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结核分枝杆菌异烟肼耐药基因(katG)调控蛋白的表达
1
作者
袁薇
陈旭
+3 位作者
赵兵兵
魏川川
许士池
刘英
《医学动物防制》
2021年第4期374-377,共4页
目的katG基因表达异常对一线抗痨药物异烟肼的耐药性意义重大,克隆并表达结核分枝杆菌katG基因的调控蛋白—furA、katG、senX3和regX3,有助于探讨其耐药机制。方法以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA序列为模板,设计furA、katG、senX...
目的katG基因表达异常对一线抗痨药物异烟肼的耐药性意义重大,克隆并表达结核分枝杆菌katG基因的调控蛋白—furA、katG、senX3和regX3,有助于探讨其耐药机制。方法以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA序列为模板,设计furA、katG、senX3和regX3四种基因的特异性引物,分别进行PCR扩增,获得目的基因,通过克隆载体pMD19-T构建重组质粒,转化E coli DH5α,经DNA测序并与Gen Bank进行比对分析验证,质粒酶切后再亚克隆到表达载体pET42a(+),转化BL21(DE3)中,IPTG诱导重组目的蛋白表达,SDS-PAGE电泳分析重组蛋白大小,Western Blot鉴定表达情况。结果PCR扩增出furA、katG、senX3和regX3基因,成功构建重组质粒pET42a(+)-furA、pET42a(+)-katG、pET42a(+)-senX3、pET42a(+)-regX3,0.5 mmol/L IPTG诱导表达重组蛋白,经SDS-PAGE电泳和Western Blot验证,furA重组蛋白在23 KD、regX3重组蛋白在28 KD、senX3重组蛋白在46 KD和katG重组蛋白在80 KD处分别出现蛋白条带,重组蛋白主要以可溶形式表达。结论应用分子生物学技术成功构建furA、katG、senX3和regX3基因原核表达系统,并获得相应重组蛋白,为进一步研究其结构和功能,探讨以katG为核心的异烟肼耐药机制奠定基础。
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关键词
结核分枝杆菌
基因克隆
KATG基因
二元信号转导系统
蛋白表达
耐药
原文传递
题名
结核分枝杆菌异烟肼耐药基因(katG)调控蛋白的表达
1
作者
袁薇
陈旭
赵兵兵
魏川川
许士池
刘英
机构
贵州
省疾病预防控制中心结核病防治研究所
贵州中医药大学附属二院
出处
《医学动物防制》
2021年第4期374-377,共4页
基金
贵州省科技计划项目(黔科合支撑[2018]2762,黔科合基础[2019]1186号)。
文摘
目的katG基因表达异常对一线抗痨药物异烟肼的耐药性意义重大,克隆并表达结核分枝杆菌katG基因的调控蛋白—furA、katG、senX3和regX3,有助于探讨其耐药机制。方法以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA序列为模板,设计furA、katG、senX3和regX3四种基因的特异性引物,分别进行PCR扩增,获得目的基因,通过克隆载体pMD19-T构建重组质粒,转化E coli DH5α,经DNA测序并与Gen Bank进行比对分析验证,质粒酶切后再亚克隆到表达载体pET42a(+),转化BL21(DE3)中,IPTG诱导重组目的蛋白表达,SDS-PAGE电泳分析重组蛋白大小,Western Blot鉴定表达情况。结果PCR扩增出furA、katG、senX3和regX3基因,成功构建重组质粒pET42a(+)-furA、pET42a(+)-katG、pET42a(+)-senX3、pET42a(+)-regX3,0.5 mmol/L IPTG诱导表达重组蛋白,经SDS-PAGE电泳和Western Blot验证,furA重组蛋白在23 KD、regX3重组蛋白在28 KD、senX3重组蛋白在46 KD和katG重组蛋白在80 KD处分别出现蛋白条带,重组蛋白主要以可溶形式表达。结论应用分子生物学技术成功构建furA、katG、senX3和regX3基因原核表达系统,并获得相应重组蛋白,为进一步研究其结构和功能,探讨以katG为核心的异烟肼耐药机制奠定基础。
关键词
结核分枝杆菌
基因克隆
KATG基因
二元信号转导系统
蛋白表达
耐药
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
Gene cloning
katG gene
Two-component signal transduction system
Protein expression
Drug resistonce
分类号
R378.911 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
结核分枝杆菌异烟肼耐药基因(katG)调控蛋白的表达
袁薇
陈旭
赵兵兵
魏川川
许士池
刘英
《医学动物防制》
2021
0
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