RP-HPLC-UV法测定山豆根中苦参碱与氧化苦参碱

目的:建立一种新的反相高效液相色谱法(RP-HPLC-UV)同时测定苦参碱、氧化苦参碱及其在山豆根中的应用。方法:采用RP-HPLC-UV检测方法,Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)分析色谱柱,流动相为乙腈(A)-25 mmol/L磷酸二氢钾(KH_2PO_4,B)水溶液(10∶90,V/V),检测波长210 nm,流速1.0 m L/min。结果:苦参碱、氧化苦参碱的浓度与峰面积分别在1.00~120.0 mg/L(R=0.999 7)、1.45~144.0 mg/L(R=0.999 9)浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为98.69%、102.18%;山豆根药材中苦参碱平均含量0.81 mg/g(生药量),氧化苦参碱平均含量6.98 mg/g(生药量)。结论:该方法简便、准确、实用,适用于同时分析测定苦参碱、氧化苦参碱及其相关药材。

艳山姜挥发油通过Nrf2/Notch1信号通路抑制高糖诱导的内皮间质转分化

目的:分析艳山姜挥发油(EOFAZ)抑制高糖(HG)诱导的内皮间质转分化(EndMT)的作用及其机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分析EOFAZ对HG诱导EndMT及氧化应激损伤的药效学作用,设定空白组,EOFAZ低、高剂量组(1,4μg·L-1),高糖组(35 mmol·L-1),EOFAZ预孵育2 h后加入HG共同孵育72 h复制EndMT细胞模型。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测波形蛋白(vimentin)和血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)的蛋白表达水平,血管生成实验检测细胞迁移能力以分析EOFAZ对EndMT的影响;采用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测活性氧(ROS)水平的变化以及试剂盒法检测细胞内丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)的含量,以分析EOFAZ对氧化应激的影响;采用Western blot检测核转录因子E2相关因子2(Nrf2)与Notch1的蛋白表达水平。通过腺病毒(AD)转染实现Nrf2的过表达,进一步分析EOFAZ抑制EndMT的作用机制,设定空白组,AD-Nrf2+EOFAZ组(4μg·L-1),AD-Nrf2组,高糖组(35 mmol·L-1),EOFAZ组(4μg·L-1)。Nrf2基因重组腺病毒过表达质粒感染细胞6 h,更换为正常培养基24 h,EOFAZ预孵育2 h后加入HG共同孵育72 h诱导EndMT。通过Western blot检测Nrf2,CD31,vimentin,Notch1和Snail的蛋白表达。结果:与高糖组比较,EOFAZ干预给药后明显上调HG诱导的CD31蛋白表达水平和下调vimentin蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),降低细胞迁移能力(P<0.01),同时降低ROS和MDA的水平(P<0.05,P<0.01),提高CAT和SOD的水平(P<0.01)。此外,EOFAZ干预给药能够显著上调抗氧化信号Nrf2的蛋白表达水平(P<0.01),下调Notch1的蛋白表达水平(P<0.01)。通过稳定的腺病毒转染HUVECs可实现Nrf2的高表达,Western blot结果显示,与高糖组比较,各给药处理组显著提高Nrf2和CD31的蛋白表达水平(P<0.01),显著下调vimentin,Notch1和Snail蛋白表达水平(P<0.01);与AD-Nrf2组相比,AD-Nrf2+EOFAZ组能够进一步上调Nrf2和CD31的蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),降低vimentin,Notch1和Snail蛋白表达水平(P<0.01)。结论:EOFAZ可改善HG诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤,从而抑制EndMT,其作用与Nrf2/Notch1信号通路相关。