PIN1基因多态性与贵州地区民族间原发性高血压的研究

目的:探讨肽基脯氨酰顺反异构酶(PIN1)基因单核苷酸多态性(SNP)与贵州苗族、布依族、汉族人群原发性高血压的关联性。方法:通过病例-对照研究方法,选取贵州雷山苗族、荔波布依族及贵阳汉族的原发性高血压和健康对照人群,采用Sequenom MassARRAY基因分型技术对以上人群PIN1基因多态性位点rs2233678、rs2233679进行基因分型,分析SNP与贵州人群原发性高血压的遗传关系。结果:在贵州苗族、布依族、汉族人群中,高血压组和对照组性别和BMI间的差异均无统计学意义;高血压组的平均年龄均大于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。rs2233678、rs2233679在不同人群的分布均符合Hardy-Weinberg平衡。在苗族、布依族及汉族高血压组和对照组人群中,rs2233678、rs2233679等位基因及基因型差异均无统计学意义;rs2233678和rs2233679存在强连锁不平衡,以rs2233678-rs2233679构建的单倍型GC和单倍型GT与原发性高血压不存在显著关联性;多因子降维分析显示,rs2233678、rs2233679与BMI对于贵州总人群高血压的发生具有强协同作用(χ2=9.328,P=0.002);rs2233679和BMI对于贵州苗族人群高血压的发生具有强协同作用(χ2=5.624,P=0.018);rs2233678和rs2233679对于贵州布依族人群高血压的发生具有强协同作用(χ2=5.323,P=0.021)。结论:PIN1基因rs2233678、rs2233679可能共同影响贵州人群原发性高血压的发生。

抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路对冈田酸诱导原代星形胶质细胞衰老情况的影响

目的研究冈田酸(OA)诱导的原代星形胶质细胞中通过抑制磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β信号通路对p21、p53衰老蛋白表达水平和衰老阳性细胞表达的影响,探讨OA诱导星形胶质细胞衰老情况及相关机制。方法免疫荧光鉴定原代星形胶质细胞,CCK8法筛选OA药物浓度,然后用LY294002、OA分别处理或联合处理细胞,Western印迹测定细胞中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达水平的变化及β-半乳糖苷酶染色检测衰老阳性细胞。结果免疫荧光鉴定原代星形胶质细胞结果显示其纯度达到95%以上,CCK8法筛选出OA药物处理浓度为30 nmol/L,OA组中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达较正常对照组显著升高(P<0.05),衰老阳性细胞数明显增加,但LY294002+OA组p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达水平较OA组明显降低,并且衰老阳性细胞数也明显减少(P<0.05)。结论通过OA处理能使星形胶质细胞发生衰老,LY294002处理能通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路缓解细胞的衰老情况,提示高磷酸化Tau诱导星形胶质细胞衰老可能与PI3K/AKT/G3K-3β信号通路密切相关。

核酸内切酶G在慢性氟中毒大鼠脑组织中的表达及其意义

目的 了解核酸内切酶G（endonuclease G，Endo G）介导的非Caspase依赖性细胞凋亡通路参与慢性氟中毒大鼠大脑神经细胞凋亡的可能机制。方法 清洁级SD大鼠60只，体重100 ~ 120 g，按体重采用随机数字表法分成对照组和染氟组，每组30只，雌雄各半，均饲以标准营养动物饲料（含氟量 〈 0.5 mg／kg）。复制慢性氟中毒大鼠模型，对照组自由饮用自来水（含氟量 〈 0.5 mg／L）；染氟组自由饮用含氟化钠蒸馏水（氟含量为50.0 mg／L）。饲养10个月，处死大鼠，取脑组织备用。采用流式细胞术检测脑组织细胞凋亡率；免疫组织化学法检测EndoG在大鼠脑组织皮质及海马区的细胞分布；蛋白免疫印迹（Western blot）法检测Endo G在大鼠脑组织线粒体和细胞核中的蛋白表达。结果 细胞凋亡结果：染氟组大鼠海马、皮质神经细胞凋亡率［（2.6 ± 0.6）%、（3.1 ± 0.7）%］与对照组［（1.3 ± 0.6）%、（1.9 ± 0.3）%］比较明显升高，差异均有统计学意义（t = 3.1、3.4，P均 〈 0.05）。免疫组织化学结果：海马CA1、CA2、CA3、CA4区染氟组Endo G评分［（11.1 ± 2.2）、（10.2 ± 1.9）、（9.8 ± 3.1）、（9.9 ± 1.6）分］与对照组［（5.8 ± 1.8）、（6.7 ± 2.6）、（5.2 ± 2.4）、（7.2 ± 2.1）分］比较明显升高，差异有统计学意义（t = 2.9、2.5、2.4、2.3，P 〈 0.01或 〈 0.05）；额叶上层、额叶下层、顶叶上层染氟组Endo G评分［（10.6 ± 2.9）、（8.2 ± 2.4）、（11.1 ± 2.8）分］与对照组［（7.7 ± 2.6）、（6.1 ± 1.9）、（8.1 ± 2.6）分］比较明显升高，差异有统计学意义（t = 2.2、2.5、2.3，P均〈0.05）。Western blot结果：在海马以及皮质的线粒体中，染氟组EndoG 的蛋白表达［（86.4 ±7.2）%、（83.9 ± 6.8）%］与对照组［（100.0 ± 6.1）%、（100.0 ± 5.5）%］比较明显降低，差异有统计学意义（t = 2.6、2.3，P均 〈 0.05）；在海马和皮质的细胞核中，染氟组Endo G的蛋白表达［（117.5 ± 6.4）%、（115.2 ± 6.2）%］与对照组［（100.0 ± 5.2）%、（100.0 ± 5.5）%］比较明显升高，差异有统计学意义（t = 2.5、2.2， P均 〈 0.05）。结论 Endo G的高表达以及核转移与慢性氟中毒大鼠脑组织神经细胞凋亡有关，是慢性氟中毒引起脑损伤的发生机制之一。