下调lmna基因对斑马鱼胚胎髓系和红系造血干细胞发育的影响

目的：探讨lmna基因下调对斑马鱼早期造血干细胞发育的影响。方法：显微注射法将Imna基因mRNA的吗啉代反义寡核苷酸注入单细胞期斑马鱼胚胎（实验组），显微注射无意义的吗啉代寡核苷酸作为对照组。待胚胎发育至受精18、24、30、36hpf后收集胚胎进行实验。RT—PCR和全胚胎原位杂交方法检测斑马鱼髓系造血转录因子pu．1和红系造血转录因子gata1的变化。结果：RT—PCR结果显示，实验组pu.1和gata1表达均较对照组下降（均P〈0．05）。原位杂交结果显示，实验组pu.1和gata1蓝黑色阳性杂交信号较对照组变浅。结论：lmna基因下调会阻碍斑马鱼髓系造血干细胞和红系造血干细胞的发育。

FcγRIIB缺失促进顺铂诱导的急性肾损伤小鼠肾组织巨噬细胞浸润

目的:探究巨噬细胞表面免疫球蛋白Fc gamma IIB受体(FcγRIIB)缺失对顺铂诱导的急性肾损伤(AKI)小鼠巨噬细胞浸润及肾组织损伤的影响。方法:8～10周龄雄性野生型(WT) C57 BL/6及FcγRIIB基因敲除(FcγRIIB-/-)小鼠随机分成WT对照组(WC),WT AKI模型组(WM),FcγRIIB-/-对照组(FC)和FcγRIIB-/-AKI模型组(FM),两个模型组予20 mg/kg体质量腹腔注射顺铂,两个对照组予等量的生理盐水;造模后3 d取血检测血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)、处死小鼠取肾组织HE染色,免疫组织化学检测观察肾组织巨噬细胞(CD68)浸润情况,ELISA检测组肾组织匀浆单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,流式细胞术检测巨噬细胞CD86(M1)和CD206(M2)亚型,荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)测肾组织MCP-1(CCL2)、MCP-1α(CCL3)及MCP-1β(CCL4) mRNA相对表达量。结果:与FC组及WC组比较,WM组及FM组血清BUN和Scr水平升高、HE染色显示肾损伤严重、肾组织MCP-1及TNF-α水平升高、CD68+巨噬细胞浸润增多、CCL2及CCL4 mRNA水平增加,差异均有统计学意义(P <0. 05),且FM组较WM组改变更明显(P <0. 05);流式细胞术结果显示各组小鼠肾组织巨噬细胞亚型差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论:FcγRIIB缺失可能引起肾组织巨噬细胞浸润增多而加重顺铂引起的AKI。

BMAL1基因抑制耐放射鼻咽癌细胞株增殖、迁移和侵袭能力机制研究

目的探究BMAL1基因对耐放射鼻咽癌细胞株(5‐8FR)增殖、迁移和侵袭能力的影响及分子机制。方法小剂量分次照射构建鼻咽癌耐放射细胞5‐8FR,运用克隆形成实验结果拟合多靶单击模型并计算放疗增敏比。通过蛋白质印迹实验检测5‐8FR和对照组5‐8F细胞株中PI3K/Akt/MMP‐2/9信号通路相关蛋白的表达。构建BMAL1基因的高表达及敲除载体,分别转染鼻咽癌细胞株5‐8F和耐放射细胞株5‐8FR,获得BMAL1基因过表达(pcDNA‐BMAL1)及其对照组(pcDNA)和干扰(BMAL1‐shRNA)及对照组(con‐shRNA)的稳转细胞株。蛋白质印迹法验证感染效率,检测两组细胞过表达或干扰BMAL1基因后PI3K/Akt/MMP‐2/9信号通路相关蛋白的改变情况。采用CCK‐8法、划痕实验、Transwell法检测过表达及干扰BMAL1基因后耐放疗细胞株5‐8FR增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果鼻咽癌耐放射细胞株中BMAL1基因表达下调,PI3K/Akt通路蛋白及下游相关分子MMP‐2、MMP‐9表达增加,TIMP‐2、TIMP‐1表达降低。过表达BMAL1基因可抑制PI3K/Akt通路蛋白及下游相关分子MMP‐2、MMP‐9表达,促进TIMP‐2、TIMP‐1表达,抑制耐放射鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,干扰BMAL1基因则结果相反。结论BMAL1基因可以逆转耐放射鼻咽癌细胞株PI3K/Akt/MMP‐2/9信号通路相关蛋白的表达,并抑制耐放射鼻咽癌细胞株的增殖、迁移和侵袭能力。