锌对3-吗啉-斯得酮亚胺(SIN-1)诱导的人晶状体上皮细胞Cu/Zn-SOD表达及活性的影响

目的研究补锌和缺锌条件下3-吗啉-斯得酮亚胺(SIN-1)对人晶状体上皮细胞铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)表达及活性的影响。方法将培养的SRA01/04细胞系分为6组:对照组、SIN-1处理组、补锌组、补锌联合SIN-1处理组、缺锌组和缺锌联合SIN-1处理组。采用MTT法检测细胞存活率,Western blotting和Cu/Zn-SOD活性检测试剂盒分别检测Cu/Zn-SOD蛋白表达和活性水平的变化。结果我们选择对细胞存活率无显著影响的50μmol·L^(-1)ZnSO_4和1μmol·L^(-1)N,N,N,N-四-(2-吡啶基甲基)乙二胺作为补锌和缺锌的条件,选择对细胞存活率有显著影响的500μmol·L^(-1)SIN-1作为细胞受损的条件。在此条件下对照组、SIN-1处理组、补锌组、补锌联合SIN-1处理组、缺锌组和缺锌联合SIN-1处理组的细胞存活率分别为(100.0±1.4)%、(84.7±1.8)%、(101.2±1.6)%、(95.5±1.9)%、(100.9±2.3)%和(75.3±1.2)%,与对照组相比,SIN-1处理组和缺锌联合SIN-1处理组的细胞存活率均显著下降(均为P<0.05),与SIN-1处理组相比,补锌联合SIN-1处理组的细胞存活率显著升高(P<0.05),缺锌联合SIN-1处理组的细胞存活率则进一步下降(P<0.05)。各组的Cu/Zn-SOD蛋白相对表达量分别为1.005±0.007、0.991±0.015、1.044±0.008、0.945±0.007、1.278±0.011和0.850±0.057,Cu/Zn-SOD活性分别为(1.00±0.03)U、(0.85±0.05)U、(1.69±0.04)U、(1.35±0.05)U、(1.52±0.04)U和(1.09±0.03)U。与对照组相比,补锌组和缺锌组Cu/Zn-SOD蛋白表达量和活性均显著增加(均为P<0.05)。分别与补锌组或缺锌组相比,补锌联合SIN-1处理组和缺锌联合SIN-1处理组的Cu/Zn-SOD蛋白表达水平和活性均显著下降(均为P<0.05)。结论补锌可以通过上调Cu/Zn-SOD的表达水平和活性,保护人晶状体上皮细胞抵抗由SIN-1造成的损伤,可能对白内障的形成有抑制作用。

菟丝子醇提液对衰老模型大鼠肝细胞p21和cyclinE基因表达的影响

目的研究菟丝子醇提液对D-半乳糖致衰老大鼠肝细胞p21和cyclin E基因表达的影响,探讨中药菟丝子抗衰老作用的机制。方法实验以40只wistar大鼠为研究对象,采用D-半乳糖致衰法制作衰老动物模型,每日经胃灌服菟丝子按0.8g/kg动物给药,采用半定量RT-PCR法测定大鼠p21和cyclin E mRNA的表达,免疫组化法检测p21和cyclin E蛋白水平的表达,同时检测菟丝子醇提液对其表达的影响。结果模型对照组大鼠p21 mRNA及蛋白表达较青年组显著升高(P<0.01),而cyclin E mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05)。菟丝子醇提液可使p21基因表达降低(P<0.01),cyclin E基因表达升高(P<0.05)。结论菟丝子的醇提液可通过影响细胞调控因子p21、cyclin E的表达而延缓肝细胞的衰老。

过氧亚硝酸根联合碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化水平的影响

目的探讨过氧亚硝酸根(peroxynitrite,ONOO^-)和重组人碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor,b FGF)共同作用对人晶状体上皮细胞细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化水平的影响。初步探讨ONOO^-导致白内障发生的可能机制。方法将培养的HLEC细胞分为4组,对照组(未经ONOO^-和b FGF处理)、b FGF单独处理组、b FGF+ONOO^-处理组[b FGF预处理1 h后加入不同浓度ONOO^-(50μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、200μmol·L^(-1))处理1 h]和ONOO^-+b FGF处理组[不同浓度ONOO^-(50μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、200μmol·L^(-1))预处理1 h后加入b FGF处理1 h]。检测各组细胞内ERK磷酸化水平的变化。结果 b FGF单独处理组和b FGF+ONOO^-(50μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、200μmol·L^(-1))处理组中磷酸化ERK相对表达值分别为5.17±0.35、4.42±0.12、3.91±0.15和0.49±0.08,与对照组(1.00±0.05)相比差异有统计学意义(F=402.83,P<0.001),结果显示ONOO^-可以抑制由b FGF诱导的ERK磷酸化水平的增加(F=310.34,P<0.05)。ONOO^-(50μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、200μmol·L^(-1))+b FGF处理组中磷酸化ERK相对表达值分别为3.36±0.04、3.32±0.06和2.92±0.08,与对照组(1.00±0.02)相比,所有处理组的ERK磷酸化水平均显著增加(F=518.94,P<0.001);50μmol·L^(-1)和100μmol·L^(-1)ONOO^-处理细胞后经b FGF处理,ERK磷酸化水平较b FGF单独处理组(3.04±0.05)显著增加(F=35.53,P<0.05),而200μmol·L^(-1)ONOO^-处理组与bF GF单独处理组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ONOO^-诱导的白内障的发生可能与ERK磷酸化的紊乱有关。

锌对半乳糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的:研究锌对半乳糖诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)凋亡的影响。方法:将培养的SRA01/04细胞系分为六组,对照组、半乳糖处理组、补锌组、补锌联合半乳糖处理组、缺锌组、缺锌联合半乳糖处理组。采用MTT法检测半乳糖对HLEC存活率的影响,荧光显微镜和流式细胞仪分别检测各实验分组细胞核形态和细胞凋亡率水平的变化。结果:不同浓度半乳糖(0、25、50、75、100、125mmol/L)处理HLEC细胞后,细胞存活率分别为(100. 0±5. 4)%、(97. 5±3. 2)%、(91. 3±5. 3)%、(93. 4±0. 6)%、(86. 6±1. 4)%和(83. 5±0. 4)%,与未处理细胞相比,半乳糖浓度为100、125mmol/L时,细胞存活率显著下降,差异有统计学意义(P<0. 05)。荧光显微镜结果显示对照组和补锌组的细胞核呈现均一的染色,半乳糖处理组、补锌联合半乳糖处理组、缺锌组和缺锌联合半乳糖处理组中一些细胞的细胞核收缩,表现出典型的细胞凋亡形态。各组的细胞凋亡率分别为(1. 5±0. 1)%、(7. 1±0. 2)%、(1. 4±0. 1)%、(4. 4±0. 2)%、(5. 5±0. 2)%和(15. 8±0. 3)%。与对照组相比,半乳糖处理组、补锌联合半乳糖处理组、缺锌组和缺锌联合半乳糖处理组的细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义(P <0. 05)。与半乳糖处理组相比,补锌联合半乳糖处理组的细胞凋亡率显著下降,差异有统计学意义(P<0. 05),缺锌联合半乳糖处理组的细胞凋亡率则显著升高,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论:补锌可以保护人晶状体上皮细胞抵抗由半乳糖引起的细胞凋亡,可能对白内障的形成有抑制作用。

家蝇Phormicin蛋白表达及对白色念珠菌的抑菌活性分析

防御素是一类具有广普抗菌活性的阳离子抗菌肽,而家蝇(Musca domestica)的Phormicin属于防御素超家族。白色念珠菌(Candida albicans)是临床上常见的引起人体感染的条件致病真菌。随着免疫缺陷病、糖尿病等疾病发生率的增加,在病人体内植入设备的白色念珠菌残留及附带感染日益成为临床感染的常见类型。本研究制备了家蝇Phormicin A、Phormicin B的原核表达蛋白,将其作用于白色念珠菌。微量液体稀释法测定了其最小抑菌浓度为2.5mmol/L和1.875mmol/L。进一步绘制了其对白色念珠菌的时间杀菌曲线。结果显示,二者对白色念珠菌都具有一定的抑菌效果。本研究为进一步探索Phormicin参与家蝇天然免疫和揭示家蝇抗真菌防御中的机制提供理论参考,为开发多肽类抗真菌药物提供线索。