miR-146a-5p对无水乙醇刺激的胃黏膜上皮细胞的保护作用

目的 研究miR-146a-5p对无水乙醇刺激的胃黏膜上皮细胞的保护作用。方法 选取胃黏膜上皮细胞(GES-1),将细胞分为空白组和模型组,通过无水乙醇刺激建立胃溃疡模型。采用MTT法检测两组细胞增殖率,RT-qPCR检测miR-146a-5p、白细胞介素1受体关联激酶1(IRAK1)、核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)和白细胞介素6(IL-6)的表达水平,Western blot检测IRAK1、NF-κB p65和IL-6蛋白的表达,ELISA法检测两组细胞中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6和白细胞介素10(IL-10)的含量。采用Targetscan数据库预测miR-146a-5p的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因实验验证靶基因。进一步通过过表达和敲减miR-146a-5p后观察靶点蛋白的变化,以确定miR-146a-5p和靶点蛋白的调控关系。过表达miR-146a-5p和敲减IRAK1后,Western blot检测IRAK1、NF-κB p65和IL-6蛋白的表达,ELISA法检测细胞中炎症因子TNF-α、IL-6和IL-10的含量。结果 MTT结果表明,与空白组相比,模型组细胞活性显著下降(P<0.01)。与空白组相比,模型组miR-146a-5p表达显著降低,IRAK、NF-κB p65和IL-6 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01)。Targetscan数据库预测miR-146a-5p的靶基因为IRAK1,双荧光素酶结果表明miR-146a-5p可与IRAK1靶向结合,且miR-146-5p可负向调控IRAK1蛋白表达。过表达miR-146a-5p和敲减IRAK1均可显著降低TNF-α和IL-6表达,升高IL-10表达(P<0.05)。结论 miR-146a-5p能够通过抑制IRAK1抑制无水乙醇诱导的GES-1细胞释放炎症因子,保护胃黏膜。