柴苓汤对慢性环孢素A肾病大鼠肾功能及肾组织病理形态学影响研究

目的:分析柴苓汤对慢性环孢素A肾病(CCN)大鼠肾功能及肾组织病理形态学影响。方法:选取由本院动物实验中心提供雄性SD健康大鼠40只,依据随机数字表法将大鼠分成4组,缬沙坦组、对照组、柴苓汤组及模型组,每组各10只;30mg/kg/天灌服环孢霉素A(Cs A),持续灌服28天以建立CCN大鼠模型,对照组则灌服等剂量的橄榄油;造模时缬沙坦组和柴苓汤组分别服用10mg/kg/天缬沙坦与3g/kg/天柴苓汤,对照组与模型组则使用等剂量生理盐水;在第29天将大鼠肾脏组织切除;观察大鼠一般情况,检测肾功能和肾组织病理改变情况。结果:模型组大鼠肾小管间质受损参数均比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05),柴苓汤组和缬沙坦组大鼠肾小管间质受损参数均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组BUN、Scr水平高于对照组,Ccr低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);柴苓汤组与缬沙坦组BUN水平高于对照组,Ccr低于对照组,BUN、Scr水平低于模型组,Ccr高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:柴苓汤可显著降低CCN大鼠肾实质受损情况,使肾功能有效改善。

神经型尼古丁受体α3亚单位及丝裂原活化蛋白激酶信号通路在氟暴露神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中的表达

目的 观察神经型尼古丁受体α3亚单位（α3nAChR）及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路中细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、p38激酶在氟暴露神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中的表达,探讨过量氟暴露对细胞形成损害的信号传递机制.方法 以α3nAChR基因沉默的SH-SY5Y细胞作为α3nAChR沉默组,以正常SH-SY5Y细胞作为对照组,采用蛋白印迹法和实时荧光定量PCR法检测α3nAChR基因沉默效果.分别用0.000、0.005、0.050、0.500、1.000、2.500、5.000 mmol/L氟化钠（NaF）处理正常SH-SY5Y细胞,用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞存活率,筛选染氟安全浓度.根据染氟安全浓度筛选结果,选择4.000 mmol/L NaF处理α3nAChR沉默组和对照组SH-SY5Y细胞0、4、8、12、24、36、48 h,用蛋白印迹法检测细胞中ERK1/2、JNK、p38蛋白表达.结果 基因沉默效果检测结果显示,在α3nAChR沉默组,α3nAChRmRNA（0.04±0.03）和蛋白（12.0±2.5）表达明显低于对照组（1.00±.11、100.0±11.3,t=24.58、28.80,P均＜ 0.05）.筛选染氟安全浓度结果显示,在染氟5.000 mmol/L组,SH-SY5Y细胞存活率（0.53±0.15）明显低于0.000 mmol/L组（1.05±0.05,P＜0.05）,而其他染氟剂量组未见明显改变（P均＞0.05）.随着染氟时间延长,α3nAChR沉默组和对照组磷酸化ERK1/2表达逐渐升高,其中24、36、48 h（188.33±7.33、200.00±10.01、213.33±11.55,125.33±5.69、136.00±4.52、155.33±6.51）与同组0 h（100.00±0.00、100.00±0.00）比较,差异有统计学意义（P均＜ 0.05）,且24、36、48 h α3nAChR沉默组明显高于对照组（t=9.26、7.63、5.72,P均＜0.05）.随着染氟时间延长,α3nAChR沉默组和对照组磷酸化JNK表达逐渐升高,其中12、24、36、48 h α3nAChR沉默组（154.00±6.25、149.00±5.57、156.00±6.08、141.67±2.52）和8、12、24、36、48 h对照组（133.33±10.69、173.00±4.00、175.00±11.79、200.67±11.93、200.33±18.58）与同组0 h（100.00±0.00、100.00±0.00）比较,差异有统计学意义（P均＜ 0.05）,且8、12、24、36、48 h α3nAChR沉默组明显低于对照组（t=-428、-5.02、-2.89、-8.33、-6.18,P均＜0.05）.24、36、48 h对照组磷酸化p38激酶表达（120.33±4.51、122.00±7.55、119.67±7.57）明显高于0h（100.00±0.00,P均＜0.05）,且高于同时间点α3nAChR沉默组（93.33±9.61、94.00±5.01、98.33±5.69,t=-4.01、-6.73、-5.59,P均＜0.05）.两组细胞中总ERK1/2、总JNK、总p38激酶表达随染氟时间延长未见明显改变（P均＞ 0.05）.结论 在过量氟暴露条件下,ERK1/2信号通路的激活不完全依赖于α3nAChR的表达;而JNK和p38两条通路的激活在一定程度上依赖于α3nAChR.

细胞外信号调节蛋白激酶5在慢性氟中毒大鼠大脑中的免疫组织改变

目的通过检测慢性氟中毒大鼠脑组织分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导通路中细胞外调节蛋白激酶5(ERK5)在大脑不同功能分区中的表达与活性,研究慢性氟中毒脑损伤的相关机制。方法 30只SD大鼠按性别和体重随机分为3组,每组10只。对照组自由饮用自来水,含氟量低于0.5 mg/L;低氟组饮水含氟量10 mg/L;高氟组饮水含氟量50 mg/L。实验6个月,观察染氟大鼠氟斑牙情况;用氟离子电极法测量大鼠尿氟含量;通过HE染色观察大鼠皮质及海马区的变化;用免疫组化方法检测大鼠脑组织中皮质区、海马CA3区、海马CA4区中P-ERK5、ERK5的蛋白表达水平。结果染氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙,尿氟含量增加(P<0.05);染氟组大鼠皮质及海马CA3区、CA4神经细胞排列稍紊乱,并有轻度的空泡变性(神经元水肿),高氟组更为严重;高氟组大鼠皮质区P-ERK5蛋白水平高于其他组(P<0.05),染氟组大鼠海马CA3区与正常组比较有统计学意义(P<0.05),海马CA4区各组间比较均有统计学意义(P<0.01);高氟组大鼠皮质区、海马CA3区、海马CA4区ERK5蛋白水平与其他组比较有统计学意义(P<0.05);另外ERK5的活化水平在海马CA4区有降低的趋势(P<0.05)。结论慢性氟中毒导致大鼠脑皮质区及海马CA3、CA4区P-ERK5、ERK5蛋白表达水平增加,可能与慢性氟中毒大鼠脑损伤免疫组织改变有一定关系。