“对分课堂+翻转课堂”混合式教学在局部解剖学实验教学中的应用与评价

目的 探讨“对分课堂+翻转课堂”混合式教学在局部解剖学实验教学中的应用效果。方法 将该校2019级A班临床专业的本科生分为对分课堂、翻转课堂、对分+翻转课堂融合和传统教学4组,每组30人,学期结束后通过调查问卷、理论考试与实操等方式评价教学效果。结果 对分+翻转课堂融合教学模式组理论与操作成绩均明显高于另外3组,差异有统计学意义(P<0.05)。调查问卷结果显示,对分+翻转课堂融合教学模式组在课堂趣味、师生互动、知识牢固、自主学习能力、对教学模式喜欢程度等方面评分均高于另外3组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 “对分课堂+翻转课堂”混合式教学模式有助于提高局部解剖学实验教学的效果。

混合式教学模式下人体解剖学课程思政实践策略

人体解剖学作为医学生整体连贯医学教育框架下一门重要的基础课程,推行思政教育势在必行且具有深远意义。在课程实践中,探索如何将思政教育贯穿在课程教学全过程,通过多模式教学实现全程育人,全方位育人,使学生在接受专业技能的同时塑造正确和完整的人生观、世界观和价值观,为解剖学思政课程教育和医学人才培养提供新思路。

小组汇报教学模式在留学生人体解剖学实验教学中的实践

目的探索“小组汇报”教学模式在留学生人体解剖学实验教学中的效果。方法选择贵州医科大学2019级临床医学专业留学生,在人体解剖学实验教学中开展实施“小组汇报”教学模式。通过在实验课上解剖操作,口头汇报操作内容,现场进行标本考试,课后整理汇报材料等环节评价教学效果。结果经过“小组汇报”教学模式改革后,2019级留学生标本考试和期末考试平均成绩均高于未经“小组汇报”教学模式改革的2018级留学生,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论“小组汇报”教学模式通过锻炼学生的动手能力、口头汇报能力和归纳总结能力,不仅有效激发了学生的学习兴趣,有效提升了主动学习能力,还进一步强化和巩固了解剖学专业知识难点,学生研判和分析临床问题的能力明显提升,教学质量和教学成果进一步优化。

多媒体案例教学法在人体解剖学教学中的设计思路

人体解剖学是医学专业学习中极其重要的学习科目,也是医学专业的基础性科目。医学专业学生只有学好了人体解剖学,熟练地掌握了人体解剖知识,才能够为后续的医学学习奠定良好的知识基础。人体解剖学的知识内容较为复杂繁琐,且具有较强的实践探究性,因此在实际的科目教学中,教师仅仅教授学生理论知识是远远不够的,还需要注重对学生实际操作能力的培养与提升。而多媒体案例教学法在人体解剖学教学中的充分应用,不但能够一改以往枯燥乏味的教学气氛,提升学生的知识学习兴趣,还有助于让学生迅速了解和掌握相关要点知识,从而可有效提升学生的学习效率,为学生以后的临床医学学习奠定扎实的知识基础。

神经肌肉电刺激通过调控白细胞介素6/信号转导子及转录激活子3信号通路促进脊髓损伤后小鼠运动功能恢复

目的观察神经肌肉电刺激(NMES)对脊髓损伤后小鼠白细胞介素6(IL-6)/STAT3信号通路的影响,探讨其对运动功能恢复的机制。方法选取SPF级小鼠72只随机分成假手术(sham)组、脊髓损伤组(SCI)和NMES组。利用BMS评分、斜坡实验与电生理(EMG)评估小鼠脊髓损伤后肢体运动恢复情况。Western blotting和Real-time PCR检测各组小鼠脊髓组织中相关炎症因子、IL-6/STAT3信号通路与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。HE染色观察各组小鼠脊髓形态结构。结果NMES组BMS评分和小鼠斜坡实验均高于SCI组(P<0.05);NMES组小鼠运动诱发电位(MEP)最大振幅高于SCI组(P<0.05);NMES组脊髓组织TNF-α、IL-12A与GFAP表达量均低于SCI组(P<0.05),TGF-β、IL-10与BDNF表达量均高于SCI组(P<0.05);与SCI组相比,NMES组小鼠脊髓空洞较少,脊髓形态修复较好;与SCI组相比,NMES组IL-6/STAT3信号通路蛋白表达均低于SCI组(P<0.05)。结论神经肌肉电刺激通过抑制IL-6/STAT3信号通路发挥抗炎作用,从而促进脊髓损伤后小鼠后肢运动功能的恢复。

重复性经脊髓磁刺激促进脊髓损伤小鼠运动功能恢复

背景:研究表明重复性经脊髓磁刺激能够抑制脊髓损伤炎症反应,在脊髓区域施加磁场刺激,以调节神经元的兴奋性和突触传递,从而促进神经系统的可塑性和修复。目的:观察重复性经脊髓磁刺激对脊髓损伤后小鼠Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路的影响,探讨其对运动功能恢复的机制。方法:将SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组、重复性经脊髓磁刺激组,后2组小鼠麻醉后采用咬骨钳剔除T9椎板,暴露脊髓,使用小型动脉瘤夹夹持脊髓20 s建立脊髓损伤模型。重复性经脊髓磁刺激组小鼠脊髓损伤的第1天开始进行为期21 d的重复性经脊髓磁刺激干预。每天持续10 min,每周刺激5 d,休息2 d。于脊髓损伤后1,3,7,14,21 d进行小鼠运动功能BMS评分,利用Western Blot检测脊髓损伤处的水通道蛋白AQP4、凋亡因子Bax、Bcl-2、CL-Caspase-3、炎症因子肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白细胞介素6、白细胞介素4和Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达,氧化应激试剂盒检测脊髓损伤处超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性及丙二醛浓度,免疫荧光染色法检测神经元核抗原的表达。结果与结论:(1)重复性经脊髓磁刺激组小鼠的BMS评分高于脊髓损伤组(P<0.05);(2)与脊髓损伤组相比,重复性经脊髓磁刺激组脊髓含水量降低、AQP4蛋白表达降低;丙二醛浓度、Bax、CL-Caspase-3、肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白细胞介素6与Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达均降低(P<0.05),而超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性、Bcl-2、白细胞介素4与神经元核抗原的表达均升高(P<0.05);(3)结果说明,重复性经脊髓磁刺激能下调Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达,缓解脊髓损伤后的脊髓水肿、氧化应激、凋亡反应和炎症反应等,发挥神经保护作用,从而促进脊髓损伤后小鼠后肢运动功能的恢复。

当归多糖调控肠道菌群对脑缺血再灌注小鼠的影响

目的 探讨当归多糖(Angelica Sinensis Polysaccharide,ASP)改善小鼠肠道微生态对脑缺血再灌注(Ischemia/reperfusion injury,I/R injury)的影响。方法 将雄性SPF级昆明小鼠随机分为假手术组(Sham组),大脑中动脉栓塞组(MCAO组),当归多糖灌胃组(ASP组),粪菌移植组(Fecal microbiota transplantation,ASP-FMT),每组16只。连续给药7 d后建立MCAO模型,24 h后使用mNSS法检测小鼠神经功能缺陷评分;TTC染色法检测脑梗死相对面积;试剂盒法测定右侧大脑缺血半暗带组织SOD、MDA、GSH含量;Western blot测定炎症因子IL-1β、IL-5、IL-6、IL-10表达量;盲肠内容物16s rRNA测序分析肠道微生物多样性。结果 与MCAO组相比,ASP干预后小鼠神经功能明显改善(P<0.001),脑梗死相对面积明显减少(P<0.01),氧化应激水平下降(P<0.05);与MCAO组相比,ASP降低了脑组织IL-1β、IL-5及IL-6表达、上调IL-10表达量(P<0.05);MACO后小鼠肠道菌群丰富度明显减少,益生菌比例下调,当归多糖灌胃或菌群移植均可部分恢复菌群丰富度,上调益生菌比例;肠道菌群的变化与脑组织损伤程度具有相关性。结论 当归多糖通过改善肠道微生态,降低氧化应激水平,下调炎症因子水平,减轻脑缺血再灌注后神经功能损伤,减少梗死范围。

神经干细胞源性外泌体对脑缺血再灌注损伤后大鼠氧化应激和细胞凋亡的影响

目的探讨神经干细胞源性外泌体(NSC-Exos)对脑缺血再灌注损伤(MCAO)模型大鼠氧化应激和神经细胞凋亡的影响。方法135只雄性SD大鼠随机分为Sham组(手术、不缺血、不微量注射)、MCAO组(手术、缺血、不微量注射)及NSC-Exos组(手术、缺血、侧脑室微量注射),于微量注射后大鼠脑缺血再灌注第1、7及14天时行神经功能缺陷评分,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)检测脑组织相对梗死体积,HE染色和透射电子显微镜观察海马CA3区神经细胞形态及亚显微结构,比色法检测海马组织匀浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,Western blot检测海马组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与Sham组相比,MCAO组大鼠神经功能缺陷评分增高(P<0.05),脑组织相对梗死体积显著增大(P<0.05),神经细胞形态及超微结构受损严重,海马组织匀浆中GSH-PX、SOD酶活性降低,MAD含量增高(P<0.05),Bcl-2含量降低、Bax蛋白含量增加(P<0.05);与MCAO组相比,NSC-Exos组大鼠神经功能缺陷评分降低(P<0.05),脑组织相对梗死体积减小(P<0.05),存活神经细胞形态较为完好,超微结构较为清晰,海马组织匀浆中GSH-PX、SOD酶活性均增高,MAD含量减小(P<0.05),Bcl-2蛋白随缺血再灌注时间的延长表达增高,蛋白Bax表达减少(P<0.05)。结论NSC-Exos可改善MCAO大鼠的神经功能,减轻神经元的病理损伤,其机理可能与抑制海马组织的氧化应激和细胞凋亡有关。

微小RNA-155和脑源性神经生长因子在砷对PC12细胞损伤中的表达及意义

目的探讨微小RNA-155(miR-155)和脑源性神经营养因子(BDNF)在砷对PC12细胞损伤中的作用及机制。方法培养大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤12(PC12)细胞株,将细胞分为对照组和2.5、5、10、20μmol/L NaAsO_(2)染毒组;MTT检测细胞存活率,电镜观察各组细胞的超微结构,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-155和BDNF mRNA表达,蛋白印迹(Western blot)检测BDNF蛋白的表达。结果电镜下发现各染毒组出现不同程度的细胞器损伤;与对照组比较,NaAsO_(2)各染毒组(除2.5μmol/L组外)随染毒剂量的增加,PC12细胞存活率逐渐下降(P<0.05)、miR-155的表达量逐渐增加(P<0.05)、BDNF mRNA和蛋白表达量逐渐降低(P<0.05)。结论NaAsO_(2)对PC12细胞有直接毒性作用,miR-155及BDNF表达水平随染砷浓度增加而改变,其可能是致PC12细胞损伤的机制。

神经干细胞来源外泌体对脑缺血再灌注损伤大鼠星形胶质细胞TGF⁃β1信号转导与炎症因子的影响

目的探讨神经干细胞来源外泌体(NSC⁃Exos)对脑缺血再灌注损伤大鼠星形胶质细胞TGF⁃β1信号转导及炎症因子的影响。方法40只SD大鼠随机分为Sham组、MCAO组、PBS组和NSC⁃Exos组。建立MCAO模型,侧脑室注射NSC⁃Exos,3 d后检测大鼠神经功能缺陷评分,取脑进行相对梗死体积测定、组织病理学、IL⁃6、IL⁃1β、TGF⁃β1蛋白表达检测,以及MAP⁃2和外泌体标记探针PKH26共定位检测。结果NSC⁃Exos干预降低损伤大鼠神经功能缺陷评分和脑梗死体积(P<0.05),大鼠海马CA3区神经元数量增加,GFAP阳性细胞表达率和神经元细胞凋亡指数降低(P<0.05),蛋白IL⁃6、IL⁃1β表达下降,而TGF⁃β1表达增加(P<0.05);PKH26和MAP⁃2双阳性细胞在海马CA3区表达。结论NSC⁃Exos可能通过影响星形胶质细胞TGF⁃β1信号转导,抑制星形胶质细胞增生与炎症因子IL⁃6、IL⁃1β的表达,通过增强TGF⁃β1的表达来修复脑损伤。

神经肌电刺激通过调控炎症因子促进小鼠脊髓损伤修复研究

目的探讨神经肌电刺激(neuromuscular electrical stimulation,NMES)调控炎症因子表达修复脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的机制。方法将60只健康成年小鼠随机分为假手术组(Sham组)、SCI组、1 Hz NMES组、20 Hz NMES组,每组15只,利用Basso Mouse Scale评分和足印分析观察小鼠后肢运动功能恢复情况;免疫荧光观察脊髓损伤前角神经元数目;real-time RT-PCR检测炎症因子TNF-α、IL-6、IL-12 mRNA表达;Western blot测定炎症因子TNF-α、IL-6、IL-12及BDNF、GFAP表达。结果与SCI组相比,神经肌电刺激干预后小鼠后肢运动功能明显改善,损伤处存活的神经元增多,且20 Hz NMES组神经元多于1 Hz NMES组;神经肌电刺激干预可以下调TNF-α、IL-6、IL-12及GFAP表达,促进BDNF表达。结论神经肌电刺激能下调炎症因子抑制GFAP表达,抑制纤维瘢痕形成,同时上调BDNF表达保护神经元数目,促进脊髓损伤后小鼠运动功能恢复。

五花血藤水煎液通过抗炎作用促进脊髓损伤后小鼠运动功能恢复

目的探讨五花血藤水煎液(Sargentodoxa cuneata,SCD)在小鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后的抗炎作用及其对运动功能恢复的影响。方法选取36只SPF级小鼠随机分成假手术组、脊髓损伤组和SCD组,利用BMS评分检测小鼠后肢运动功能恢复情况,免疫蛋白质印迹法检测各组小鼠脊髓白细胞介素(IL)-6、IL-12A、肿瘤坏死因子(TNF)-α和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的表达,免疫荧光染色通过NeuN观察损伤处脊髓前角神经元变化,rAAV-retro逆行示踪观察各组小鼠胫骨前肌(tibialis anterior muscle,TA)相关脊髓运动神经元分布。结果与脊髓损伤组相比,SCD组小鼠在损伤后7 d的BMS评分显著提高(P<0.05),损伤后14 d,IL-6、IL-12A和TNF-α表达明显降低(P<0.05),BDNF的表达显著升高(P<0.05);损伤处脊髓前角神经元数量显著增多(P<0.05),TA相关运动神经元数量明显增多(P<0.05)。结论五花血藤水煎液能明显下调炎症因子IL-6、IL-12A和TNF-α的表达,发挥抗炎作用,同时上调BDNF的表达从而对运动神经元起保护作用,促进损伤后小鼠运动功能的恢复。

人参皂苷Rb1改善局灶性CIRI小鼠模型神经损伤的调控机制研究

目的探究人参皂苷Rb1对局灶性脑缺血再灌注损伤(CIRI)的调控机制。方法60只C57/BL小鼠随机分为6组(n=10):假手术组、CIRI模型组、人参皂苷Rb1低、中、高剂量组和尼莫地平(阳性对照)组。手术方法构建局灶性CIRI小鼠模型。行神经功能评分、行为学测试,尼氏染色检测海马体中尼氏体数量。qPCR、Western blot和免疫组化检测人参皂苷Rb1对海马体中Wnt信号通路分子表达的影响,通过分子对接和共沉淀实验研究人参皂苷Rb1的调控机制。结果与CIRI模型组相比,添加人参皂苷Rb1后能够降低小鼠神经功能评分(P<0.05),降低通过平衡木时间(P<0.05),提高小鼠进入正确臂时间(P<0.05),增加小鼠摇摆时间和攀爬时间(P<0.05),证明了人参皂苷Rb1能够有效恢复小鼠神经系统功能,提高模型小鼠行为学能力。人参皂苷Rb1治疗后海马体中轴抑制蛋白2(Axin2)和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)降低,Wnt3a、Wnt1和β-连锁蛋白(β-catenin)表达量增加。结论人参皂苷Rb1能够改善CIRI小鼠模型的神经功能并提高海马体中尼氏体数量,与激活Wnt信号通路有关,可能在卒中治疗期间对局灶性CIRI具有神经保护作用。

丹参酮ⅡA对细菌性脑膜炎大鼠海马区损伤的作用及机制

目的探讨丹参酮ⅡA对细菌性脑膜炎(BM)引发海马损伤的保护作用。方法健康、清洁级的SD雄性大鼠40只,采用环磷酰胺(45 mg/kg)和地塞米松(90 mg/kg)腹腔联合注射构建免疫受损动物模型,将受损动物分为空白对照组、鲍曼不动杆菌感染组、生理盐水干预组(菌+生理盐水干预)和丹参酮ⅡA干预组(菌+丹参酮ⅡA干预)4组,构建细菌性脑膜炎的模型;建模第2天开始连续3 d采用水迷宫检测大鼠学习与记忆能力变化,持续感染7 d后处死动物;采用尼氏染色检测海马区神经元细胞的改变,ELISA检测组织内白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子β(TNF-β)的浓度,Western blot及RT-PCR检测高迁移率族蛋白1(HMGB1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、磷酸化的核因子кB(NF-кB/p-p50/p-p65)的蛋白与基因含量变化,评估丹参酮ⅡA对细菌性脑膜炎引发的海马损伤的保护作用;体外以200μmol/L的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)抑制神经细胞内NF-кB信号通路的激活,验证体内实验的推论。结果细菌性脑膜炎建模成功后,空白对照和丹参酮ⅡA干预两组大鼠在水迷宫检测的定航与空间探索时限均显著低于细菌性脑膜炎与生理盐水干预两组(P<0.05);尼氏染色显示,丹参酮ⅡA干预后的细菌性脑膜炎组海马区椎体层神经元细胞分布更趋均匀、整齐,尼氏小体数量增多;ELISA检测发现,空白对照和丹参酮ⅡA干预两组血清中IL-6、IL-10、TNF-β浓度显著低于细菌性脑膜炎与生理盐水干预两组(P<0.05);Western blot及RT-PCR检测HMGB1、MMP-9、NF-кB(p-p50,p-p65)蛋白与基因均高表达于细菌性脑膜炎与生理盐水干预两组(P<0.05);体外实验证实在抑制NF-кB通路后丹参酮ⅡA对细菌性脑膜炎感染引发损伤的保护作用并不明显。结论丹参酮ⅡA对细菌性脑膜炎大鼠海马损伤有保护作用,其机制可能与抑制NF-кB通路有关。

局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠海马区VEGF、HIF-1α以及Tau蛋白表达的影响

目的:研究腺苷(Ado)预处理对局灶性IR(脑缺血再灌注损伤)大鼠海马区VEGF(血管内皮生长因子)、HIF-1α(低氧诱导因子-1α)以及Tau蛋白(脑特异性细胞骨架蛋白)表达的影响。方法:选取100只雄性健康SD大鼠,依据实验设计要求分为缺灌组、Ado缺灌组、假手术组、Ado假手术组。结果:假手术组、Ado假手术组VEGF、HIF-1α阳性表达较低,缺灌组、Ado缺灌组VEGF、HIF-1α表达增多,且Ado缺灌组的VEGF、HIF-1α表达较缺灌组增多(P<0.05)。Ado假手术组、Ado缺灌组的P-Tau、Tau5阳性表达均较假手术组、缺灌组低(P<0.05)。结论:腺苷预处理应用于局灶性IR大鼠,增加VEGF、HIF-1α表达以保护脑组织,从而保护缺血神经元。

Wnt通路信号蛋白β-链蛋白、糖原合成酶激酶-3β在小鼠脑缺血再灌注损伤后的表达变化

目的：初步探讨Wnt信号通路中相关因子在小鼠脑缺血再灌注损伤中的表达规律。方法将96只1月龄健康昆明雄性小鼠随机分为正常组、假手术组和缺血再灌注后1 d、7 d、14 d、28 d组，采用夹闭小鼠双侧颈总动脉制作脑缺血再灌注损伤模型。通过Y-迷宫检测小鼠学习记忆能力，TTC染色和透射电镜观察小鼠海马形态结构，免疫组织化学染色方法检测β-链蛋白（β-catenin）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）的表达变化。结果小鼠脑缺血再灌注后身体出现神经功能损伤症状，同时学习记忆能力明显下降。脑片TTC染色海马区出现白色梗死灶，透射电镜显示海马区神经元细胞水肿，线粒体肿胀，核固缩，核膜间隙扩大。免疫组化显示正常组和假手术组中β-catenin呈弱阳性，GSK-3β呈阳性。脑缺血再灌注损伤后，GSK-3β阳性细胞呈低表达，21 d升高；而β-catenin在缺血再灌注后脑组织中均有表达，且阳性表达于7 d达到高峰，随后开始下降，28 d降至正常，两者呈显著负相关（P＜0.05）。结论初步证实夹闭小鼠双侧颈总动脉成功构建脑缺血再灌注损伤模型，同时Wnt信号通路参与脑缺血再灌注损伤的发生。

NF-κB信号通路在小鼠脑缺血再灌注细胞凋亡中的作用

目的初探核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路在小鼠脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)细胞凋亡中的作用。方法通过夹闭小鼠双侧颈总动脉建立动物模型。模型组分为3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、7 d、14 d、21 d,共8组。TTC染色确定脑缺血损伤区域,TUNEL法检测不同时间缺血区细胞凋亡数,原位杂交法和Western blotting检测NF-κB信号通路靶基因/蛋白Bcl-2和C-myc mRNA及蛋白表达。PDTC抑制NF-κB信号通路后,TUNEL法和原位杂交检测建模后1 d、7 d、14 d神经细胞凋亡数及Bcl-2和C-myc mRNA变化情况。结果各模型组海马CA3区凋亡细胞数量、Bcl-2 mRNA和C-myc mRNA阳性细胞数及二者蛋白表达量高于正常组和假手术组(P<0.05);PDTC抑制NF-κB信号通路后,各抑制组与对应时间点模型组相比,Bcl-2 mRNA阳性细胞数减少,TUNEL阳性细胞数和C-myc mRNA阳性细胞数增加(P<0.05)。结论 CIRI早期即出现有凋亡细胞数的增加,并在其后较长一段时间内细胞凋亡过程仍存在着持续性的进展;NF-κB信号通路在CIRI病程进展中对神经细胞凋亡起抑制作用,其机制可能通过Bcl-2诱导和C-myc抑制共同发挥调节作用。

小鼠骨髓间充质干细胞体外扩增和分化为神经元样细胞的实验研究

目的体外分离和扩增小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),并观察不同方法诱导BMSCs向神经元样细胞分化的差异,以寻找一种效果理想的BMSCs体外诱导方法。方法取昆明小鼠双股骨骨髓,采用全骨髓贴壁法体外纯化扩增BMSCs,流式细胞术检测其表面标志物,并对其进行成脂、成骨诱导鉴定。分别用化学诱导法和共培养法诱导BMSCs分化为神经元样细胞,比较两种方法所获得的神经元样细胞的细胞形态。结果采用全骨髓贴壁法能有效分离小鼠BMSCs,随着传代次数的增加能得到逐渐纯化的BMSCs,而过多的传代次数则出现细胞生长速度缓慢、核固缩、脱离等衰老征象。流式细胞术检测结果显示P4代BMSCs阳性表达CD29和Sca-1,而阴性表达CD11b。具有成脂、成骨诱导分化的能力。共培养法诱导第5天可见神经细胞样形态且细胞突起数量较多并有分支;化学诱导法培养第7天细胞出现较长突起,形成神经样结构。结论采用全骨髓贴壁法能有效分离纯化小鼠BMSCs,通过共培养法诱导BMSCs分化为神经元样细胞效果优于化学诱导法。

小鼠脑缺血再灌注损伤模型中circRNA的m^(6)A修饰及表达谱分析

本研究通过甲基化RNA免疫沉淀测序(methylated RNA immunoprecipitation sequencing,MeRIP-seq)、转录物组测序(transcriptome sequencing,RNA-seq)及生物信息学技术,分析小鼠大脑中动脉栓塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型中环状RNA (circular RNA,circRNA)差异表达谱和m^(6)A修饰差异表达谱,为揭示circRNA表观遗传修饰与脑缺血再灌注损伤之间关系提供科学依据。采用Longa生物学评分评价小鼠神经功能缺损,TTC染色法计算小鼠脑梗死体积,Dot印迹检测m^(6)A整体甲基化水平。结果显示,MCAO/R组与sham组相比出现严重神经损伤,Longa生物学评分为(2.75±0.25)分,MCAO/R组的梗死体积显著高于sham组,所占百分比为(27.63%±4.24%),MCAO/R组m^(6)A整体修饰水平增加。与sham组相比,MCAO/R组有1 787个差异表达的circRNAs(|log_(2)FC|> 0.58,P<0.05)。其中,852个circRNA表达显著上调,935个circRNAs表达显著下调。基因本体(gene ontgology,GO)功能分析显示,差异表达circRNAs靶基因主要参与翻译、蛋白质糖基化、激素应答、IL-6介导的信号通路、高尔基体、内质网等生物学过程;京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析发现,差异靶基因主要与N-聚糖生物合成、Wnt信号通路、胃酸分泌、谷氨酸能突触、磷脂酶D信号通路、味觉传导、非洲锥虫病、甲状腺激素合成、胰岛素分泌等代谢途径和信号通路有关。与sham组比,MCAO/R组有22个circRNAs发生m^(6)A甲基化修饰差异(|log_(2)FC|> 0.58,P<0.05)。其中,14个circRNA显著上调,8个circRNA显著下调。GO和KEGG分析显示,差异甲基化circRNA主要与胞嘧啶代谢过程、骨骼肌收缩、髓样细胞分化、O-连接蛋白质糖基化等生物学过程有关,主要富集到范科尼贫血途径通路。最后,联合表达差异和m^(6)A修饰差异进行分析,共筛选到7个共表达差异(既有m^(6)A修饰差异,又有表达差异)的circRNA,经RT-qPCR验证,这些共表达差异circRNA表达趋势与测序一致。本研究通过对sham组和MCAO/R组测序分析,筛选有差异表达的circRNA和有m^(6)A修饰差异的circRNA,表明脑缺血再灌注可引起小鼠circRNA表达谱及m^(6)A修饰谱改变,差异表达的circRNA和差异甲基化circRNA靶基因涉及多种通路,为从表观遗传水平揭示脑缺血再灌注损伤的分子机制奠定基础,为后续研究脑缺血再灌注损伤提供了潜在的靶向位点。

DAPT对脑缺血再灌注损伤小鼠学习记忆的影响以及Notch信号通路的调节作用

目的探讨DAPT对脑缺血再灌注损伤小鼠学习记忆能力的影响,以及Notch信号通路的调控作用。方法 140只健康雄性小鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(I/R组)和DAPT组,每组再分为3d、7d、14d 3个亚组。取材前1 d Y型迷宫检测小鼠学习记忆能力;然后TTC染色测定脑梗死面积;比色法测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量;光学显微镜下观察海马CA3区形态结构变化;免疫荧光检测Hes1阳性细胞;Western blotting检测Hes5蛋白表达变化并进行定量分析。结果与sham组相比,I/R组和DAPT组小鼠学习记忆能力均下降,脑梗死面积增加,SOD活性降低,MDA含量升高(P<0.05)。与I/R组相比,DAPT组小鼠学习记忆能力提高,脑梗死面积减小,SOD活性升高,MDA含量降低(P<0.05)。光学显微镜下,sham组小鼠海马CA3区神经元结构未见异常;I/R组细胞水肿,染色较深,排列疏松,大量神经元缺失,出现核固缩现象;DAPT组细胞数量增加,染色变浅。与sham组相比,I/R组与DAPT组Hes1阳性细胞明显增多,Hes5蛋白表达增加;而DAPT各亚组较I/R各亚组Hes1阳性细胞减少,Hes5蛋白表达降低(P<0.05)。结论 DAPT对小鼠缺血再灌注损伤有改善作用,其作用机制可能与阻断Notch信号通路有关。