MiR-96-5p对UMR-106细胞腺苷酸环化酶的靶向调控及生物信息学分析

目的研究miR-96-5p对UMR-106腺苷酸环化酶6(Adenylate Cyclase 6,ADCY6)的靶向调控关系及生物信息学分析。方法通过在线数据库及前期芯片结果对以ADCY6为靶基因的microRNA(miRNA)进行筛选,构建miR-96-5p表达质粒,分别转染质粒及miR-96-5p抑制剂,于大鼠骨肉瘤细胞(UMR-106)中检测miR-96-5p基因变化及ADCY6基因、蛋白变化,并通过双荧光素酶报告确定两者关系;对miR-96-5p靶基因进行预测,再通过David数据库及Cytoscape等软件对数据集进行KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)信号转导通路分析和GO(gene ontology)功能注释,筛选与ADCY6相关的通路和功能注释。结果通过在线数据库及芯片联合分析得出miR-96-5p可能为ADCY6的调控基因;rno-mir-96-5p在各物种间具有较高保守性和一致性;转染miR-96-5p质粒后UMR-106细胞中miR-96-5p mRNA表达水平较空载组升高(P<0.05),ADCY6 mRNA表达水平未见明显变化(P>0.05),ADCY6蛋白表达水平较空载组下降(P<0.05);转染抑制剂后miR-96-5p表达水平较抑制剂对照组下降(P<0.05),ADCY6 mRNA表达水平无明显变化(P>0.05),ADCY6蛋白表达水平较抑制剂对照组表达升高(P<0.05);与ADCY6野生型对照组比较,ADCY6野生型miR-96-5p组海肾/荧光比值降低(P<0.05),与ADCY6突变型对照组相比,ADCY6突变型miR-96-5p组海肾/荧光比值未观察到明显变化;miR-96-5p可能通过ADCY6参与催产素、促性腺激素释放激素(GnRH)等7条信号通路,主要发挥蛋白结合、胞内信号转导等多个生理学功能。结论ADCY6是miR-96-5p靶基因。Rno-mir-96-5p可能通过ADCY6参与调控催产素等信号通路和发挥蛋白结合等功能。