药前酶基因修饰的骨髓间充质干细胞对黑色素瘤靶向治疗的研究

目的:利用药前酶基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)提高恶性黑色素瘤局部化疗效果。方法:从雄性大鼠股骨、胫骨骨髓中分离、培养大鼠BMSCs并鉴定;将细胞色素氧化酶P4502E1(CYP2E1)以含增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的重组腺病毒为载体转染BMSCs,用RT-PCR和荧光显微镜观察绿色荧光的方法来检测目的基因的表达;将人黑色素瘤细胞MV3注射到裸鼠背部皮下,建立裸鼠MV3移植瘤模型,将移植瘤模型分为4组,分别给予CYP2E1-BMSCs及达卡巴嗪,单用CYP2E1-BMSCs,单用达卡巴嗪以及生理盐水治疗,并检测各组的体内局部抗肿瘤效应。结果:成功分离培养大鼠BMSCs,形态上均一,贴壁生长,以长梭形为主,体积小,核浆比大,呈明显的同向性改变,漩涡状盘旋排列;流式细胞术检测提示高表达CD29、CD71,低表达CD34、CD45;体外经不同诱导体系培养后提示具有成骨、成脂、成软骨潜能;鉴定后的BMSCs经重组腺病毒转染后,荧光显微镜可观察到转基因靶细胞EGFP表达,RT-PCR法从mRNA水平检测到目的基因在转基因细胞中表达;荧光显微镜观察治疗后裸鼠的肿瘤及各脏器的组织切片提示CYP2E1-BMSCs能聚集在肿瘤组织及转移灶周围,CYP2E1-BMSCs联合化疗药物组局部凋亡率明显高于单纯化疗组及空白对照。结论:CYP2E1-BMSCs在体内具有协同化疗药物抗肿瘤的作用,并有向肿瘤细胞聚集的特点。

贵阳地区胃部疾病患儿HP耐药性及其23S rRNA基因突变特征分析

目的探讨贵阳地区胃部疾病患儿幽门螺杆菌(HP)耐药性及其23S rRNA基因V区突变特征。方法从561例贵阳地区胃部疾病患儿胃黏膜组织标本中分离培养HP,采用E-test药敏试验检测其对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑、左氧氟沙星及四环素的耐药性。提取克拉霉素耐药HP菌株基因组DNA,对23S rRNA基因V区直接测序,将序列与Gen Bank中收录的HP敏感菌株U27270相关序列进行比对。结果分离出HP菌株49株,其中克拉霉素耐药18株、阿莫西林耐药8株、左氧氟沙星耐药13株、甲硝唑耐药菌株24株、四环素耐药菌株7例,耐药率分别为36.7%、16.3%、26.5%、49%、14.3%。克拉霉素耐药HP菌株23S rRNA基因V区存在的点突变包括A2144G(4/18)、T2183C(15/18)、C2196T(1/18)、A2224G(1/18)、T2245C(18/18)、T2277C(1/18)、A2303G(2/18)、G2309A(1/18)、C2423T(1/18)、C2695A(1/18)、C2750T(1/18)、C2760T(2/18)、G2769T(1/18)。结论贵阳地区胃部疾病患儿HP对克拉霉素、甲硝唑的耐药率较高,对阿莫西林和四环素耐药率较低。克拉霉素耐药HP菌株23S rRNA基因V区存在点突变,最常见的突变位点是T2183C。