红霉素通过IGPD干预木糖葡萄球菌生物被膜形成机制的研究

为探究红霉素通过咪唑甘油磷酸酯脱水酶(IGPD)干预木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)生物被膜形成的机制,本试验采用肉汤微量稀释法测定红霉素对木糖葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC);采用结晶紫染色和扫描电镜试验检测红霉素对木糖葡萄球菌生物被膜的作用;利用Real-time PCR、酶活性测定、组氨酸含量测定等试验检测红霉素对IGPD的调控作用;采用分子对接和等离子共振试验验证红霉素与IGPD的直接相互作用。结果显示:红霉素MIC为1.6μg/mL,1/2 MIC(0.8μg/mL)的红霉素可以在不影响细菌生长的情况下极显著抑制生物被膜的形成(P<0.01);1/2 MIC(0.8μg/mL)的红霉素可以极显著抑制IGPD基因(hisB)的表达(P<0.01),同时显著降低IGPD的酶活性(P<0.05)和组氨酸含量(P<0.05);分子对接结果显示,红霉素可以与IGPD的氨基酸Arg88、Ser108、Leu40、Phe43、Glu162和Glu66位点结合;等离子共振试验结果显示,红霉素与IGPD可以直接结合。结果表明,红霉素可能通过调控IGPD及与其直接结合两方面作用,从而抑制木糖葡萄球菌生物被膜的形成。本试验结果为进一步明确红霉素干预木糖葡萄球菌生物被膜形成的机制及寻找干预木糖葡萄球菌生物被膜形成的药物靶点提供科学依据。

OAT1/3在肾小管表达差异及竞争性抑制对急性马兜铃酸Ⅰ肾小管损伤的影响

目的 通过丙磺舒(PRB)抑制有机阴离子转运蛋白(OAT)1和3,观察马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)对大鼠肾小管上皮细胞的急性损伤,以探究AAⅠ进入肾小管上皮细胞的途径。方法雄性SD大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照(PEG300)组、PRB(150 mg·kg^(-1))组、AAⅠ(80 mg·kg^(-1))组、AAⅠ(80 mg·kg^(-1))+PRB(150mg·kg^(-1))组,每2天ig给药1次,连续给药4次。观察大鼠肾脏指数;生化仪检测血清肌酐(CREA)和尿素氮(BUN)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理学变化;免疫组化染色观察OAT1和OAT3在肾小管的组织定位和蛋白表达水平;免疫透射电镜观察OAT1和OAT3在肾小管上皮细胞的亚细胞定位和表达水平。结果 与溶剂对照组相比,AAⅠ组肾脏指数、CREA和BUN水平显著增加(P<0.01、0.001);AAⅠ+PRB组与AAⅠ组相比,肾脏指数、CREA和BUN水平显著降低(P<0.05、0.001)。HE染色结果显示,与溶剂对照组相比,AAⅠ组肾近端小管上皮细胞(PCTEC)出现空泡样变性、微绒毛脱落以及片状坏死脱落,而AAⅠ+PRB组与AAⅠ组相比,PCTEC空泡样变性率下降,无其他类型病理学变化;另外,肾远端小管上皮细胞(DCTEC)AAⅠ组与AAⅠ+PRB组呈现少量空泡样变性。免疫组化和电镜结果显示,OAT1主要在PCTEC基底膜侧表达,OAT3主要在DCTEC基底膜侧表达,且AAⅠ暴露后,与溶剂对照组比较,前者在近端小管(PCT)表达有下降趋势(P<0.05),后者在远端小管(DCT)表达有上升趋势(P<0.05)。结论 AAⅠ能够导致PCT和DCT的损伤,PRB抑制OAT1和OAT3后,能够改善肾脏功能,并减少肾小管上皮细胞的病理学损害;OAT1可能是AAⅠ进入PCTEC的主要通道,而OAT3则可能是其进入DCTEC的主要通道。