蛋白聚合体的选择性降解. 展开更多
关键词 细胞自噬 P62 调节 选择性降解
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DOTAP脂质体介导VEGF基因转染人脂肪干细胞及目的基因的表达 被引量:6
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作者 陈犹白 张启旭 +5 位作者 Butler C E 吴叶文 张丽萍 董江陵 陈聪慧 韩岩 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS 北大核心 2016年第12期966-971,共6页
目的:研究脂质体介导的血管内皮生长因子(VEGF)基因转染人脂肪干细胞(hASCs)及VEGF的表达。方法:胶原酶消化吸脂术脂肪,收获细胞沉淀,培养至第4代时利用流式细胞术检测细胞表型,并诱导其成脂成骨分化,鉴定为hASCs。转染组利用DOTA... 目的:研究脂质体介导的血管内皮生长因子(VEGF)基因转染人脂肪干细胞(hASCs)及VEGF的表达。方法:胶原酶消化吸脂术脂肪,收获细胞沉淀,培养至第4代时利用流式细胞术检测细胞表型,并诱导其成脂成骨分化,鉴定为hASCs。转染组利用DOTAP脂质体将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转入hASCs,对照组为脂质体空载。免疫荧光染色检测hASCs内VEGF的表达,ELISA检测上清液中VEGF浓度的变化。结果:1ml吸脂术脂肪可得到(4.38±0.21)×10^5个细胞,第4代时hASCs高表达CD90(81.49%),低表达CD19(6.37%)、CD31(14.91%)、CD34(17.56%)和CD45(15.39%),诱导分化后油红O和茜素红染色均呈阳性。分光光度计显示质粒DNA浓度为595ng/μl。转染组hASCs表达GFP和VEGF,转染效率为(43.69±18.53)%;对照组不表达GFP,但表达较低的VEGF。转染组VEGF的光密度是对照组的2.13倍,其上清液中的VEGF浓度随时间显著上升,与对照组相比差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:DOTAP脂质体可成功将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转入hASCs,转染后的VEGF表达和分泌水平显著提高。 展开更多
关键词 吸脂术 脂肪干细胞 血管内皮生长因子 转染 脂质体
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表儿茶素对牛磺酸脱氧胆酸诱导Huh7细胞凋亡的作用 被引量:8
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作者 余晶 Vladimir Khaoustov +1 位作者 徐玉敏 Boils Yoffe 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1272-1275,共4页
目的:探索表儿茶素对牛磺酸脱氧胆酸诱导Huh7细胞凋亡的抑制作用及其作用机制。方法:对牛磺酸脱氧胆酸(TDCA)400μmol.L-1和表儿茶素干预培养48 h的Huh7细胞,应用MTT法检测细胞活力,荧光探针测定细胞内活性氧(ROS)生成量,荧光caspase-3/... 目的:探索表儿茶素对牛磺酸脱氧胆酸诱导Huh7细胞凋亡的抑制作用及其作用机制。方法:对牛磺酸脱氧胆酸(TDCA)400μmol.L-1和表儿茶素干预培养48 h的Huh7细胞,应用MTT法检测细胞活力,荧光探针测定细胞内活性氧(ROS)生成量,荧光caspase-3/7分析法探测细胞凋亡,免疫蛋白印迹测定促凋亡蛋白Bax,细胞色素C和磷酸化p38蛋白激酶含量。结果:TDCA孵育可诱导Huh7细胞凋亡,存活率下降(54.24±2.20)%,细胞经表儿茶素与TDCA共孵育后,细胞存活率提高到(85.64±0.84)%;表儿茶素能显著抑制TDCA引起的Huh7细胞ROS生成,caspase-3/7蛋白酶活性升高。ROS生成下降54.2%,caspase-3/7活性下降52.3%(P<0.01)。表儿茶素抑制TDCA诱导Huh7细胞凋亡随剂量增加抑制作用加强。表儿茶素抑制TDCA诱导促凋亡蛋白Bax表达,细胞色素C释放及p38蛋白激酶磷酸化。结论:表儿茶素抑制TDCA诱导Huh7细胞线粒体损伤而导致的细胞凋亡。其作用机制是通过减少细胞内活性氧和促凋亡蛋白Bax生成,抑制细胞色素C释放及p38蛋白激酶磷酸化。 展开更多
关键词 表儿茶素 牛磺酸脱氧胆酸 活性氧 凋亡
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