丹酚酸B通过线粒体凋亡途径干预动脉粥样硬化的作用机制研究

目的探讨丹酚酸B通过线粒体凋亡途径干预动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的作用机制。方法将小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养后分为空白组,细胞色素C(Cytochrome C,cytC)组,丹酚酸B低、中、高浓度组。各组干预时间均为24h。用噻唑蓝(MTT)实验检测细胞存活率,并用流式细胞仪检测细胞凋亡率。采用蛋白免疫印迹(Western Blotting)法分别检测cytC的释放和B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)、半胱天冬氨酸蛋白酶-9(Cysteinyl aspartate specific proteinase-9,Caspase-9)和Bcl-2相关X蛋白质(Bcl-2-associated X protein,Bax)蛋白表达水平。结果与空白组比较,cyt C组细胞活性降低(P<0.05),细胞平均凋亡率较高(P<0.05);cyt C组中促凋亡蛋白cyt C、Bax、Caspase-3及Caspase-9的表达均升高(P<0.05),抑凋亡蛋白Bcl-2的表达下降(P<0.05)。与cytC组比较,丹酚酸B低、中浓度组细胞活性均上升(P<0.01,P<0.05),各组促凋亡蛋白cytC、Bax、Caspase-3及Caspase-9表达均下降(P<0.01,P<0.05),丹酚酸B中、低浓度组细胞中抑凋亡蛋白Bcl-2的表达升高(P<0.01)。丹酚酸B中、高浓度组与空白组细胞平均凋亡率比较,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论丹酚酸B通过降低cytC、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达抑制cytC诱导的RAW264.7细胞凋亡,发挥在AS发展进程中改善粥样斑块沉积的作用,可能与抑制线粒体凋亡途径相关。

金钗石斛根茎叶转录组测序及木脂素合成相关基因分析

目的 研究金钗石斛根、茎、叶基因表达差异情况,同时分析木脂素合成途径关键酶基因表达特性,为金钗石斛木脂素合成分子机制研究提供参考。方法 以金钗石斛为材料,分别提取根、茎、叶的总RNA,利用DNBSEQ平台进行转录组测序及生物信息学分析。结果 金钗石斛根和叶相比差异表达基因较多,叶和茎相比差异表达基因较少,有879个基因是3个样本比较组所共有的。GO分类中差异表达基因主要富集在生物学过程中,KEGG富集分析中差异表达基因主要被富集到α-亚麻酸代谢途径、甘油磷脂代谢途径、氰基氨基酸代谢途径等途径中。在木脂素合成相关基因中,发现2个CAD基因、1个DIR基因、4个UGT基因在根、茎、叶中的表达模式与木脂素含量分布一致。结论 该研究获得了金钗根、茎、叶中差异表达基因信息,筛选到了与木脂素合成相关基因,初步构建了金钗石斛木脂素合成网络图,为开展金钗石斛木脂素合成分子机制研究提供数据支持。

铁皮石斛DoPLR基因的克隆、序列分析及表达分析

目的进一步阐明铁皮石斛(Dendrobium officinale)中木脂素生物合成的分子调控机制,克隆铁皮石斛木脂素合成关键酶基因DoPLR,分析其序列特征及表达模式。方法根据NCBI中铁皮石斛PLR基因序列设计特异引物,利用PCR技术克隆铁皮石斛DoPLR基因,利用生物信息学软件分析DoPLR基因及编码蛋白的结构特征。利用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测DoPLR基因在铁皮石斛不同组织部位、不同非生物胁迫、不同激素处理等情况下的表达模式。结果克隆获得铁皮石斛DoPLR基因,该基因的开放阅读框(ORF)长度为933bp,编码310个氨基酸,蛋白相对分子质量和等电点分别为36.4 KDa和6.54;该蛋白含有NAD(P)~+结合结构域,为亲水性蛋白,可能在细胞核中发挥作用,有29个磷酸化位点;该蛋白二级结构含有37.42%的α-螺旋、7.42%的β-折叠、36.77%的无规则卷曲和18.39%的延伸链;聚类分析表明该蛋白与亚麻LuPLR蛋白聚在一个分支上;互作蛋白分析表明丝氨酸苏氨酸蛋白激酶、转录因子bHLH63等蛋白可能与该蛋白发挥作用密切相关;qRT-PCR结果表明,DoPLR基因在不同组织部位、不同激素处理、不同非生物胁迫下的表达模式均存在差异,推测该基因可能参与铁皮石斛对非生物胁迫和激素的响应。结论克隆获得了铁皮石斛DoPLR基因,分析了其序列特征和表达模式,为深入研究DoPLR基因的功能和铁皮石斛木脂素生物合成分子机制奠定基础。