基于混合式教学的医学免疫学课程思政建设研究

基于混合式教学模式,分析医学免疫学课程教学中的思政教育,充分发挥课程的思政教育功能,提炼专业课程中蕴含的思政教育、文化基因、思维方法和价值理念,研究教育方法,采用画龙点睛式、隐性渗透式等教学方式,多角度、全方位把思政元素融入到教学之中。

人类免疫缺陷病毒感染临床分期与特异性抗体免疫印迹条带的相关性研究

目的分析贵州省黔东南州地区针对不同人类免疫缺陷病毒(HIV)抗原的特异性抗体在不同临床分期患者中的表达差异,探究其与获得性免疫缺陷综合征临床分期的关联。方法选取贵州黔东南州307份HIV确诊阳性血液样本,进行特异性HIV抗体免疫印迹试验,并对血液样本进行CD3^(+)CD4^(+)T细胞计数及HIV病毒载量核酸检测,将HIV感染期和艾滋病期的相关指标进行多因素回归分析。结果307例HIV感染者中,男218例,女89例,平均(48.53±16.03)岁,其特异性抗体gp160、gp120、gp41、p66、p51、p31、p55、p24和p17的构成比分别为98.7%、90.9%、92.2%、74.3%、66.4%、86.6%、3.9%、97.4%和73.9%。多因素二元Logistic回归模型分析显示,p24特异性抗体的表达是感染期的影响因素(OR=0.158,95%CI:0.032~0.768,P<0.05)。p24特异性抗体与HIV感染的临床分期有一定相关性(OR=0.217,95%CI:0.005~0.944,P<0.05)。将p24特异性表达时CD3^(+)CD4^(+)T细胞计数与病毒载量比值作为检验变量,将临床分期作为状态变量(艾滋病期=1,感染期=2)绘制受试者工作特征(ROC)曲线,曲线下面积为0.653(95%CI:0.529~0.774,P<0.05)。结论p24特异性抗体的差异表达有望提示患者处于感染期,并可能成为HIV感染患者免疫功能的预警指标。

汉防己乙素衍生物LYY-47对三阴性乳腺癌细胞及其多倍体巨瘤细胞增殖、凋亡的作用和机制

目的探讨汉防己乙素衍生物LYY-47对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞及其多倍体巨瘤细胞(PGCCs)增殖、凋亡的作用和机制。方法取TNBC MDA-MB-231细胞和MDA-MB-436细胞培养至对数生长期,诱导形成PGCCs,培养35 d,采用苏木素-伊红(H&E)染色观察不同培养时间时2种细胞的PGCCs形态学特征并进行计数;收集MDA-MB-231细胞、PGCCs及其子代细胞,采用流式细胞仪检测分析细胞周期,采用Western blot检测周期相关蛋白[细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)和细胞周期蛋白B1(CyclinB1)]、干性相关蛋白[乙醛脱氢酶1A1(ALDH1A1)、白细胞分化抗原44(CD44)及白细胞分化抗原133(CD133)]、DNA损伤修复相关蛋白[布卢姆(BLM)、Rad51及乳腺癌易感基因1(BRCA1)]及凋亡相关蛋白[BCL2-相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤蛋白-2(Bcl-2)、裂解凋亡蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)及裂解凋亡蛋白酶-8(cleaved Caspase-8)]的表达,采用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成实验检测细胞活力和细胞集落数,采用细胞免疫荧光实验检测磷酸化组蛋白2AX(γ-H2AX)的表达;采用荧光偏振实验检测BLM DNA解旋酶的活性;收集对数生长期MDA-MB-231细胞,分为对照组(同等体积的完全培养基)、紫杉醇(PTX)组(500 nmol/L PTX)、3-CF 3,4-F-苯基类似物(ML216)组(3μmol/L ML216)及ML216+PTX组(500 nmol/L PTX和3μmol/L ML216),采用Image J软件计数各组细胞数;收集对数生长期MDA-MB-231细胞及其PGCCs子代细胞,分为对照组(0.00μmol/L)、LYY-47给药组(2.50μmol/L、5.00μmol/L及6.50μmol/L),采用流式细胞仪检测上述各组细胞的凋亡情况;6周龄雌性无特定病原体(SPF)级无胸腺BALB/c裸鼠12只,皮下分别注射5×10^(6)个MDA-MB-231细胞及其PGCCs子代细胞,每隔3天测量1次肿瘤体积,连续29 d,处死裸鼠剥离肿瘤、称重,取肿瘤组织制作切片,采用H&E染色和免疫组织化学染色观察细胞形态和检测BLM、Ki-67的表达。结果与TNBC MDA-MB-231和MDA-MB-436细胞相比,PTX诱导的PGCCs出现增大的细胞核和细胞质区域,通过不对称分裂产生子代细胞;与MDA-MB-231细胞相比,PGCCs中S期和G2/M期细胞增加、CDK1和CyclinB1蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01),其子代细胞中S期细胞增加、G2/M期细胞减少且CDK1、CyclinB1蛋白表达上调(P<0.05或P<0.01),PGCCs及其子代细胞中ALDH1A1、CD44及CD133蛋白表达上调(P<0.05),PGCCs子代细胞的增殖和克隆形成能力增强(P<0.05),γ-H2AX、BLM、BRCA1及Rad51蛋白表达上调(P<0.05);与PTX组相比,ML216+PTX组PGCCs形成的数量明显减少(P<0.01);PGCCs子代细胞体内成瘤的生长速度、肿瘤的体积和重量均大于MDA-MB-231细胞(P<0.01),瘤体中BLM与Ki-67均呈高表达(P<0.01);与对照组相比,LYY-47给药组BLM 642-1290 DNA解旋酶的ATPase、dsDNA解链活性以及DNA结合活性均下调(P<0.05),MDA-MB-231细胞及其PGCCs子代细胞中BLM、Rad51及BRCA1蛋白表达也均下调(P<0.05);与对照组相比,LYY-47给药组和ML216给药组MDA-MB-231及其PGCCs子代细胞增殖和克隆形成能力降低(P<0.05),LYY-47给药组能够引起MDA-MB-231及其PGCCs子代细胞G2/M期细胞增加(P<0.05)、S期细胞减少(P<0.05)、细胞内周期相关蛋白CDK1与CyclinB1的表达下调(P<0.05),ML216给药组MDA-MB-231及其PGCCs子代细胞G1期细胞增多、S期细胞减少(P<0.05);与对照组比较,LYY-47给药组MDA-MB-231细胞及其PGCCs子代细胞的总凋亡比例增加、Bcl-2表达下调及Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8蛋白表达上调(P<0.05)。结论LYY-47和ML216可影响TNBC及其PGCCs子代细胞的增殖,其机制可能与抑制BLM DNA解旋酶诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期有关。

高活性脐带间充质干细胞干预老年树鼩衰老脾脏的作用与机制

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作用及机制。方法:从剖腹产的新生树鼩脐带组织中分离、培养和获得高活性脐带间充质干细胞,三系分化试剂盒检测成脂、成骨、成软骨分化能力,流式细胞术检测细胞周期和表面标志物。以感染复数值分别为100,120,140,160,180,200的吉凯基因绿色荧光蛋白转染第2代高活性脐带间充质干细胞,筛选最佳转染条件;转染后的第4代高活性脐带间充质干细胞尾静脉输注给老年治疗组树鼩,青年对照组和老年模型组不予特殊处理,治疗4个月时取脾脏组织,苏木精-伊红染色观察脾脏组织结构;β-半乳糖苷酶染色检测衰老相关半乳糖苷酶活性;免疫组织化学染色检测p21和p53蛋白表达水平;Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞增殖活性;免疫荧光染色检测脾脏自噬蛋白分子Beclin1和APG5L/ATG5表达水平;活性氧荧光染色检测脾脏组织的活性氧含量;CD3免疫荧光染色检测总T淋巴细胞比例变化;酶联免疫吸附实验检测脾脏组织白细胞介素1β和转化生长因子β1分泌水平;DAPI复染细胞核观察绿色荧光蛋白标记的高活性脐带间充质干细胞在脾脏组织的分布情况。结果与结论:①高活性脐带间充质干细胞呈核小短梭形、鱼群样生长,G_(0)/G_(1)期占比大,具有向成脂、成骨和成软骨分化潜能。②感染复数为140且转染72 h为吉凯基因绿色荧光蛋白标记树鼩高活性脐带间充质干细胞的最佳条件。③与老年模型组相比,老年治疗组树鼩脾脏组织细胞排列紧密,白髓面积增加(P<0.01),红白髓界线清晰,生发中心占比无显著差异(P>0.05),脾脏组织衰老相关半乳糖苷酶活性水平降低(P<0.001),衰老蛋白分子p21和p53表达下调(P<0.001),增殖相关分子Ki67和PCNA表达上调(P<0.001,P<0.05),自噬相关分子Beclin1和APG5L/ATG5表达上调(P<0.001),活性氧含量降低(P<0.001),CD3^(+)T细胞比例增加(P<0.05),衰老相关分泌表型中白细胞介素1β分泌水平降低(P<0.001),转化生长因子β1分泌水平无显著差异(P>0.05)。与青年对照组相比,以上检测指标在老年治疗组中均有显著差异(P<0.05)。④冰冻组织切片观察可见老年治疗组树鼩脾脏组织中有绿色荧光蛋白标记的绿色荧光细胞。结果表明:静脉输注高活性脐带间充质干细胞可迁移至脾脏组织,抑制活性氧产生,下调衰老相关蛋白分子表达,诱导细胞自噬,促进细胞增殖,降低慢性炎症,进而改善脾脏组织结构和功能。

6株肺炎克雷伯菌的耐药性及致病性分析

目的了解6株肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性及致病性,为肺炎克雷伯菌感染防治提供依据。方法分离培养获得来自不同医院的6株临床菌株后,基于khe基因对其进行物种特异性鉴定,利用第二代测序技术获得其全基因组序列;基于全基因组序列鉴定其荚膜血清型分型、ST分型、耐药基因;利用PCR法对其荚膜血清型基因、毒力基因进行验证或鉴定;利用微量肉汤稀释法对其进行药物敏感性验证;利用液体气溶胶肺递送装置进行小鼠肺炎克雷伯菌攻毒试验以检测其致病性。结果基因鉴定结果显示6株菌均为K2荚膜血清型,分属ST14、ST65、ST700、ST86四种ST分型;6株菌共包含6种毒力基因、23种耐药基因。微量肉汤稀释法实验结果显示,6株菌皆对氨苄西林耐药,仅1株菌为多药耐药菌株;有4株菌为高黏菌株;有5株菌可导致小鼠死亡,初步判定为高毒力菌株。结论不同来源的6株肺炎克雷伯菌临床分离株中,有1株NY 13294株为高毒力且多药耐药菌株,另有4株高毒力菌株对1~2类抗生素耐药。

ralb34k2-1刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞对蛋白质PTM代谢物修饰及DENV-2易感性的影响

目的探讨白纹伊蚊唾液蛋白34k2-1(ralb34k2-1)刺激的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7细胞)胞内蛋白翻译后代谢修饰(PTMs)的变化及对2型登革病毒(DENV-2)易感性的影响。方法利用抗乙酰化、乳酰化、琥珀酰化、巴豆酰化和丙二酰化的泛特异性抗体,通过免疫印迹法(Western blot)检测ralb34k2-1蛋白刺激后不同时相的RAW264.7细胞蛋白质翻译后代谢物修饰的情况,酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)检测细胞内外的乳酸含量;用2 mg/L ralb34k2-1预处理RAW264.7细胞24 h后、继续培养2 d、再用DENV-2感染细胞,通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)检测感染18 h和36 h后的病毒核酸变化,分析ralb34k2-1预处理后对病毒易感性的影响;检测感染前后胞内白细胞介素1β-(IL-1β)、白细胞介素10-(IL-10)、肿瘤坏死因子β-(TGF-β)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg-1)mRNA的相对表达情况,分析ralb34k2-1预处理对细胞免疫状态及细胞极化的影响。结果胞内不同的代谢物对蛋白质的修饰程度主要表现为乳酰化修饰>乙酰化修饰>琥珀酰化修饰;在时相上,除琥珀酰修饰外,随时间的延长其余代谢物对蛋白质的修饰有增多的趋势,其中以6 h乳酰化修饰最多;ralb34k2-1刺激对细胞的乳酸产生无明显影响;经ralb34k2-1预处理后胞内DENV-E相对表达量较对照组高5倍以上,IL-10 mRNA的相对表达在感染前后均保持高水平(6~8倍);在感染前iNOS/Arg比值为3.46±1.59,但受ralb34k2蛋白预处理的细胞在感染后表现iNOS表达下调的趋势。结论蚊唾液ralb34k2蛋白可能通过调控PTM代谢物修饰的方式,改变细胞的免疫状态从而增强登革病毒的易感性。

沉默MAL2对乳腺癌细胞增殖和药物敏感性的影响

目的探讨沉默髓鞘和淋巴细胞蛋白2(MAL2)基因对乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖和药物敏感性的影响,同时研究乳腺癌细胞对阿霉素(DOX)和顺铂(DDP)的耐药机制。方法利用数据库分析MAL2基因在正常组织、癌旁组织和乳腺癌组织中的表达及与预后的相关性;采用蛋白印迹(Western blot)法检测MAL2在人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7及MDA-MB-468细胞中的蛋白表达;利用转染干扰序列沉默乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞中MAL2的表达,根据序列不同分为对照组(siRNA-NC组)和实验组(siRNA-MAL2-1组、siRNA-MAL2-2组及siRNA-MAL2-3组);选取沉默效果最好的实验组(siRNA-MAL2-3组)序列进行慢病毒构建及实验,沉默乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞中MAL2的表达,分为sh-NC组(序列同siRNA-NC组)和sh-MAL2组(序列同siRNA-MAL2-3组),采用Western blot法检测MAL2的蛋白表达,CCK8法和平板克隆形成实验检测细胞的增殖能力;CCK8法、流式细胞术及Western blot检测沉默MAL2基因的表达后乳腺癌细胞对DOX和DDP的敏感性;Western blot检测p-AKT/m-TOR通路相关蛋白[磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、雷帕霉素靶蛋白(m-TOR)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)]的表达情况。结果生物信息学分析显示MAL2在乳腺癌组织中高表达、且其高表达和患者预后不良相关(P<0.05),MAL2在乳腺癌细胞系中高表达(P<0.01);与siRNA-NC组相比,siRNA-MAL2-3组的MAL2蛋白沉默效果较好(P<0.01);感染慢病毒实验结果表明,与sh-NC组比较,sh-MAL2组MAL2表达被抑制(P<0.05);与sh-NC组相比,sh-MAL2组细胞增殖能力无变化(P>0.05)、对DOX和DDP的敏感性增强(P<0.05)、p-AKT和p-mTOR蛋白表达下调(P<0.05)。结论沉默MAL2对乳腺癌细胞增殖能力没有影响,但可促进乳腺癌细胞对DOX和DDP的敏感性,其机制可能与AKT/m-TOR通路相关蛋白被抑制有关。

人β防御素3对绿色荧光蛋白标记水疱性口炎病毒复制的作用

目的探讨人β防御素-3(HBD3)对绿色荧光蛋白(GFP)-水疱性口炎病毒(VSV)病毒株复制的作用。方法取对数生长期非洲绿猴肾细胞(Vero)分为Control组、1.00感染复数(MOI)组、0.10 MOI及0.01MOI组,Control组为无病毒对照组,后3组Vero细胞用1.00 MOI、0.10 MOI、0.01MOI VSV-GFP感染,采用噬斑形成实验观察感染第3天时各组Vero细胞存活情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测感染24 h时1.00、0.10及0.01 MOI组Vero细胞内病毒基质蛋白(M)和GFP信使RNA(mRNA)表达;取对数生长期人非小细胞肺癌细胞(A549)分为未处理组、VSV-GFP组及VSV-GFP+HBD3组,采用Imag J软件对各组镜下A549荧光进行相对定量分析,使用RT-PCR检测各组A549细胞内M和GFP mRNA表达。结果随着病毒滴度的增加,Vero细胞内空斑形成数目增多;Vero细胞内M和GFP mRNA表达表现为0.01 MOI组<0.10 MOI组<1.00 MOI组(P<0.05);VSV-GFP+HBD3组A549细胞单位面积内的荧光强度较VSV-GFP组减弱(P<0.05),M和GFP mRNA表达较VSV-GFP组降低(P<0.05)。结论HBD3可抑制VSV-GFP进入细胞后的病毒复制。

血清HBV-LP联合PRKRA对HBV相关原发性肝癌术后复发风险的预测价值

目的 分析血清乙型肝炎病毒大蛋白(HBV-LP)和干扰素诱导型双链RNA依赖性蛋白激酶激活剂A(PRKRA)水平对乙型肝炎病毒相关原发性肝癌(HBV-PLC)术后复发风险评估的价值。方法 收集确诊为HBV-PLC病人105例,根据术后是否复发分为未复发组(38例)和复发组(67例)。比较两组病人临床基线资料、生化指标结果和病理资料;采用ELISA法检测病人血清HBV-LP和PRKRA水平;采用Pearson相关性分析血清HBV-LP和PRKRA的关系,Cox回归模型分析HBV-PLC术后复发的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析HBV-LP联合PRKRA检测对HBV-PLC术后复发风险的预测价值。结果 两组病人性别、年龄、吸烟史、饮酒量、血清生化指标和肝硬化等差异无统计学意义(P>0.05),两组甲胎蛋白(AFP)<25μg/L、肿瘤大小、肿瘤包膜、肝转移、血管侵袭和肿瘤分化程度差异有统计学意义(χ^(2)=4.217~10.849,P<0.05)。与未复发组比较,复发组病人血清HBV-LP和PRKRA水平明显升高(t=6.501、3.615,P<0.01)。HBV-PLC病人血清HBV-LP与PRKRA水平呈正相关(r=0.839,P<0.01)。肿瘤直径(2~5 cm)、肿瘤包膜、肿瘤低分化、血清HBV-LP和PRKRA是HBV-PLC术后复发的危险因素(HR=1.083~6.938,P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清HBV-LP和PRKRA水平及二者联合对HBV-PLC病人术后复发有预测价值,ROC曲线下面积分别为0.796、0.685、0.822。结论 血清HBV-LP和PRKRA水平升高是HBV-PLC病人术后复发的独立危险因素,二者联合检测对HBV-PLC病人术后复发具有良好的预测价值。

不同代次人脐带间充质干细胞的生物学特性及分化

背景:人脐带间充质干细胞作为组织工程及再生医学领域的新兴种子细胞,其应用价值有赖于能否在长期体外传代扩增后仍保持稳定生物学特性和多向分化能力,需要进一步的实验研究。目的:研究不同培养代次人脐带间充质干细胞重要生物学属性的差异。方法:采用组织块法分离培养人脐带间充质干细胞,分别采用细胞计数法与MTT法检测第3-6代细胞增殖活性;流式细胞仪检测第1-9代细胞表面标志物;细胞染色法分析第3-6代细胞核型。取第3代人脐带间充质干细胞,检测其分化为神经细胞、成骨细胞及肝样细胞的能力。结果与结论:(1)细胞计数法与MTT方法检测结果一致,第3-6代脐带间充质干细胞的增殖曲线均呈"S"型,在一二天时处于缓慢增长期,2-4 d时处于对数增长期,四五天时处于平台期,五六天时处于衰退期;(2)第1-9代脐带间充质干细胞表面高表达CD90、CD44、CD73,不或低表达CD11b、CD18、CD34、CD43及HLA-DR;(3)第3-6代脐带间充质干细胞核型均为正常人体核型;(4)脐带间充质干细胞可分化为神经细胞、成骨细胞及肝样细胞;(5)结果表明,人脐带间充质干细胞具有高度增殖活性和多向分化特性。

白纹伊蚊(广州株)唾液Aalb_56 ku基因克隆表达与免疫原性分析

探讨Aalb_56 ku基因在白纹伊蚊(广州株)不同组织中的表达差异;对唾液腺中Aalb_56 ku基因进行克隆表达并探索其免疫原性。采用实时荧光定量RT-PCR法对雌蚊中肠、脂肪体、唾液腺不同组织中Aalb_56 ku基因的表达差异进行分析。针对Aalb_56 ku基因序列设计特异性引物,以唾液腺RNA为模板获得56 ku全长基因序列,构建重组质粒并测序,将测序序列进行生物信息学和抗原表位预测分析。IPTG诱导表达,亲和层析法纯化重组蛋白;制备小鼠特异性抗Aalb_56 ku蛋白抗血清。结果显示,Aalb_56 ku在白纹伊蚊(广州株)唾液腺(SG)中高表达。克隆所获唾液腺56 ku基因全长1 593 bp,可编码530个氨基酸,信息学分析提示该基因含有信号肽序列,等电点为8.40,抗原表位预测提示含有23个表位。p ET30a(+)-56 ku重组质粒可表达约56 k Da大小的融合蛋白,且呈包涵体形式表达,Western blotting鉴定具有His标签。纯化蛋白免疫Balb/c小鼠后可获得1∶100效价的特异性抗血清,提示该重组蛋白具有一定的免疫原性。

贵州地区不同民族患者输血前红细胞血型不规则抗体筛查及鉴定

目的通过对贵州医科大学附属医院住院需要输血或术前备血的67552例贵州地区不同民族患者病例,进行不规则抗体筛查及鉴定,分析不规则抗体发生频率及在各民族分布特点。方法用微柱凝胶抗人球蛋白法对2016年8月1日至2019年7月31日住院的不同民族患者进行不规则抗体筛查,并对反应性结果用谱细胞进行不规则抗体特异性鉴定。结果1)在67552例患者中检出不规则抗体反应性307例,反应率为0.45%(307/67552)。其中穿青人1.27%(6/473)、彝族1.15%(4/348)、布依族1.03%(10/975)、侗族0.58%(3/514)、汉族0.44%(273/62365)、苗族0.42%(5/1187)、土家族0.34%(2/596),各民族间不规则抗体的检出率总体差异具统计学意义(P<0.05)。2)不规则抗体检测:女性患者反应率0.56%(223/41359)高于男性的0.32%(84/26193),差异具统计学意义(P<0.05);有输血史患者反应率1.22%(129/10553)高于无输血史患者的0.31%(178/56999),差异具统计学意义(P<0.05);女性患者有妊娠史患者反应率0.52%(192/37176)高于无妊娠史患者的0.17%(7/4183),差异具统计学意义(P<0.05);在各年龄段反应率随着年龄的增大呈上升趋势,但差异不具统计学意义(P>0.05);在各ABO血型间不规则抗体检出率间比较差异不具统计学意义(P>0.05)。3)307例不规则抗体反应性的特异性涉及到7个血型系统,包括Rh系统59.28%(182/307),MNSs系统9.12%(28/307),Kidd系统0.65%(2/307),Duffy系统0.98%(3/307),Lewis系统5.86%(18/307),P系统0.65%(2/307),Digeo系统0.33%(1/307)。另外自身抗体15.64%(48/307),冷抗体0.65%(2/307),性质不明抗体4.93%(15/307),也有少数合并性抗体的检出。4)部分类型不规则抗体在汉族、布依族、穿青人、苗族、彝族、侗族分布情况为:抗-D、抗-c和自身抗体在以上民族间差异具统计学意义(P<0.05),其他类型不规则抗体在这几个民族间分布差异不具统计学意义(P>0.05)。结论1)贵州地区不规则抗体的反应率分布总体存在民族差异;2)对有输血史患者和孕产妇开展不规则抗体的常规筛查,可增加患者输血的安全性和有效性;3)不规则抗体检出主要集中在Rh血型系统,增加受血者和供血者Rh(D)抗原以外的血型抗原检测,选择血型抗原相符的血液输注,能有效降低不规则抗体反应率。

NEXN基因高表达预示结直肠癌患者的不良预后且与免疫抑制性细胞浸润相关

目的研究nexilin F-肌动蛋白结合蛋白(NEXN)基因表达与结直肠癌患者预后及免疫细胞浸润的相关性。方法利用Oncomine数据库分析NEXN基因在肿瘤和正常组织中的表达差异;通过Prognoscan数据库分析NEXN基因表达与结直肠癌患者预后的关系;通过TIMER及GEPIA数据库分析NEXN基因高表达与免疫浸润的相关性。结果 Oncomine数据库分析结果表明NEXN在结直肠癌中高表达(fold change=3.057,P<0.000 1);Prognoscan数据库GSE17536和GSE14333的芯片分析结果表明,NEXN高表达与结直肠癌患者的不良预后呈正相关(P<0.05);TIMER数据库分析显示NEXN与CD4+T细胞、巨噬细胞、树突状细胞及中性粒细胞的浸润具有中度或强的相关性(COR值>0.4,P<0.05);进一步分析不同细胞亚群标志基因发现NEXN高表达与Treg细胞、M2巨噬细胞标志基因表达呈中度或强的相关性,与T细胞耗竭相关基因TIM3和TIGIT呈中度相关性(COR值>0.4,P <0.05);利用GEPIA数据库分析也证实上述结果。结论 NEXN高表达与结直肠癌患者不良预后呈正相关,而M2型巨噬细胞、Treg细胞的浸润可能是重要的原因。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染小鼠致肺炎的模型构建与特征分析

目的建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的BALB/c小鼠吸入感染肺炎恢复模型,并评价模型的病原学、病理学、免疫学特征。方法将MRSA以气溶胶肺递送途径感染小鼠,在7 d内观察小鼠状态与死亡情况。选择亚致死剂量构建小鼠肺炎恢复模型,检测感染后小鼠的血液及心、肝、脾、肺、肾组织中的细菌载量及病理变化,并对血清与肺泡灌洗液中的细胞因子及肺组织的重要细胞群的变化趋势进行检测。结果致死剂量感染后小鼠的死亡时间集中在48 h内。亚致死剂量感染小鼠后,肺部的病变以48~72 h最为严重,其余组织器官无严重病变;多种细胞因子在12~48 h浓度升高至峰值,在96 h下降至接近感染前水平;在感染后48 h内的肺中,中性粒细胞、树突状细胞、炎性单核细胞、间质巨噬细胞和内皮细胞的比例明显增加,而T细胞、B细胞、肺泡巨噬细胞和上皮细胞的比例则下降。大部分细胞群的比例在96 h恢复至接近感染前水平。结论本研究成功构建了小鼠吸入MRSA感染肺炎恢复模型,并通过多种指标的检测明确0~96 h是小鼠感染后的应答关键期。该小鼠模型可用于深入开展MRSA感染的发病机理、免疫调控、治疗评价等研究,具有良好的应用价值。

骨髓间充质干细胞对衰老猕猴胸腺及脾脏结构和功能的影响

背景:随着年龄的增长,脾脏的结构和功能发生改变,胸腺在青春期之后逐渐萎缩退化,导致机体发生免疫功能障碍。目的:探讨骨髓间充质干细胞对衰老猕猴胸腺及脾脏结构和功能的作用。方法:筛选出平均年龄25岁老年猕猴6只,随机分为老年组和老年治疗组各3只;老年治疗组猕猴经股静脉输注超顺磁性铁纳米颗粒标记的第4代骨髓间充质干细胞(1×10^(7)个/kg),1次/d,连续输注3 d,老年组猕猴在同一时间输注等体积的生理盐水;猕猴最后一次输注骨髓间充质干细胞5个月后给予安乐死处理,取出胸腺以及脾脏组织;苏木精-伊红染色观察胸腺组织和脾脏组织的结构变化;免疫荧光染色分析胸腺组织中各种T细胞亚群以及衰老相关基因蛋白P21的表达量变化;免疫组织化学染色分析脾脏组织中各种T细胞亚群以及衰老相关基因蛋白P21的表达量变化;安乐死处理猕猴之前抽取各组猕猴股静脉血5 mL,运用酶联免疫分析外周血血清中衰老相关分泌表型肿瘤坏死因子α和白细胞介素1α的分泌水平。结果与结论:①超顺磁性铁纳米颗粒标记的骨髓间充质干细胞经过股静脉输注入猕猴体内能够成功定植在衰老胸腺和脾脏组织中发挥作用;②骨髓间充质干细胞移植治疗后,衰老猕猴中胸腺部分组织出现清晰的皮质与髓质交界,脂肪细胞减少,出现胸腺小体,向正常的胸腺组织结构转变;衰老猕猴中脾脏组织出现清晰的红髓与白髓分界,脾小体的边缘多完整,且巨噬细胞减少,向正常的脾脏组织结构转变;③与老年组相比,老年治疗组衰老胸腺和脾脏组织中CD3^(+)、CD4^(+)以及CD8^(+)T细胞的表达量呈现增高的趋势,老年治疗组衰老胸腺和脾脏组织中P21蛋白的表达量呈现显著下降趋势;④与老年组相比,老年治疗组外周血中衰老相关分泌表型肿瘤坏死因子α以及白细胞介素1α的分泌水平呈现显著下降趋势;⑤上述结果表明,通过骨髓间充质干细胞的移植治疗,能够改善老年猕猴胸腺及脾脏组织的结构和功能。

白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的特异性细胞免疫应答对BMDM细胞中DENV-2复制的影响

目的体外探究白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的小鼠脾淋巴细胞特异性免疫应答对2型登革病毒(dengue virus type 2,DENV-2)感染小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)的影响。方法采用CCK-8法分析rAlb-34k2-1蛋白对免疫/未免疫小鼠脾细胞的特异性增殖反应;制备荷载蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1、rAalb_CTL1蛋白(蚊唾液C型凝集素蛋白)的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞进行混合淋巴细胞培养,取细胞培养上清处理DENV-2感染的BMDM细胞,实时荧光定量逆转录PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测DENV-2的核酸变化,分析rAlb-34k2-1蛋白诱导的特异性T淋巴细胞应答对BMDM内DENV-2复制的影响。将免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞与rAlb-34k2-1蛋白预处理的感染BMDM进行共培养,通过qRT-PCR检测培养48、72 h后DENV-2 E基因的表达,分析免疫/未免疫小鼠淋巴细胞对预处理的BMDM中DENV-2复制的影响。结果小鼠脾细胞体外特异性增殖实验显示,与未免疫组比较,rAlb-34k2-1蛋白能导致免疫小鼠脾细胞特异性增殖,刺激指数(stimulation index,SI)>2,P<0.0001;荷载rAalb_CTL1蛋白的混合淋巴细胞培养上清未影响BMDM细胞中DENV-2的复制,荷载rAlb-34k2-1蛋白的混合淋巴细胞培养上清可抑制BMDM中DENV-2复制(2^(-ΔΔCT) <0.5,P<0.05);与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞混合培养后,rAlb-34k2-1预处理的BMDM中DENV-2复制无差异。结论rAlb-34k2-1蛋白诱导的小鼠T淋巴细胞应答上清可抑制BMDM细胞中DENV-2的复制,为探究蚊唾液蛋白诱导免疫效应在蚊媒病毒致病中的作用提供前期实验基础。

多种模式肾脏替代治疗改善全身炎症反应综合征伴急性肾功能衰竭高龄患者的疗效分析

目的探讨杂合式肾脏替代治疗对急性肾功能衰竭伴全身炎症反应综合征高龄患者的临床疗效。方法回顾性选取由重症肺炎、心脏疾病及脑血管意外引起的全身炎症反应综合征合并急性肾功能衰竭高龄患者38例,分为杂合式连续性静脉-静脉血液透析滤过联合血浆置换(CVVHDF-PE)组(n=20)及对照组(同时期患者或家属不愿接受血液净化治疗者,n=18),比较2种治疗方式对患者急性生理与慢性健康(APACHEⅡ)评分、血清肌酐(Scr)、白细胞介素10(IL-10)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,血气分析指标,CD4^+T细胞、CD8^+T细胞数量,CD4^+/CD8^+T细胞比率及患者存活率的影响。结果与对照组相比,CVVHDF-PE组治疗后APACHEⅡ评分、Scr、IL-10、IL-6、TNF-α水平明显下降;p H值升高、p CO2升高、HCO3-升高;CVVHDF-PE组治疗后CD4^+T细胞、CD4^+/CD8^+T细胞比例较前显著升高,CD8^+T细胞较治疗前明显下降,对照组的上述免疫功能指标治疗前后无明显差异;CVVHDF-PE组存活率明显高于对照组。结论重症肺炎、心脏疾病及脑血管意外引起的全身炎症反应综合征合并急性肾功能衰竭时,在常规治疗基础上,尽早应用杂合式肾脏替代治疗能有效清除体内多种毒素及炎症介质,纠正酸碱平衡紊乱,改善免疫抑制状态及临床症状,提高对高龄患者的救治成功率。

FLASH基因在野生型斑马鱼早期表达以及与HoxB4基因的关系

目的:观测FLASH基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎早期的表达及与Hox B4基因的关系。方法:以Hox B4转基因斑马鱼系为研究对象,分为实验组、实验对照组和空白对照组,实验组为Hox B4转基因斑马鱼系与Cre鱼系交配所得的过表达Hox B4的带有EGFP荧光的胚胎(Tg:Lmo2-Cre,Lmo2-LDEL-Hoxb4-EGFP),实验对照组为EGFP转基因斑马鱼系与Cre鱼系交配所得的表达EGFP荧光的胚胎(Tg:Lmo2-Cre,Lmo2-LDEL-EGFP),空白对照组为Tuebingen野生型斑马鱼的胚胎;采用FLASH反义mRNA探针做原位杂交并观察其表达。结果:观察到Tuebingen组中3. 7、9～24 hpf的神经外侧板、头部和脊索及18～30 hpf的原肾管可见黑色的阳性杂交信号,36 hpf后未见; 18～72 hpf的空白对照组与实验对照组间FLASH表达水平无差异,实验组18～30 hpf神经系统、造血系统FLASH的表达下调。结论:FLASH基因可能是Hox B4基因的下游靶基因。

戴氏虫草多糖诱导肿瘤细胞分化的研究

目的:观察戴氏虫草多糖(CDP)对人红白血病K562细胞和人早幼粒白血病HL-60细胞分化的影响。方法:用1、10、100及1 000 mg/L浓度的CDP分别处理K562细胞和HL-60细胞2 d,台盘蓝染色计数两种细胞的死活细胞数,同时检测CDP处理后K562细胞的血红蛋白的含量,观察200个HL-60细胞的分化情况。结果:在CDP作用下,K562细胞存活率增高,K562细胞内血红蛋白含量增加;HL60细胞形态向中幼,晚幼阶段方向分化,且其阳性细胞数与CDP的浓度有明显的量—效关系。结论:CDP可诱导K562细胞与HL60细胞分别向红细胞系和粒细胞系方向分化。

Irx5a基因过表达对斑马鱼胚胎早期造血的影响

目的探讨易洛魁族同源盒5a(Irx5a)基因对斑马鱼胚胎早期造血相关转录调控因子的影响。方法于斑马鱼胚胎1细胞受精卵期,显微注射Irx5a-EGFPmRNA斑马鱼胚胎作为实验组、显微注射增强型绿色荧光蛋白(EGFP)mRNA斑马鱼胚胎作为实验对照组、野生型斑马鱼作为空白对照组,应用qPCR检测相关造血转录调控因子在斑马鱼胚胎受精后9 h(9 hpf)、12 h、18 h、24 h和30 h时相的表达水平。结果实时荧光定量PCR结果表明,在原始造血转录因子1mo2、scl中,实验组从9hpf^24hpf较另外两组间明显减低;在定向造血转录因子中,c-myb实验组从12 hpf^24 hpf较另外两组间明显减低,runxl实验组从9 hpf^30 hpf较另外两组间明显减低;髓系造血转录因子pu.1和红系造血转录调控因子gata-1实验组从9 hpf^30 hpf较另外两组间明显减低,且差异有统计学意义。结论 Irx5a基因在斑马鱼原始造血、成体造血、红系造血、髓系造血的重要转录调控因子中发挥着抑制作用。