异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒感染患者临床及免疫特征分析

目的探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后患者外周血淋巴细胞亚群特征在发生巨细胞病毒(CMV)感染鉴别中的意义及价值。方法回顾性研究。收集2021年5月31日至2023年1月30日北京陆道培医院收治的allo-HSCT患者。本研究收集了CMV感染组50例及非CMV感染组47例。采用流式细胞技术检测患者allo-HSCT后第30(+30)天时间点外周血淋巴细胞亚群,分析淋巴细胞绝对数及亚群在发生CMV感染组患者鉴别中的意义。采用Mann-Whitney U检验和χ^(2)检验。对单因素分析有统计学意义的指标再进行二元Logistic回归分析,并绘制ROC曲线。不同结局下各单因素的生存曲线采用Kaplan-Meier法,Log-rank检验。结果1.在CMV感染组患者中22%(11/50)明确CMV病毒血症合并CMV病,其外周血全血CMV病毒最高拷贝数1600(1400,5800)拷贝数/ml高于未明确合并CMV病患者970(670,2300)拷贝数/ml,差异有统计学意义(Z=-2.281,P=0.029)。2.CMV感染组患者随访终点OS为80%(40/50),非CMV感染组患者随访终点OS为87.2%(41/47)。两组随访终点OS上差异无统计学意义(χ^(2)=0.231,P=0.630)。3.在二元逻辑斯回归模型中,患者回输的CD34细胞数、移植后亚群CD3+CD38+T细胞占CD3+T细胞百分比、CD4+CD38+T细胞占CD4+淋巴细胞百分比为发生感染的重要独立危险因素,接受者操作特性曲线(ROC)曲线结果显示CMV感染的独立危险因素曲线下面积AUC=0.914(>0.7,P<0.001),决断值为0.702,敏感度0.857,特异度0.844。结论allo-HSCT移植后,CMV感染组免疫亚群显示较非CMV感染组有较低的T细胞和CD4+T细胞百分比,在T细胞分化上以TEM增多,NaiveT细胞减少为表现。并表明活化指标CD38在T细胞上的表达水平对于CMV感染有较好的判断价值。

急性B淋巴细胞白血病嵌合抗原受体-T细胞免疫治疗后血清细胞因子水平与桥接异基因造血干细胞移植预后的相关研究

目的研究急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者接受嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗后血清细胞因子和趋化因子水平与其桥接异基因造血干细胞移植术(allo-HSCT)后发生早期急性移植物抗宿主病(aGVHD)及血清细胞因子和趋化因子水平与患者预后关系。方法根据病例对照原则纳入2019年9月18日至2022年5月9日于河北燕达陆道培医院接受CD19-CAR-T细胞免疫治疗且后续均进行allo-HSCT的42例B-ALL患者为研究对象, 采用Mann-WhitneyU检验比较同一时间点不同患者CAR-T细胞免疫治疗后到桥接移植期间aGVHD相关细胞因子以及趋化因子的水平变化, 观测时间点为接受CAR-T治疗前当天, 以及接受CAR-T治疗到桥接移植之间的时间点:接受CAR-T细胞治疗后第4、7、14、21、28天。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估细胞因子及趋化因子预测患者发生aGVHD及aGVHD患者发生死亡的预测价值。采用 Kaplan-Meier法和Log-rank检验进行生存分析。结果入组42例患者, 24例发生aGVHD, 其中11例死于aGVHD, 31例患者存活。接受CAR-T细胞治疗前当天aGVHD组与无aGVHD组患者细胞因子及趋化因子比较, 差异无统计学意义(P>0.05)。第21天时, aGVHD组患者血清弹性蛋白酶特异性抑制剂(Elafin)水平为4 482(2 811, 6 061)ng/L, 较无aGVHD组患者的2 466(1 948, 3 375)ng/L高(Z=3.145, P=0.001);第28天时aGVHD组患者血清Elafin水平为4 391(2 808, 5 594)ng/L, 高于无aGVHD组的2 463(1 658, 2 830)ng/L(Z=2.038, P=0.048)。在第14天时, aGVHD死亡组与aGVHD生存组比较, 血清巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)[21.02(12.36, 30.35)ng/L比5.56(3.64, 10.79)ng/L]、可溶性CD25(sCD25)[422.47(257.99, 1 233.78)IU/ml比 216.11(133.75, 457.39)IU/ml]、Elafin[4 101(2 393, 5 006)ng/L比 2 155(1 781, 3 033)ng/L]、白细胞介素(IL)-6[119.08(23.97, 183.43)ng/L比8.39(2.91, 17.42)ng/L]、IL-8[13.56(12.50, 24.52)ng/L比2.83(1.73, 6.87)ng/L]更高(Z=2.653, P=0.007;Z=2.176, P=0.030;Z=2.058, P=0.041;Z=3.329, P<0.001;Z=3.162, P=0.001)。KM生存曲线显示第14天时血清高MIP-1α、sCD25、Elafin、IL-6、IL-8水平患者的生存率低于血清低MIP-1α、sCD25、Elafin、IL-6、IL-8水平患者, 差异具有统计学意义(χ^(2)=12.353、4.890、6.551、10.563、20.755, P均<0.05)。结论 CAR-T细胞免疫治疗桥接allo-HSCT患者的结局与患者CAR-T细胞免疫治疗到桥接allo-HSCT之间的血清MIP-1α、sCD25、Elafin、IL-6、IL-8相关, 高MIP-1α、sCD25、Elafin、IL-6、IL-8水平提示预后不良, 可作为提示临床选择合适疗法的标志物。

多参数流式细胞术检测人骨髓标本中非肿瘤性异常细胞表型研究

目的:分析多参数流式细胞术(MFC)检测骨髓标本中非肿瘤性异常表型相关疾病,包括意义不明的单克隆免疫球蛋白血症(MGUS)、单克隆B细胞增多症(MBL)、Fcγ受体Ⅲ类B(FcγRⅢB)缺失、CD36缺失等的表型特征。方法:回顾性观察性研究。选取2020年1月3日至2024年3月31日于河北燕达陆道培医院进行骨髓白血病/淋巴瘤一步法MFC筛查肿瘤性疾病的24 864例患者。收集患者一般临床资料以及MFC结果。根据年龄分为<45岁组(11 495例)、45~<60岁组(5 322例)、≥60岁组(7 081例);按疾病性质分为良性疾病组(8 336例)、恶性疾病组(15 562例)、其他组(966例)。分析各组骨髓标本中非肿瘤性异常表型的发生情况。结果:MGUS、MBL、FcγRⅢB缺失、CD36缺失的发生率分别为0.072%(18/24 864)、0.511%(127/24 864)、0.221%(55/24 864)、0.004%(1/24 864)。恶性疾病组MBL的发病率低于良性疾病组( P<0.001),MGUS的发病率高于良性疾病组( P=0.034)。良性疾病组中各疾病类型的MBL发生率比较,差异有统计学意义( P<0.001),其中全血细胞减少患者中MBL发生率最高为2.72%(48/1 765);恶性疾病组中,各疾病类型的MBL、MGUS发生率比较,差异均有统计学意义( P均<0.001),其中骨髓增生异常综合征/骨髓增殖性疾病患者发生率均最高,分别为1.95%(3/154)、1.30%(2/154)。 结论:应用MFC进行白血病/淋巴瘤一步法检测的非肿瘤性异常细胞表型特征存在一定差异,对疾病的筛查具有一定的借鉴意义。

多色流式细胞术检测微小残留病变在CD19-CAR-T桥接allo-HSCT治疗B-ALL患者监测的意义和价值

目的探讨多色流式细胞术(MFC)监测微小残留病变(MRD)在CD19嵌合抗原受体T细胞(CD19-CAR-T细胞)治疗后桥接异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗难治、复发急性B淋巴细胞白血病(r/r B-ALL)患者过程中的意义和价值。方法收集2019年1月至7月河北燕达陆道培医院收治的r/r B-ALL患者37例,年龄15(6,19)岁,其中男24例,女13例,均为经CD19-CAR-T细胞免疫治疗桥接allo-HSCT治疗的患者。采用多色流式细胞技术以胞浆CD79a抗体设B细胞门监测患者在CART治疗前第0天、治疗后第15天、第28天及移植后骨髓、脑脊液样本、组织样本的MRD值评估肿瘤细胞残存以及肿瘤累及位置,监测CD19阳性B细胞在移植前恢复情况及CD19阳性B细胞恢复距离CAR-T细胞回输天数评估CAR-T细胞实际杀伤效果,同时进行患者各时间点外周血CAR-T细胞计数等。采用Kaplan-Meier法及Log-rank检验分析单因素累积生存差异。结果(1)37例患者中8例死亡,29例存活。5例患者移植后复发,其中复发患者4例死亡,1例存活。(2)死亡组患者在CAR-T细胞免疫治疗后到桥接移植前MFC-MRD阴性缓解率为5/8,低于存活组28/29(χ^(2)=7.540,P=0.006);回输第15天阴性缓解率为3/8,低于存活组24/29(χ^(2)=6.512,P=0.011);回输第28天阴性缓解率为3/8,低于存活组26/29(χ^(2)=10.065,P=0.002)。而死亡组伴髓外MFC-MRD阳性肿瘤浸润率为(7/8)高于存活组(14/29)(χ^(2)=3.931,P=0.047)。CAR-T细胞免疫治疗后,死亡组CD19阳性细胞恢复时间即CAR-T细胞可对CD19阳性细胞杀伤时间42.00(30.00,49.00)d短于生存组55.00(41.50,73.50)d(Z=0.022,P=0.020)。结论利用多色流式细胞术检测B-ALL患者微小残留病变发现,在CD19-CAR-T细胞免疫治疗后到桥接allo-HSCT前、回输第15天、回输第28天等时间点,阳性结果均提示预后不良。这一结果为临床进行对症治疗提供一定指导意义。