四种有机溶剂对斑马鱼眼睛发育的影响

目的评估乙醇、异丙醇、丙酮和二甲基亚砜四种有机溶剂对斑马鱼胚胎发育,尤其是眼睛发育的影响,为其作为溶剂在斑马鱼眼睛疾病模型研究中提供参考。方法将发育至12 hpf斑马鱼胚胎暴露于0.5%乙醇、1%异丙醇、1.5%丙酮和2.5%二甲基亚砜至72 hpf,观察其存活率、致畸率及眼睛发育状况。结果对照组和乙醇、异丙醇、丙酮、DMSO暴露组存活率分别为96%和93%、90%、90%、86%。对照组斑马鱼幼鱼形态正常,而有机溶剂暴露组则出现了不同程度形态变化如心包水肿、出血、卵黄缺损和身体弯曲等。其中,以DMSO致畸作用最严重,乙醇的致畸作用最弱。方差分析显示,斑马鱼幼鱼眼睛长度/身体长度比值在有机溶剂暴露组和对照组之间没有显著差异;但是DMSO暴露组斑马鱼幼鱼眼睛面积/身体面积比值显著低于其他组。另外与对照组相比,四种有机溶剂暴露组的视网膜分层均为正常,乙醇、异丙醇、丙酮暴露组视锥细胞、视杆细胞和视网膜神经元细胞信号正常,但DMSO暴露组各细胞信号均较弱。结论因此,在以斑马鱼为模型动物进行眼睛疾病的相关研究时,我们应谨慎选择有机溶剂作为药物或其他化学受试品的溶解载体,并且应该进行预实验来确定其最佳使用浓度。

生化指标及自身抗体对原发性胆汁性肝硬化的诊断价值

目的探讨肝功能指标、免疫球蛋白以及自身抗体对原发性胆汁性肝硬化(PBC)的临床诊断价值。方法收集PBC患者共78例,同时选取同期药物性肝损伤(DILI)患者75例,健康体检者75例。分析三组肝功能指标(ALT、AST、ALP、GGT、TBA、TBIL),免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM),以及抗核抗体和抗核抗体谱(其中包括AMA-M2、抗体ACA、抗Ro-52抗体等)的血清学特点。结果 PBC组的ALT、AST低于DILI组,差异有统计学意义(P<0.05),ALP、IgG、IgM高于DILI组,差异有统计学意义(P<0.05);除IgA外,PBC组与DILI组的肝功能指标和免疫球蛋白均高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。除核周型外,PBC组各项自身抗体指标阳性率均高于DILI组,差异有统计学意义(P<0.05),PBC组各项自身抗体指标阳性率均高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。各自身抗体指标诊断敏感性最高的是胞浆颗粒型和AMA-M2(56.4%),特异性最高的是着丝点型和ACA均为(99.3%),约登指数最高的是AMA-M2(0.554)。AMA-M2、胞浆颗粒型抗、抗Ro-52抗体联合检测诊断PBC的约登指数最高(0.669),余下四组联合检测项目随着指标的增加其约登指数并没升高。结论肝功能指标和免疫球蛋白对PBC和DILI鉴别诊断具有局限性;ANA和ANAs能较好鉴别诊断PBC与DILI、健康体检者,其次,联合检测AMA-M2、胞浆颗粒型、抗Ro-52抗体能提高PBC的诊断准确率。

多参数流式细胞术检测人骨髓标本中非肿瘤性异常细胞表型研究

目的:分析多参数流式细胞术(MFC)检测骨髓标本中非肿瘤性异常表型相关疾病,包括意义不明的单克隆免疫球蛋白血症(MGUS)、单克隆B细胞增多症(MBL)、Fcγ受体Ⅲ类B(FcγRⅢB)缺失、CD36缺失等的表型特征。方法:回顾性观察性研究。选取2020年1月3日至2024年3月31日于河北燕达陆道培医院进行骨髓白血病/淋巴瘤一步法MFC筛查肿瘤性疾病的24 864例患者。收集患者一般临床资料以及MFC结果。根据年龄分为<45岁组(11 495例)、45~<60岁组(5 322例)、≥60岁组(7 081例);按疾病性质分为良性疾病组(8 336例)、恶性疾病组(15 562例)、其他组(966例)。分析各组骨髓标本中非肿瘤性异常表型的发生情况。结果:MGUS、MBL、FcγRⅢB缺失、CD36缺失的发生率分别为0.072%(18/24 864)、0.511%(127/24 864)、0.221%(55/24 864)、0.004%(1/24 864)。恶性疾病组MBL的发病率低于良性疾病组( P<0.001),MGUS的发病率高于良性疾病组( P=0.034)。良性疾病组中各疾病类型的MBL发生率比较,差异有统计学意义( P<0.001),其中全血细胞减少患者中MBL发生率最高为2.72%(48/1 765);恶性疾病组中,各疾病类型的MBL、MGUS发生率比较,差异均有统计学意义( P均<0.001),其中骨髓增生异常综合征/骨髓增殖性疾病患者发生率均最高,分别为1.95%(3/154)、1.30%(2/154)。 结论:应用MFC进行白血病/淋巴瘤一步法检测的非肿瘤性异常细胞表型特征存在一定差异,对疾病的筛查具有一定的借鉴意义。

急性B淋巴细胞白血病嵌合抗原受体-T细胞免疫治疗后血清细胞因子水平与桥接异基因造血干细胞移植预后的相关研究

目的研究急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者接受嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗后血清细胞因子和趋化因子水平与其桥接异基因造血干细胞移植术(allo-HSCT)后发生早期急性移植物抗宿主病(aGVHD)及血清细胞因子和趋化因子水平与患者预后关系。方法根据病例对照原则纳入2019年9月18日至2022年5月9日于河北燕达陆道培医院接受CD19-CAR-T细胞免疫治疗且后续均进行allo-HSCT的42例B-ALL患者为研究对象, 采用Mann-WhitneyU检验比较同一时间点不同患者CAR-T细胞免疫治疗后到桥接移植期间aGVHD相关细胞因子以及趋化因子的水平变化, 观测时间点为接受CAR-T治疗前当天, 以及接受CAR-T治疗到桥接移植之间的时间点:接受CAR-T细胞治疗后第4、7、14、21、28天。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估细胞因子及趋化因子预测患者发生aGVHD及aGVHD患者发生死亡的预测价值。采用 Kaplan-Meier法和Log-rank检验进行生存分析。结果入组42例患者, 24例发生aGVHD, 其中11例死于aGVHD, 31例患者存活。接受CAR-T细胞治疗前当天aGVHD组与无aGVHD组患者细胞因子及趋化因子比较, 差异无统计学意义(P>0.05)。第21天时, aGVHD组患者血清弹性蛋白酶特异性抑制剂(Elafin)水平为4 482(2 811, 6 061)ng/L, 较无aGVHD组患者的2 466(1 948, 3 375)ng/L高(Z=3.145, P=0.001);第28天时aGVHD组患者血清Elafin水平为4 391(2 808, 5 594)ng/L, 高于无aGVHD组的2 463(1 658, 2 830)ng/L(Z=2.038, P=0.048)。在第14天时, aGVHD死亡组与aGVHD生存组比较, 血清巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)[21.02(12.36, 30.35)ng/L比5.56(3.64, 10.79)ng/L]、可溶性CD25(sCD25)[422.47(257.99, 1 233.78)IU/ml比 216.11(133.75, 457.39)IU/ml]、Elafin[4 101(2 393, 5 006)ng/L比 2 155(1 781, 3 033)ng/L]、白细胞介素(IL)-6[119.08(23.97, 183.43)ng/L比8.39(2.91, 17.42)ng/L]、IL-8[13.56(12.50, 24.52)ng/L比2.83(1.73, 6.87)ng/L]更高(Z=2.653, P=0.007;Z=2.176, P=0.030;Z=2.058, P=0.041;Z=3.329, P<0.001;Z=3.162, P=0.001)。KM生存曲线显示第14天时血清高MIP-1α、sCD25、Elafin、IL-6、IL-8水平患者的生存率低于血清低MIP-1α、sCD25、Elafin、IL-6、IL-8水平患者, 差异具有统计学意义(χ^(2)=12.353、4.890、6.551、10.563、20.755, P均<0.05)。结论 CAR-T细胞免疫治疗桥接allo-HSCT患者的结局与患者CAR-T细胞免疫治疗到桥接allo-HSCT之间的血清MIP-1α、sCD25、Elafin、IL-6、IL-8相关, 高MIP-1α、sCD25、Elafin、IL-6、IL-8水平提示预后不良, 可作为提示临床选择合适疗法的标志物。

基于生物信息学分析肺炎链球菌LytR蛋白特征

目的研究肺炎链球菌spr1759(LytR)蛋白的基本理化性质,初步分析预测该蛋白的结构与功能。方法利用Bioedit、TMHMM、TargetP和ExPASy等多种生物信息学软件对肺炎链球菌spr1759蛋白进行分析,并对其功能预测。利用TMHMM软件对比肺炎链球菌spr1759蛋白与炭疽芽孢杆菌BAS5115蛋白和枯草芽孢杆菌DJ97_1211二级结构差异;利用Megalign软件分析它们之间的氨基酸序列相似性。结果肺炎链球菌spr1759蛋白为一亲水性蛋白,其相对分子质量为37.56×10~3,等电点为5.11,存在1个跨膜区。肺炎链球菌spr1759蛋白属于LytR_cpsA_psr超家族,可能具有阴离子细胞壁多聚物合成相关酶的功能。与其他细菌蛋白比对发现,该蛋白与炭疽芽孢杆菌BAS5115蛋白和枯草芽孢杆菌DJ97_1211具有相似的跨膜结构域,均含有1跨膜结构;肺炎链球菌spr1759蛋白与炭疽芽孢杆菌BAS5115蛋白和枯草芽孢杆菌DJ97_1211蛋白氨基酸序列具有较高同源性,全长序列相似性分别为35.7%和32.5%。结论肺炎链球菌LytR蛋白是具有跨膜结构的亲水性蛋白,可能具有阴离子细胞壁多聚物合成相关酶学功能。

多色流式细胞术检测微小残留病变在CD19-CAR-T桥接allo-HSCT治疗B-ALL患者监测的意义和价值

目的探讨多色流式细胞术(MFC)监测微小残留病变(MRD)在CD19嵌合抗原受体T细胞(CD19-CAR-T细胞)治疗后桥接异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗难治、复发急性B淋巴细胞白血病(r/r B-ALL)患者过程中的意义和价值。方法收集2019年1月至7月河北燕达陆道培医院收治的r/r B-ALL患者37例,年龄15(6,19)岁,其中男24例,女13例,均为经CD19-CAR-T细胞免疫治疗桥接allo-HSCT治疗的患者。采用多色流式细胞技术以胞浆CD79a抗体设B细胞门监测患者在CART治疗前第0天、治疗后第15天、第28天及移植后骨髓、脑脊液样本、组织样本的MRD值评估肿瘤细胞残存以及肿瘤累及位置,监测CD19阳性B细胞在移植前恢复情况及CD19阳性B细胞恢复距离CAR-T细胞回输天数评估CAR-T细胞实际杀伤效果,同时进行患者各时间点外周血CAR-T细胞计数等。采用Kaplan-Meier法及Log-rank检验分析单因素累积生存差异。结果(1)37例患者中8例死亡,29例存活。5例患者移植后复发,其中复发患者4例死亡,1例存活。(2)死亡组患者在CAR-T细胞免疫治疗后到桥接移植前MFC-MRD阴性缓解率为5/8,低于存活组28/29(χ^(2)=7.540,P=0.006);回输第15天阴性缓解率为3/8,低于存活组24/29(χ^(2)=6.512,P=0.011);回输第28天阴性缓解率为3/8,低于存活组26/29(χ^(2)=10.065,P=0.002)。而死亡组伴髓外MFC-MRD阳性肿瘤浸润率为(7/8)高于存活组(14/29)(χ^(2)=3.931,P=0.047)。CAR-T细胞免疫治疗后,死亡组CD19阳性细胞恢复时间即CAR-T细胞可对CD19阳性细胞杀伤时间42.00(30.00,49.00)d短于生存组55.00(41.50,73.50)d(Z=0.022,P=0.020)。结论利用多色流式细胞术检测B-ALL患者微小残留病变发现,在CD19-CAR-T细胞免疫治疗后到桥接allo-HSCT前、回输第15天、回输第28天等时间点,阳性结果均提示预后不良。这一结果为临床进行对症治疗提供一定指导意义。