碳点-核酸/氧化石墨烯荧光探针用于miRNA-21的细胞成像

通过生物偶联方式,将无毒的碳点(Carbon Dots,CD)表面功能化上核酸,以核酸功能化的碳点(CD-DNA)为荧光团,氧化石墨烯(GO)为猝灭剂,二者组装成CD-DNA/GO纳米荧光探针,CD与GO之间产生长程共振能量转移(long-range resonance energy transfer,LrRET),CD荧光猝灭。当miRNA-21存在时,DNA与其杂交,CD从GO表面分离,二者之间的荧光共振能量转移被打断,碳点荧光恢复,通过荧光"开"方式检测miRNA-21,检测限为0.2nmol/L,线性范围为1~500nmol/L。该探针成功应用于血癌K562细胞中miRNA-21的原位成像,为血癌的原位诊断和治疗提供了研究依据。

基于NF-κB通路探讨鹿角壮骨胶囊对兔膝骨关节炎的保护作用机制

目的 观察鹿角壮骨胶囊对兔膝骨关节炎模型核因子(NF)-κB通路的影响,探讨其对膝骨关节炎的保护作用机制。方法 采用木瓜蛋白酶右侧膝关节腔内注射诱导建立兔膝骨关节炎模型,将24只长耳大白兔随机分为正常组、模型组、治疗组,正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,治疗组给予鹿角壮骨胶囊0.3g/(kg·d)灌胃,治疗4w后,采用Western印迹法检测各组膝关节滑膜组织中NF-κB抑制蛋白(IκB)α、NF-κBp65、骨桥蛋白(OPN)的表达,采用免疫组化法观察各组膝关节软骨组织中血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子(HIF)-2α、NF-κBp65的阳性表达水平。结果 Western印迹结果显示,与正常组比较,模型组兔膝关节滑膜IκBα、NF-κBp65、OPN的蛋白相对表达量明显升高(P<0.05),而治疗组IκBα、NF-κBp65、OPN的蛋白相对表达量明显低于模型组(P<0.05)。免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组兔膝关节软骨VEGF、HIF-2α、NF-κBp65的表达明显升高(P<0.05),而治疗组VEGF、HIF-2α、NF-κBp65的表达明显低于模型组(P<0.05)。结论 鹿角壮骨胶囊可能通过抑制NF-κB信号通路的激活发挥缓解膝骨关节炎的作用。

OMT对高交感活性诱导大鼠心室肥厚的保护作用

目的研究氧化苦参碱(OMT)对高交感活性诱导大鼠实验性心室肥厚的改善作用。方法SD大鼠随机分为对照组、模型组、OMT高、低剂量组、普萘洛尔组,各组于造模前1 w开始灌胃给药,除对照组外,其余各组均连续腹腔注射去甲肾上腺素(NE)15 d复制实验性心肌损伤模型,造模结束后检测大鼠血压指标、取材检测心室重构参数及羟脯胺酸含量,qRT-PCR法检测Notch-1信号变化。结果OMT能够改善大鼠血压变化,降低心室重构参数及羟脯胺酸含量,改善Notch-1信号变化。结论OMT对高交感活性诱导的实验性心肌肥厚有显著的改善作用,可能与降低Notch-1信号的mRNA表达有关。

鹿角壮骨胶囊对膝骨关节炎兔软骨iNOS和CollagenⅡ表达的影响

目的观察鹿角壮骨胶囊对兔膝骨关节炎模型关节软骨中iNOS和CollagenⅡ表达的影响。方法采用木瓜蛋白酶右侧膝关节腔内注射诱导建立兔膝骨关节炎模型,24只长耳大白兔随机分为正常组、模型组、给药组(鹿角壮骨胶囊0.3 g/kg),连续灌胃给药4周。通过甲苯胺蓝染色观察病理形态,按OOCHAS评分标准进行评分,免疫组化检测各组兔膝关节软骨iNOS和CollagenⅡ表达。结果与正常组比较,模型组OOCHAS分级和分期的R值、OOCHAS评分总分升高(P<0.05),膝关节软骨iNOS的表达升高(P<0.05),CollagenⅡ的表达降低(P<0.05);与模型组比较,给药组OOCHAS评分总分降低(P<0.05),iNOS的表达降低(P<0.05),而CollagenⅡ的表达升高(P<0.05)。结论鹿角壮骨胶囊可通过降低软骨中iNOS的表达,抑制CollagenⅡ的降解,从而起到保护膝关节软骨,延缓关节退变的治疗效果。

延安产2种蒿类挥发油提取及抑菌活性分析

针对延安产的青蒿(Artemisia carvifolia)和白蒿(Herba artimisiae sieversianae)2种植物,采取水蒸气蒸馏法提取其挥发油,采用菌丝生长速率法及96孔板法检测挥发油的抑菌活性,结果表明:当浓度是2.0 mg/mL时,青蒿挥发油对9种被测植物病原真菌的抑制作用均较差,对油菜菌核(Sclerotinia sclerotioru)活性最好,也仅为57.30%;白蒿挥发油对受试真菌的抑制作用较强,对人参锈腐菌(Cylindrocarpon destructans)、梨黑星病(Venturia nashicola)、烟草赤星病菌(Alternaria alternata)的抑制率均达到90%以上;2种精油除了对大肠杆菌(Escherichia coli)表现出较弱的抑制活性外,对于其他受试菌均无活性,其最小抑菌浓度(MIC)均为500 mg/mL。采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分析了2种蒿挥发油的主要化学成分,结果从青蒿中鉴定出26种化合物,其中含量最多的为石竹烯氧化物(25.75%);从白蒿中鉴定出49种化合物,萘嵌戊烷含量最高(30.37%),分析结果显示延安产2种蒿挥发油的主要成分和含量与其他产地的差异较大。白蒿挥发油具有显著的抑菌活性,具备开发为绿色杀菌剂的潜力。

刺梨中质量标记物的提取工艺优化及其含量同时测定

利用响应面法优化刺梨中质量标记物的提取工艺,并建立HPLC法同时测定其含量。以刺梨根为原料,利用单因素实验与响应面试验优化了刺梨中4个质量标志物(三萜类化合物)的提取工艺,并比较分析刺梨不同部位(根、茎、叶子和果实)的质量标志物含量差异。结果表明,单因素实验确定了影响刺梨萜类物质得率的重要因素为溶剂用量、乙醇浓度、提取时间和提取次数。以刺梨中4个质量标志物的总含量为综合考察指标,采用响应面试验确定了刺梨三萜化合物的最适提取工艺条件为:按照溶剂用量为1:25 g/mL加入体积分数为70%的乙醇,先超声30 min,再将料液进行加热回流2 h,在此条件下,刺梨叶中4个质量标志物的总含量为2.64%,其中刺梨苷含量为0.99%、野蔷薇苷含量为0.72%、蔷薇酸含量为0.43%、委陵菜酸含量为0.51%;刺梨不同部位的4个质量标志物总含量为刺梨叶>刺梨根>刺梨茎>刺梨果。本研究为刺梨的质量评价及其总三萜的开发利用提供科学参考。

水热法合成茶叶荧光碳点的研究

以茶叶为碳源,乙二胺为表面修饰剂,通过一步水热法合成生物质荧光碳点。对茶叶用量、乙二胺用量、反应时间和反应温度进行了优化以及正交实验的处理,以荧光强度为指标,通过单因素分析表明:茶叶用量1.2 g碳点荧光强度最高、乙二胺用量0.8mL荧光强度最高、反应时间5h荧光强度最高、反应温度220℃荧光强度最高。通过正交试验表明最佳优化组合为:茶叶1.2g、乙二胺0.6mL、反应时间6h、反应温度220℃,碳点荧光强度最高,其荧光量子产率为8.2%,发射峰439nm,其半峰宽125nm,粒径3.0±0.25nm,且大小均匀、分散良好,富含氨基和羧基等官能团,在紫外灯的照射下发出蓝绿色的明亮荧光,为生物医学传感及成像打下基础。

苗药组方二岩虎果无糖颗粒质量标准研究及药效评价

目的建立苗药组方二岩虎果无糖颗粒的质量标准,并评价其药效。方法采用薄层色谱法对二岩虎果制剂中岩豇豆、岩白菜、虎杖进行定性鉴别;按2020年版《中国药典(四部)》颗粒剂项下要求,对制剂的粒度、水分、溶化性、干燥失重、重金属和砷盐进行检查;采用高效液相色谱法测定制剂中石吊兰素含量,色谱柱为Dikma-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(68∶32,V/V),流速为1 mL/min,检测波长为334 nm,柱温为30℃,进样量为20μL。将80只SPF级KM种小鼠随机分为空白对照组(生理盐水)、传统汤剂组(1 g/mL)、颗粒剂组(0.387 g/mL)、阳性对照组(复方岩白菜素2.8 mg/mL或阿司匹林10 mg/mL),各10只,平行2组。各组小鼠均连续给药7 d,分别于末次给药1 h后用氨水致小鼠咳嗽,或于小鼠右耳两面涂抹二甲苯致炎,分别统计各组小鼠的咳嗽潜伏期、3 min内咳嗽次数,并计算肿胀抑制率。结果岩豇豆、岩白菜、虎杖药材的薄层色谱斑点均显色清晰,专属性强,分离度好,且阴性对照无干扰;3批样品不能通过1号筛与能通过5号筛颗粒粒度的总和低小于15%,水分均低于8%,全部在5 min内溶解,减失质量均不超过2.0%,重金属含量均小于1×10^(-5),砷盐含量均小于2×10^(-6)。石吊兰素质量浓度在5~50μg/mL范围内与峰面积线性关系良好,r=0.9996(n=5);含量测定精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2.0%(n=6),平均加样回收率为102.32%,RSD为3.70%(n=6)。与传统汤剂组比较,颗粒剂组小鼠的咳嗽潜伏期延长,3 min咳嗽次数减少,肿胀抑制率降低,但差异均不显著(P>0.05)。结论所建立的方法操作简便,结果准确,稳定性和重复性均较好,可用于二岩虎果无糖颗粒的质量控制,且颗粒剂药效良好。

二岩虎果无糖颗粒HPLC指纹图谱的建立

目的建立二岩虎果无糖颗粒(石吊兰、岩白菜、虎杖、石仙桃)HPLC指纹图谱。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Waters X-Select C_(18)反相色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相甲醇-水,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长304 nm。通过聚类分析、主成分分析、偏最小二乘法判别分析进行化学模式识别。结果10批样品指纹图谱中有15个共有峰,指认出其中4个(岩白菜素、虎杖苷、石吊兰素、大黄素),相似度均大于0.900。所有样品分为3类,石吊兰素、未知化合物1、岩白菜素、未知化合物2、虎杖苷、大黄素是各批样品产生差异的重要成分。结论HPLC指纹图谱结合化学模式识别可为二岩虎果无糖颗粒质量控制标准的制定提供参考。

芳姜黄酮对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞迁移、侵袭及凋亡的影响和机制研究

为研究芳姜黄酮(Ar-Turmerone)对人鳞状细胞癌A431细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及机制。实验采用CCK-8法检测抑制率,吉姆萨染色观察细胞形态,划痕实验和Transwell小室实验研究细胞迁移和侵袭能力的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。此外,通过实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)与蛋白质印迹法(western blot)法检测mRNA和蛋白表达。siRNA阻断Notch1,Hes1和PTEN,检测相应的下游mRNA和蛋白的表达变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果发现,芳姜黄酮可以抑制A431细胞增殖,使细胞形态发生改变,抑制细胞体外迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡。经过芳姜黄酮处理后,Notch1,Hes1,PTEN的mRNA和蛋白表达升高。沉默Notch1,Hes1 mRNA和蛋白表达低于单纯给药组,而沉默Hes1,PTEN mRNA和蛋白表达也低于单纯给药组;沉默PTEN后,与单纯给药组相比,细胞死亡率降低。总之,芳姜黄酮可以抑制人鳞状细胞癌A431细胞的增殖并促进其凋亡,且具有抑制体外迁移和侵袭的作用,其促进细胞凋亡的机制是通过Notch1/Hes1/PTEN途径实现的。

二岩虎果无糖颗粒处方工艺研究

目的优选二岩虎果无糖颗粒处方工艺。方法采用湿法制粒,以制粒吸湿性评分、流动性评分、溶解性评分、成型性评分及浸膏辅料比的综合评分筛选湿润剂(乙醇)体积分数、辅料及其用量、质量比,并验证;筛选矫味剂及其用量和制粒生产环境相对湿度。结果筛选出辅料为糊精和可溶性淀粉。最佳处方工艺为,浸膏、糊精、可溶性淀粉按1∶1.7∶0.3的质量比混合均匀,以80%乙醇溶液为润湿剂,成品质量0.5%的阿斯巴甜为矫味剂。验证试验制得的二岩虎果无糖颗粒的成型性好,吸湿率、成型率、休止角、溶解率分别为7.44%,91.98%,26.46°,91.47%;临界相对湿度为69%。结论该处方工艺合理、可行,可为二岩虎果无糖颗粒的医院制剂及工业化生产提供一定参考。

具有α,β-不饱和酮的2-吲哚酮衍生物的设计、合成及抗肿瘤活性

以2-吲哚酮衍生物(1a~1c)与醛(2a~2n)为原料,通过克脑文格尔反应和酰化反应得到17个(E)-1-乙酰基亚苄基吲哚酮衍生物(1~17),其结构经1 HNMR、13 CNMR和MS(ESI)表征。采用CTG法评价了目标化合物1~17对人非小细胞肺癌细胞(A-549),人乳腺癌细胞(MCF-7)和人胃腺癌细胞(BGC-823)3种肿瘤细胞增殖的抑制活性。结果表明:化合物16对3种肿瘤细胞具有显著的抑制活性,IC_(50)值依次为0.50±0.03(A549)、0.20±0.02(MCF-7)和0.34±0.04μM(BGC-823),尤其是对MCF-7的抗增殖活性与阳性对照阿霉素相当。

淫羊藿药渣栽培平菇的对比研究

为探究淫羊藿药渣栽培平菇生长情况和改善贵州淫羊藿废弃药渣资源的再利用问题,采用重点实验室培养的平菇菌株,将不同比例的淫羊藿药渣添加到栽培料中,并与玉米杆栽培料进行对比,比较各处理条件下平菇菌丝性状、发育性状和产量性状等差异。结果表明:以淫羊藿药渣为主基质,配方为淫羊霍54%、玉米面3%、普钙10%、石灰3%、玉米芯15%、麸皮15%的T3处理栽培平菇其产量指标表现较好,生物学转化率较高。

刺梨的十大功效

刺梨,是蔷薇科蔷薇属植物,云贵高原及四川西部高原特有的野生资源。《黔书》记载:“味甘而微酸,食之可以已闷,亦可消滞积”。《本草纲目拾遗》中记载:“刺梨根、茎、叶、果实种子均可入药,有健胃、消食、滋补作用,根皮有止泻的功效”。《贵阳府志》中记载“以刺梨掺糯米造酒者,味甜而能消食”。

响应面法优化“三豆饮”水提工艺及其抗氧作用研究

目的:优化三豆饮水提工艺,并研究其抗氧化作用。方法:在单因素实验基础上,利用响应面法以提取次数、料液比、提取时间为因素,总多糖、总多酚提取量为响应值,以获得最佳的三豆饮提取工艺;通过体外清除DPPH·和羟自由基的测定,研究三豆饮提取液抗氧化作用。结果:三豆饮最佳水提工艺条件为:提取次数3次、料液比1:18(g:m L)、提取时间2.5 h,在此条件下三豆饮提取液中总多糖含量为242.9 mg/g、总多酚的含量为8.86 mg/g。提取液清除DPPH·IC_(50)的质量浓度为206.2μg/mL、清除羟自由基IC50的质量浓度为184μg/mL,其抗氧化作用随总多糖、总多酚含量的增加而增加。结论:三豆饮提取液总多糖、总多酚含量实测值和预测值基本一致,该工艺稳定可行,提取液具有较好抗氧化活性。

基于酪氨酸酶抑制作用的白术水提工艺研究

目的优化白术的提取工艺。方法在单因素试验基础上,利用响应面法以料液比、提取次数、提取时间为因素,提取物的产率、提取物对酪氨酸酶的抑制率为响应值,确定白术的最佳水提工艺,研究其美白效果。结果白术的最佳提取工艺条件为料液比1∶14,提取次数3次,提取时间2.5h,在此条件下白术提取物的产率可达到64.4%;提取物对酪氨酸酶的抑制率可达到65.16%。结论白术提取物的产率、提取物对酪氨酸酶的抑制率的实测值和预测值基本一致,具有较好的美白效果。

氯化血根碱对亚砷酸钠致小鼠肝损伤的预防和治疗作用

[背景]天然产物氯化血根碱(SC)对小鼠肝脏纤维病变和肝脏急性损伤均有明显的改善作用,但其对环境污染物亚砷酸钠(SA)导致的小鼠肝损伤是否有保护作用尚未见报道。[目的]研究SC对SA所致小鼠肝损伤的预防和治疗作用。[方法]将140只SPF级雄性昆明小鼠随机分为预防效果研究组和治疗效果研究组,分别设立空白组(生理盐水),模型组(SA 5 mg·kg^(−1)),阳性对照组(双环醇11.375 mg·kg^(−1)和谷胱甘肽182 mg·kg^(−1)),SC低、中、高剂量组(25、50、100 mg·kg^(−1)),每组10只。预防效果研究中,空白组给予生理盐水,模型组给予SA,其余各组(即SC低、中、高剂量组以及阳性对照组)在SA灌胃前30 min给予相应药物,每日1次,持续处理28 d。在治疗效果研究中,空白组持续给予生理盐水;其余各组给予SA持续染毒28 d后,模型组给予生理盐水,余组每天给予相应药物进行治疗28 d。实验结束后处死小鼠,分别测定血清及其肝组织的生理生化指标,并采用HE染色观察其组织病理变化。[结果]预防和治疗效果研究中:与空白组比较,SC各剂量组小鼠体重、肝脏质量、肝脏系数及血清谷丙转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)差异均无统计学意义(P>0.05);而与模型组比较,SC各剂量组小鼠体重上升(P<0.01),肝脏质量、肝脏系数下降(P<0.01),ALT、AST、TBIL、MDA降低(P<0.05或P<0.01),而GSH、SOD上升(P<0.05或P<0.01)或呈现上升的趋势;与阳性对照组比较,各指标差异均无统计学意义(P>0.05);组织病理学分析显示,SC各剂量组小鼠肝小叶结构均较清楚,肝索排列较整齐,炎症细胞浸润减少。[结论]对SA导致的小鼠肝损伤,SC具有一定的预防和治疗效果。