基于“PBL+学习通”的《生物制药技术》混合式教学初探

传统生物制药技术教学中存在课堂教学以教师知识传授为主、学生学习知识点较为分散、不能及时跟进科学前沿等主要问题。因此,需要对生物制药技术课程的课前、课中、课后及线上、线下进行混合式教学设计,以顺应信息化时代的教育技术变革。本研究对生物制药技术课程采用“PBL+学习通”混合式教学模式,并初步在教学实践中对学生进行问卷调查和访谈。结果表明,混合式教学能充分调动学生学习的积极性,有效促进学生的自主学习,提高教学效果和课程满意度。

TXNIP、NLRP3在冠状动脉粥样硬化斑块中的表达情况及其与冠心病猝死的关系

目的探讨TXNIP、NLRP3在冠状动脉粥样硬化斑块中的表达及其与斑块继发病变、冠心病猝死的关系。方法回顾性分析2019年1月至2022年3月贵州医科大学法医司法鉴定中心经尸体解剖提取的105例心脏冠状动脉标本及来源者相关资料。根据冠状动脉有无硬化斑块将其分为无病变组(n=20)和斑块组(n=85),再根据冠状动脉是否存在继发病变及其是否为冠心病猝死案例将斑块组分为非冠心病猝死组(n=25)、冠心病猝死无继发病变组(n=30)和冠心病猝死合并继发病变组(n=30)。苏木素-伊红(HE)染色制片及利用IPP6.0图像分析软件测量冠状动脉内膜及病灶厚度、纤维帽厚度、坏死灶厚度及管腔狭窄程度。免疫组织化学法、Western blot和实时荧光定量逆转录-PCR(qRT-PCR)检测冠状动脉TXNIP、NLRP3分布特点及表达情况。结果与无病变组比较,其余3组内膜及病灶厚度、纤维帽厚度、坏死灶厚度更厚,管腔狭窄程度更高,差异有统计学意义(P<0.05)。与冠心病猝死无继发病变组比较,冠心病猝死合并继发病变组内膜及病灶厚度、坏死灶厚度更厚,管腔狭窄程度更高,差异有统计学意义(P<0.05)。无病变组冠状动脉管壁未见TXNIP、NLRP3蛋白表达。非冠心病猝死组TXNIP、NLRP3蛋白强阳性表达率为40.0%、36.0%,弱阳性表达率为32.0%、36.0%,较弱阳性表达率为28.0%、28.0%;冠心病猝死无继发病变组强阳性表达率为50.0%、43.3%,较强阳性表达率为33.3%、36.7%,弱阳性表达率为16.7%、20.0%;冠心病猝死合并继发病变组强阳性表达率为73.3%、76.7%,较强阳性表达率为26.7%、23.3%。冠心病猝死合并继发病变组冠状动脉TXNIP、NLRP3蛋白、mRNA表达水平高于其余3组,差异有统计学意义(P<0.05)。冠状动脉斑块内TXNIP与NLRP3表达的吸光度值、蛋白及mRNA水平呈正相关(P<0.05)。TXNIP、NLRP3表达水平与内膜及病灶厚度呈正相关,与纤维帽厚度呈负相关(P<0.05);冠状动脉坏死灶厚度与TXNIP、NLRP3呈正相关(P<0.05)。结论TXNIP、NLRP3可作为冠心病猝死的诊断指标。

白纹伊蚊唾液蛋白Alb-AG5-3的基因特征分析及真核表达

目的 初探白纹伊蚊唾液蛋白Antigen5-3(Alb-AG5-3)的结构与功能特征,并采用果蝇S2真核表达体系表达Alb-AG5-3。方法 采取同源比对的方式,从NCBI数据库中钓取Antigen5-3序列,根据白纹伊蚊分泌蛋白Antigen5-3基因参考序列(GenBank:AY826105.1)设计特异性引物,从白纹伊蚊安顺株中扩增基因全长。经序列比对后利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(Expasy)以及生物信息学在线软件SignalP、TMHMM、SOPMA、SWISS-MODEL、AlphaFold等对该蛋白进行生物信息学分析。Trizol法提取白纹伊蚊雌蚊与雄蚊整蚊以及吸血前后雌蚊唾液腺RNA,qRT-PCR检测Alb-AG5-3在RNA相对表达量;以白纹伊蚊整蚊cDNA为模板,特异性扩增除信号肽外的Alb-AG5-3编码区,PCR产物经切胶回收纯化后与昆虫真核表达载体pMT/BiP/V5连接,构建真核重组质粒pMT/BiP/V5-Alb-AG5-3。随后转入果蝇S2细胞中,500μmol/L CuSO4诱导重组蛋白Alb-AG5-3的表达。收集上清,采用Western blot鉴定V5表达标签,镍柱亲和层析纯化重组蛋白Alb-AG5-3。结果 生物信息学分析该基因CDS(Coding sequence)区扩增全长为768 bp,编码255个氨基酸,二、三级结构预测以无规则卷曲和a-螺旋为主,具CAP超家族经典的PR-1结构域,该基因编码的蛋白是一种强亲水性(GRAVY:-0.864)的富含半胱氨酸的分泌蛋白。Alb-AG5-3 mRNA在雌蚊中表达量高于雄蚊且吸血后的表达量显著下调。成功构建了白纹伊蚊唾液蛋白pMT/BiP/V5-Alb-AG5-3真核表达质粒并通过果蝇S2表达体系表达出真核蛋白,镍柱亲和纯化后的Alb-AG5-3经Western blot检测能被V5标签蛋白抗体识别。结论 成功构建白纹伊蚊Alb-AG5-3真核质粒并在果蝇S2细胞中表达真核蛋白Alb-AG5-3,镍柱亲和纯化后获得单一的Alb-AG5-3蛋白以备后续分析。

肠道菌群通过NLRP3介导神经炎症调节rmTBI导致的记忆功能障碍

目的探讨肠道菌群通过海马核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)介导神经炎症调节重复轻度创伤性脑损伤(rmTBI)导致的记忆功能障碍的机制。方法建立rmTBI大鼠模型,将大鼠分为对照组(con)组,rmTBI组,rmTBI+生理盐水灌胃(rmTBI+saline)组,rmTBI+粪便溶液灌胃粪菌移植(rmTBI+FMT)组4组。Morris水迷宫实验(MWM)检测不同组别大鼠神经记忆功能,干湿法检测大鼠脑水肿程度,16SrRNA检测大鼠肠道菌群种类及丰度,ELISA法及免疫组织化学法(IHC)检测NLRP3、caspase-1、白细胞介素(IL)-18、IL-1β表达情况。结果在MWM中,rmTBI大鼠潜伏期明显增加(P<0.001)、穿越平台次数明显减少(P<0.01),经FMT治疗后,潜伏期明显减少(P<0.05),穿越平台次数明显增加(P<0.01)。脑含水量和苏木素-伊红(HE)染色结果显示,rmTBI后大鼠脑水肿明显。IHC结果显示:rmTBI后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、离子钙接头蛋白1(Iba-1)表达水平明显升高(P<0.05),FMT后降低(P<0.05)。与rmTBI组及rmTBI+saline组相比,FMT后,大鼠血清NLRP3、caspase-1、IL-18表达水平均明显降低(P<0.05);与rmTBI组相比,FMT干预后大鼠血清IL-1β表达水平明显降低(P<0.001)。从结构分析来看16S rRNA检测结果,FMT后,在门水平上,拟杆菌门、变形菌门丰度均减少;在属水平上,乳杆菌属丰度增加。肠道菌群失调与神经炎症、记忆功能障碍相关性分析显示三者具有相关性。结论rmTBI后大鼠肠道菌群失调,引起大鼠空间记忆功能减弱,而FMT通过调节炎症通路能改善rmTBI大鼠记忆功能。