CPBL教学法在成人教育病理生理学教学中的应用

目的探讨CPBL(基于临床病案问题的教学法)在病理生理学教学中的应用及QQ群辅助教学法的作用及意义。方法选取2014级成教临床医学专升本两个班分别作为实验班与对照班。实验班采用CPBL教学法、QQ群辅助互动教学,对照班采用传统教学法进行教学。采用期末考试成绩和问卷调查相结合的形式,进行教学效果的评估。结果实验班同学考试成绩略高于对照班,但两组差异不具有统计学意义(P>0.05);而病案分析题成绩两组有显著性差异(P<0.01),并且实验班学生对CPBL教学法的评价明显优于传统教学法(P<0.05)。结论 CPBL教学法在病理生理学教学中的应用效果良好,QQ群辅助互动式教学在教学中也发挥了积极的作用,值得推广。

研究生护理学研究方法课程思政教育的实施效果

目的探讨“如盐在水、润物无声”的思政育人理念在研究生护理学研究方法课程思政教育中的实施效果。方法选取贵州某大学2021级护理学专业46名硕士研究生为研究对象,以护理学研究方法课程为载体,挖掘其中的思政育人点,通过讲述中国故事,运用典型案例、翻转课堂等教学方式,完善课程思政教学路径和教学设计,采用自行设计的课程思政调查问卷评价教学效果。结果课程思政呈现方式多种多样,研究生学习积极性高,教学效果好。100.0%(46/46)的研究生赞成专业课程结合思政教育。在所有课程思政教学方式中,研究生更喜爱典型案例、讲述中国故事、翻转课堂、线上线下相结合方式,其差异具有统计学意义(P<0.05)。91.3%(42/46)的研究生表示会把思政教育内化于行,91.3%(42/46)的研究生认为思政教育与专业课程的融合对于个人生活、思想、行为有较大的影响。结论护理学研究方法课程思政育人教学方案有效地提高了课程教学效果,促进了“教授知识”与“思政育人”的有机统一,有利于促进护理学专业硕士研究生的“精神成人”,为研究生“思政育人”教育模式提供了参考。

天麻素抑制Keap1/Nrf2-泛素-蛋白酶体信号对高糖诱导原代大鼠心肌细胞损伤的作用及机制

目的探讨天麻素(GAS)抑制Keap1/Nrf2-泛素-蛋白酶体信号对高糖诱导原代大鼠心肌细胞损伤的作用及其机制。方法利用40 mmol/L高糖制作原代大鼠心肌细胞尿病心肌细胞损伤模型,将细胞分为正常对照组(25 mmol/L葡萄糖)、模型组、GAS低剂量(0.75μmol/L)治疗组、GAS高剂量(1.5μmol/L)治疗组及阳性药(二甲双胍,0.2 mmol/L)治疗组;48 h后取出细胞;利用吉姆萨染色法观察细胞形态变化,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞LDH外漏率,蛋白免疫印迹法检测血心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、Keap1及血红素氧合酶1(HO-1)的表达,免疫荧光法检测Nrf2;为进一步研究GAS对蛋白酶体的作用,引入蛋白酶体抑制剂MG132,并将细胞分为正常对照组、模型组、MG132治疗组(1.0μmol/L)、GAS治疗组(1.5μmol/L)及MG132与GAS联合治疗组(1.0μmol/L MG132+1.5μmol/L GAS),利用蛋白免疫印迹法检测细胞中Nrf2,Keap1及泛素-蛋白酶体相关蛋白泛素激活酶(UBE1)、人26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基11(PSMD11)、人蛋白酶体亚基α7(PSMA7)的表达,免疫荧光法检测Nrf2,免疫沉淀法检测泛素化Nrf2的表达。结果GAS可改善高糖诱导原代大鼠心肌细胞形态损伤、降低LDH外漏率(P<0.05);模型组细胞中ANP,BNP,Keap1,UBE1、PSMD11,PSMA7与泛素化的Nrf2的表达增加(P<0.05),Nrf2与HO-1的表达降低(P<0.05);给予不同浓度的GAS与阳性药二甲双胍后、可部分逆转上述蛋白的表达(P<0.05);GAS还可在一定程度上改善Nrf2的入核情况,同时GAS与MG132均有效下调模型组细胞中UBE1、PSMD11、PSMA7、Keap1与泛素化的Nrf2的表达(P<0.05),并增加Nrf2的表达(P<0.05),但GAS与MG132联用与单独使用GAS相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论GAS可以改善高糖诱导的原代大鼠心肌细胞损伤,其机制可能是通过抑制Keap1介导Nrf2的泛素化、同时减少Nrf2的降解而抑制蛋白酶体活性。

骨形态发生蛋白7通过下调Ajuba减轻糖尿病肾病大鼠肾纤维化

目的:探讨在糖尿病肾病(DKD)大鼠模型中,骨形态发生蛋白7(BMP7)是否通过下调Ajuba水平,降低Yes相关蛋白1(YAP1)的表达,进而减轻细胞外基质(ECM)沉积从而减轻DKD大鼠肾组织纤维化程度。方法:18只SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)和DM+过表达BMP7腺相关病毒组(DM+rAAVBMP7组),每组6只。采用尾静脉注射55 mg/kg链脲佐菌素(STZ)建立DM大鼠模型。NRK-52E细胞分为正常糖组、高糖(HG)组和HG+rhBMP7组。HE和天狼星红染色观察大鼠肾皮质病理形态学变化;免疫组织化学染色检测肾皮质Ajuba、YAP1的表达部位;Western blot法检测大鼠肾皮质及NRK-52E细胞中BMP7、Ajuba和YAP1、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)和纤维连接蛋白(FN)的蛋白表达水平;RT-qPCR检测大鼠肾皮质Ajuba和YAP1 mRNA的表达水平。结果:生化指标检测显示DM组大鼠血糖、血肌酐、甘油三酯、总胆固醇及24 h尿蛋白水平较NC组显著升高(P<0.05),尿肌酐较NC组显著降低(P<0.05);与DM组相比,DM+rAAV-BMP7组大鼠血肌酐、24 h尿蛋白定量水平、甘油三酯和总胆固醇显著降低(P<0.05),尿肌酐显著升高(P<0.05);病理染色显示DM组肾间质出现炎症细胞浸润及胶原纤维沉积,肾小管萎缩且排列紊乱,DM+rAAV-BMP7组的病理变化较DM组显著改善;免疫组化结果显示在肾皮质中Ajuba和YAP1主要表达于细胞质和细胞核,且在DM组高表达,但DM+rAAV-BMP7组其表达则显著降低;Western blot结果显示DM组或HG组中FN、Col-Ⅲ、Ajuba和YAP1的蛋白水平上调(P<0.05),但在DM+rAAV-BMP7组中上述蛋白表达水平又显著降低(P<0.05);RT-qPCR结果显示DM组Ajuba、YAP1的mRNA水平较NC组显著上升(P<0.05),DM+rAAV-BMP7组Ajuba、YAP1的mRNA水平较DM组又显著降低(P<0.05)。结论:过表达BMP7可减轻DKD大鼠的肾纤维化,其机制可能与下调Ajuba,减少YAP1的表达,从而抑制了ECM的沉积有关。

自噬对锌指转录因子1及高糖诱导的肾小管EMT的影响

目的探讨自噬是否可以通过调控锌指转录因子1(Snail1)的降解而影响肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程。方法12只清洁级雄性SD大鼠,随机分为正常(NC)组、糖尿病(DM)组,予链脲佐菌素(STZ)53 mg/kg尾静脉注射复制大鼠Ⅰ型糖尿病模型;造模成功后第24周末处死NC和DM组大鼠,检测大鼠血糖、血尿素氮(BUN)和24 h尿白蛋白(24 hUAlb),Western blot检测肾组织自噬相关分子[自噬基因BECN 1(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ/Ⅰ)、自噬降解底物蛋白1(p62)]、Snail1蛋白的表达水平;将大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)分为正常糖组(NG组)、高糖组(HG组)及高渗组(HM组),HG组培养的NRK-52E细胞在分为全蛋白组(Input组)和IP组[IP组又为阴性对照(IgG组)和实验组(Snail1/P62)];在高糖培养的NRK-52E细胞中分别使用自噬激动剂[雷帕霉素(RAP)和自噬抑制剂氯喹(CQ)]处理48 h,分为NG组、HG组、HG+RAP组及HG+CQ组,采用双标荧光腺病毒观察各组细胞的自噬流的情况,免疫荧光化学染色和免疫共沉淀观察Snail1与p62的蛋白相互作用,Western blot检测各组NRK-52E细胞中自噬相关分子、EMT、细胞外基质(ECM)指标表达变化;用二甲基亚砜(DMSO)、RAP、CQ处理NRK-52E细胞48 h,再联合放线菌酮(CHX)和蛋白酶抑制剂(MG-132)处理0、6及10 h,分为HG+DMSO/RAP组、HG+DMSO/CQ组,采用Western blot检测自噬对Snail1蛋白衰减的调控作用。结果与NC组相比,DM组大鼠血糖、BUN及24 hUAlb均增高(P<0.05);Western blot结果显示,与NC组比较,DM组大鼠肾组织及高糖培养的NRK-52E细胞中Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达下调(P<0.05),p62、Snail1蛋白表达上调(P<0.05);双标腺病毒实验显示,在高糖刺激的NRK-52E中自噬流受阻,与HG组相比,HG+RAP组NRK-52E细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)的蛋白表达增多,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅲ(Col-Ⅲ)的蛋白表达减少(P<0.05),而HG+CQ组结果相反;免疫共沉淀实验发现Snail1与p62存在蛋白互作;联合CHX和MG-132后,HG+DMSO/RAP组中Snail1蛋白衰减速度加快。结论在DM大鼠肾组织和高糖培养的肾小管上皮细胞中,自噬受抑后使Snail1通过自噬降解减少,诱导EMT及ECM沉积增多,促进了肾脏纤维化的发生。

EPDR1对肝细胞脂质沉积的影响

目的:检测室管膜素相关蛋白1(EPDR1)在野生型C57BL/6小鼠各组织中的表达情况;观察2型糖尿病状态下,小鼠各组织中EPDR1的表达;探讨EPDR1对AML12肝细胞脂质沉积的影响。方法:采用Western blot检测C57BL/6小鼠心、肝、脾、肺、肾、腓肠肌、棕色脂肪以及脑组织中EPDR1蛋白的表达;Western blot和免疫组织化学(IHC)染色比较db/db小鼠与C57BL/6小鼠肝、腓肠肌、心和肾组织中EPDR1蛋白表达情况。采用油酸和棕榈酸联合诱导AML12细胞建立脂质沉积模型,且经腺病毒过表达EPDR1和给予外源重组蛋白EPDR1(rEPDR1)干预,ELISA测定胞内甘油三酯(TG)含量,油红O染色评估EPDR1对AML12细胞脂质沉积的影响。结果:Western blot和IHC均显示EPDR1广泛表达于野生型小鼠心、肝、脾、肺、肾、腓肠肌、棕色脂肪和脑组织中,且在肝脏中蛋白表达最高;而在糖尿病db/db小鼠肝、腓肠肌、心和肾组织中较野生型小鼠表达下调;油红O染色结果显示,过表达EPDR1或给予rEPDR1均可减少AML12肝细胞中脂质沉积,且TG含量较模型组下降(P<0.05)。结论:EPDR1广泛表达在野生型小鼠各个组织,且在糖尿病小鼠肝脏组织中表达下调,而上调EPDR1可以缓解肝细胞中的脂质沉积。本研究为进一步揭示EPDR1在糖尿病肝组织脂肪变中的作用奠定实验基础。

树豆酮酸A可减轻db/db小鼠非酒精性脂肪肝损伤

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指肝中储存过多的脂肪,与肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病(type-2 diabetes mellitus,T2DM)、血脂异常等代谢综合征密切相关。肝纤维化是NAFLD进一步发展为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的关键过程,减少肝内的脂肪积累,从而延缓或阻止NAFLD向纤维化的进展是治疗的关键。树豆酮酸A(cajanonic acid A,CAA)在2型糖尿病中能够有效改善胰岛素抵抗,发挥降糖减脂作用。本研究旨在探究CAA对NAFLD肝损伤的保护作用。通过采用db/db自发性NAFLD小鼠模型,将db/db小鼠分为NAFLD组和CAA给药组,CAA组予50 mg/(kg·d)灌胃给药,同期C57BL小鼠作为正常对照组(NC组),每组6只。小鼠生化指标检测和组织病理染色发现,CAA干预可有效缓解db/db小鼠的糖脂代谢紊乱、肝功能损伤(P<0.05)及肝脂肪变性和减少脂质沉积(P<0.05)。ELISA法结果显示,经过CAA治疗后肝组织上清液中白细胞介素1β(Interlecukin-1β,IL-1β)的水平显著降低(P<0.05),提示CAA具有明显抗炎作用,并且CAA干预显著减轻小鼠肝的纤维化程度,天狼星红染色发现,CAA组胶原沉积显著减少(P<0.05),进一步Western印迹结果表明,CAA组纤维化相关基因纤连蛋白(fibronectin,FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白质水平表达降低,E-钙黏着蛋白(E-cadherin,E-ca)的表达升高(P<0.05)。E2F转录因子1(E2F transcription factor 1,E2F1)被证实在肝中是葡萄糖和脂质代谢的主要因子,在肥胖小鼠中表达增加,并且可通过PPARγ的转录调节参与脂肪组织代谢,我们猜测,E2F1是CAA改善NAFLD肝脂质沉积和纤维化的中间作用靶标。通过免疫组织化学染色观察E2F1和其同家族拮抗转录因子E2F转录因子7(E2F transcription factor 7,E2F7)在小鼠经CAA处理后在肝组织核质中均表达,通过Western印迹法和实时荧光定量PCR进一步检测蛋白质和mRNA的表达发现,在CAA组中E2F1较NAFLD组基因表达降低(P<0.05),E2F7基因表达增加(P<0.05),并且spearman秩相关分析提示,E2F1和E2F7呈显著负相关(P<0.05)。以上结果表明,树豆酮酸A可有效减轻db/db小鼠非酒精性脂肪性肝损伤,改善糖脂代谢紊乱,抑制脂质过度沉积,减轻肝纤维化以缓解NAFLD进一步发展,同时E2F1和E2F7可能参与了CAA改善脂质代谢和纤维化的过程。

不同造模方式诱导的糖尿病小鼠肝肾组织中脂质异位沉积情况的研究

目的:观察比较高脂饮食(high-fat diet, HFD)、链脲佐菌素(streptozocin, STZ)联合HFD(HFD/STZ)、单侧肾脏切除术(unilateral nephrectomy, UNx)+HFD/STZ和db/db小鼠4种糖尿病模型小鼠肝肾组织中脂质异位沉积情况。方法:选取8周龄C57BL/6小鼠,随机分为正常饮食(normal chow diet, NCD)组(n=10)、HFD组(n=10)、HFD/STZ组(n=10)和UNx+HFD/STZ组(n=12)。NCD组给予NCD饲养;HFD组、HFD/STZ组和UNx+HFD/STZ组给予HFD饲养,诱导小鼠出现肥胖和胰岛素抵抗,且HFD/STZ组和UNx+HFD/STZ组给予55 mg/kg STZ腹腔注射,后以HFD饲养至40周龄。选取10周龄db/db小鼠和野生型小鼠各8只,NCD饲养至40周龄。记录分析小鼠血糖和体重变化;收集血液样本测定甘油三酯(triglyceride, TG)含量;肝肾组织样本石蜡包埋后进行苏木精-伊红染色观察组织病理变化;免疫荧光染色和Western blot检测脂滴包被蛋白2的表达;油红O染色和尼罗红染色观察脂滴沉积情况。结果:HFD组小鼠体重显著升高(P<0.05),血糖水平和血清TG含量升高不显著(P>0.05);HFD/STZ组、Unx+HFD/STZ组及db/db组血糖水平和血清TG含量显著升高(P<0.05),且肝肾组织中存在大量脂质异位沉积,均能诱导小鼠发生糖尿病肝肾脏损伤,其中Unx+HFD/STZ组最严重;HFD组肾脏未见明显脂质沉积,肝脏存在大量脂质沉积。结论:Unx+HFD/STZ组小鼠的肝肾脂质沉积最严重,但存在死亡率较高、小鼠状态差等缺点。单纯HFD饮食的小鼠是研究非酒精性脂肪性肝病合适的模型。HFD/STZ和db/db模型小鼠出现糖尿病肾脏脂毒性且呈现糖尿病肾病的肾脏病理改变,类似于2型糖尿病患者,适用于研究糖尿病及其并发症。

胰岛β细胞Metrnl基因敲除小鼠的鉴定及初步表型分析

目的:基于Cre-LoxP重组酶系统,构建胰岛β细胞Metrnl基因敲除小鼠(Metrnl-KO),为进一步探究Metrnl基因在糖尿病疾病中的发病机制提供动物模型。方法:将雌雄基因型均为Metrnlfloxp/+的小鼠合笼杂交,筛选出基因型为Metrnl^(floxp/floxp)的小鼠,将该基因型小鼠与胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶(Ins-2)工具鼠进行杂交繁育,获得基因型为Metrnl^(floxp/+;Cre+)的小鼠;再将Metrnl^(floxp/+;Cre+)小鼠与Metrnl^(floxp/floxp)小鼠杂交获得Metrnl^(floxp/floxp;Cre+)小鼠,基因型为Metrnl^(floxp/floxp;Cre+)的小鼠即为目的鼠。采用RT-q PCR检测Metrnl和胰岛素(Ins-1和Ins-2)的m RNA水平;免疫组化和免疫荧光染色观察胰岛组织Metrnl和胰岛素的蛋白表达情况;记录小鼠体重,同时测定小鼠糖耐量和胰岛素耐量。结果:RT-q PCR和免疫组化结果均显示Metrnl-KO小鼠胰岛组织中Metrnl的m RNA和蛋白水平显著低于对照鼠(P<0.01);Metrnl-KO小鼠与对照鼠相比,体重无明显变化,但糖耐量受损且对胰岛素敏感性降低(P<0.05);RTq PCR结果显示胰岛组织中Ins-1和Ins-2的m RNA水平显著下调(P<0.01),且免疫荧光结果提示胰岛组织中胰岛素表达低于对照鼠(P<0.05);葡萄糖刺激的胰岛素分泌实验结果显示,Metrnl敲除可引起小鼠胰岛素分泌减少(P<0.05)。结论:我们构建并验证了条件性胰岛β细胞Metrnl基因敲除小鼠模型,还发现Metrnl的特异性敲除影响了小鼠的糖耐量和胰岛素耐受性,同时Metrnl敲除引起小鼠胰岛素分泌能力受损,为进一步研究Metrnl在糖尿病发生发展中的具体机制提供了研究基础。

SMYD2特异性抑制剂对高糖环境下大鼠肾成纤维细胞活化的影响及其机制

目的:明确赖氨酸甲基转移酶SMYD2(SET and MYND domain containing 2)特异性抑制剂对体外高糖(HG)环境下大鼠肾成纤维细胞(NRK-49F)活化的影响并探索其可能机制。方法:采用CCK-8法检测SMYD2特异性抑制剂LLY507对体外培养的NRK-49F细胞活力的影响。实验分组为正常糖(NG;含5.5 mmol/L葡萄糖)组、HG(含30 mmol/L葡萄糖)组、NG+LLY507(1.5μmol/L)组和HG+LLY507(1.5μmol/L)组,37℃培养48 h后收集各组细胞蛋白。采用Western blot实验检测SMYD2、组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化(H3K4me3)、纤维连接蛋白(fibronectin)、I型胶原蛋白(Col I)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、p-Smad3、Smad3、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子κB(NF-κB)p65、NF-κB p-p65、白细胞介素6(IL-6)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)及p-STAT3蛋白水平。结果:LLY507浓度低于1.6μmol/L对NRK-49F细胞的活力无显著影响;与NG组相比,HG组SMYD2、H3K4me3、fibronectin、Col I、α-SMA、TGF-β1、p-Smad3,TNF-α、NF-κB p-p65、NF-κB p65、IL-6、p-STAT3和STAT3蛋白水平均显著升高(P<0.05);与HG组相比,HG+LLY507组SMYD2、H3K4me3、fibronectin、Col I、α-SMA、TGF-β1、p-Smad3、TNF-α、NF-κB p-p65、NF-κB p65、IL-6、p-STAT3和STAT3蛋白水平均显著降低(P<0.05)。结论:SMYD2特异性抑制剂LLY507可明显抑制HG诱导的NRK-49F细胞活化和细胞外基质分泌,其机制可能与阻断TGF-β1/Smad3、NF-κB和STAT3细胞信号通路激活相关。

依普利酮对高盐诱导的高血压大鼠主动脉内皮型一氧化氮合酶表达及活性的影响

目的：探讨依普利酮对高盐诱导的高血压大鼠主动脉内皮型一氧化氮合酶（e NOS）的表达及活性的影响。方法：50~60 g 4周龄雄性Wistar大鼠随机分为3组：对照（control,C）组用普通饲料饲养16周,高盐饮食（high salt diet,HS）组及依普利酮（eplerenone,Epl）组用5%高盐饲料饲养16周,C组和HS组于末4周给予同等剂量生理盐水灌胃,而Epl组于末4周给予依普利酮40 mg·kg-1·d-1灌胃。每2周检测各组大鼠尾动脉收缩压,16周后处死大鼠,留取主动脉。ELISA法检测醛固酮含量,蛋白免疫印迹法检测盐皮质激素受体（MR）及e NOS蛋白表达水平,化学比色法测定一氧化氮合酶活性,免疫组化染色法观察主动脉e NOS、神经型一氧化氮合酶（n NOS）及MR蛋白表达与定位。结果：（1）高盐饲料饲养8周后,大鼠收缩压即明显升高,并逐渐上升,16周时HS组收缩压较同时点C组明显升高（P〈0.05）;依普利酮灌胃4周后,收缩压比灌胃前明显下降（P〈0.05）。（2）与C组比较,HS组、Epl组主动脉醛固酮含量明显增加（P〈0.05）,且MR表达明显增加（P〈0.05）。（3）HS组较C组e NOS蛋白表达减少（P〈0.05）、结构型一氧化氮合酶（c NOS）活性也降低（P〈0.05）;Epl组较HS组e NOS蛋白表达增加（P〈0.05）、c NOS活性增高（P〈0.05）。结论：（1）高盐诱导高血压大鼠的主动脉醛固酮含量明显增加,醛固酮可能通过激动MR降低主动脉e NOS蛋白表达及酶活性。（2）选择性MR拮抗剂依普利酮可恢复e NOS蛋白表达及活性,改善e NOS功能。

糖尿病大鼠肾组织中PTEN/AKT/mTOR通路对自噬的调控作用

目的:观察糖尿病大鼠肾组织中PTEN和自噬水平的变化,探讨糖尿病肾病中PTEN/AKT/m TOR通路对自噬的调控机制。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)和糖尿病组(DM组),每组各8只。用链脲佐菌素复制DM大鼠模型。于成模后10周处死大鼠后测定相应生化指标和肾脏指数,免疫组化观察肾小管上皮细胞PTEN蛋白的表达部位;Western blotting法检测肾组织LC3、PTEN及PTEN/AKT/m TOR通路的变化;realtime PCR检测肾组织PTEN的mRNA表达水平。结果:DM组的血糖、24 h尿蛋白量和肾脏指数均显著高于NC组(P<0.05)。与NC组相比,DM组大鼠肾组织的LC3I和LC3II水平明显降低(P<0.05)。PTEN主要分布于肾小管上皮细胞中,DM组PTEN蛋白的表达水平明显低于NC组(P<0.05)。DM大鼠肾组织中,PTEN/AKT/m TOR通路的活性增高。结论:糖尿病大鼠肾脏组织中细胞自噬水平下降,而参与自噬调控的PTEN/AKT/m TOR通路活性升高,提示其自噬水平的变化可能受到PTEN/AKT/m TOR通路的调节。

氧化苦参碱对糖尿病大鼠肾组织TLR4及炎症因子表达的影响

目的通过观察氧化苦参碱(OM)对糖尿病(DM)大鼠肾组织Toll样受体4(TLR4)及炎症因子表达的影响,探讨OM抗炎、抗纤维化的可能机制。方法采用链脲佐菌素复制大鼠DM模型,随机分为糖尿病组(DM组)和氧化苦参碱干预组(OM组),每组8只大鼠。OM组大鼠从模型复制成功次日起给予OM 75 mg/(kg·d)灌胃,同时设正常对照组(NC组)(8只大鼠)。16周后处死大鼠,观察肾组织病理学改变,采用免疫组织化学法和Western blot检测各组大鼠肾组织TLR4、蛋白激酶Cα(PKCα)及胶原蛋白Ⅳ的表达,酶联免疫吸附法检测各组大鼠肾组织匀浆中炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达。结果与NC组相比,DM组大鼠体重减轻,血糖和24 h尿蛋白升高(P<0.05);肾组织TLR4、PKCα及胶原蛋白Ⅳ表达增多(P<0.05);炎症因子IL-6和TNF-α表达增多(P<0.05)。与DM组相比,OM组大鼠体重逐渐增加,血糖和24 h尿蛋白降低(P<0.05);TLR4、PKCα及胶原蛋白Ⅳ表达下调(P<0.05);炎症因子IL-6和TNF-α表达下调(P<0.05)。结论 OM可下调DM大鼠肾组织TLR4的表达,减少炎症因子的表达和细胞外基质的沉积,从而缓解DN纤维化病变的发生、发展,其机制可能与抑制PKCα蛋白的表达有关。

BMP-7对高糖环境下肾小管上皮细胞Id2和E2A蛋白表达的影响

目的:通过观察高糖环境下给予外源性骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对肾小管上皮细胞(NRK-52E)表达分化抑制因子2(Id2)和转录因子E2A的影响,探讨BMP-7减轻高糖诱导的肾小管纤维化病变的可能机制。方法:将体外培养的肾小管上皮细胞NRK-52E分为3组:对照(control)组、高糖(HG)组和不同浓度BMP-7(10μg/L和20μg/L)干预组,HG组和干预组分别设12 h、24 h和48 h 3个时点。Western blot方法检测Id2、E2A、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)蛋白的表达,real-time PCR方法检测Id2 mRNA的表达。结果:与control组相比,HG组Id2的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白水平明显下调,E2A、α-SMA和Col-Ⅰ的蛋白水平明显上调(P<0.05);与HG组相比,20μg/L BMP-7干预组Id2的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白水平均较同时点显著上调,E2A、α-SMA和Col-Ⅰ的蛋白水平显著下调(P<0.05)。相关性分析结果显示,Id2蛋白与E2A蛋白表达呈显著负相关(P<0.05)。结论:BMP-7可阻断高糖诱导的肾小管上皮细胞的纤维化,其机制可能与促进Id2蛋白并抑制E2A蛋白的表达有关。

糖尿病小鼠肾组织中Notch1通过Akt/mTOR通路抑制自噬促进肾小管间质纤维化

目的:观察糖尿病小鼠肾脏组织中Notch1蛋白表达和自噬水平的变化对肾脏纤维化的影响,探讨糖尿病肾病中Notch1通过抑制自噬对肾小管间质纤维化的调控机制。方法:取db/m小鼠(正常对照组)和db/db小鼠(糖尿病组),每组各8只。饲养12周后处死小鼠,测定相应生化指标,免疫组化观察肾小管上皮细胞Notch1蛋白的表达部位,Western blot法检测小鼠肾组织Notch1、PTEN、p-Akt(Thr308)、Akt、p-mTOR(Ser2448)、mTOR、LC3、P62、Ⅰ型胶原(Col-I)和Ⅲ型胶原(Col-III)的蛋白水平变化。结果:与db/m小鼠比较,db/db小鼠的血糖、糖化血红蛋白、血肌酐、甘油三酯和总胆固醇明显增高(P<0.01);HE染色可见db/db小鼠的肾小管上皮细胞出现空泡样变性,间质中炎性细胞浸润,肾小管扩张;Masson染色可见db/db小鼠的肾脏组织中有大量胶原纤维样物质沉积于肾小球毛细血管腔内和肾间质,肾小管结构排列紊乱。Western blot结果显示db/db小鼠的肾组织中Notch1、P62、p-mTOR(Ser2448)、p-Akt(Thr308)、Col-I和Col-III的蛋白水平明显增加(P<0.01),PTEN的蛋白表达显著降低(P<0.01),LC3-Ⅱ的蛋白表达减少(P<0.05),总的mTOR和Akt蛋白水平的差异无统计学显著性。结论:糖尿病db/db小鼠肾脏组织中的Notch1蛋白表达增加,PTEN蛋白表达减少,Akt/mTOR通路活性升高,自噬受到抑制,这些变化促进了肾脏纤维化病变发生发展。

辛二酰苯胺异羟肟酸诱导大鼠原代肝星状细胞凋亡

目的:通过研究辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对大鼠原代肝星状细胞(HSCs)凋亡及相关蛋白表达的影响,探讨SAHA诱导HSCs凋亡的作用机制。方法:采用Opti Prep梯度离心法分离大鼠原代HSCs;通过实时细胞分析技术检测SAHA对HSCs增殖的影响;倒置显微镜观察不同浓度SAHA处理HSCs后的形态变化;荧光显微镜及流式细胞术Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率;Western blotting法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP1)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)的蛋白表达;免疫共沉淀法检测GRP78蛋白与HDAC6蛋白是否形成复合物。结果:成功分离的HSCs连续培养14 d,HSCs逐渐由静止状态变为激活状态。SAHA可显著抑制HSCs增殖,且呈剂量时间依赖性(P<0.05);SAHA对HSCs的促凋亡作用具有时间依赖性(P<0.05)。SAHA处理HSCs后,α-SMA、Ⅰ型胶原、HDAC6和TIMP1的蛋白表达水平明显降低(P<0.05),GRP78的蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与激活型的HSCs相比,SAHA处理后的HSCs中免疫共沉淀下的蛋白复合物中GRP78与总的乙酰化赖氨酸蛋白显著增多,而HDAC6蛋白显著降低,同时证明GRP78与HDAC6形成复合物。结论:SAHA抗肝纤维化的机制可能是,SAHA下调HDAC6蛋白表达水平,上调乙酰化GRP78蛋白表达水平,诱导HSCs内质网应激,促进肝星状细胞凋亡,从而起到抗肝纤维化的作用。

阿尼西坦对血管性痴呆大鼠的治疗作用

目的:探讨阿尼西坦(Ani)对血管性痴呆(VD)大鼠的治疗作用。方法:实验将45只大鼠随机分为对照组、模型组和Ani治疗组。采用改良四血管阻断法(永久灼闭椎动脉、可逆夹闭颈总动脉)建立VD大鼠模型,用Ani(300 mg/kg)灌胃治疗4周;对照组大鼠手术同上,但不阻断血供,生理盐水2 ml灌胃4周。4周后行Morris水迷宫实验,测试各组大鼠空间学习记忆能力;采用免疫组化法检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)在海马齿状回的表达。结果:Ani组大鼠学习记忆能力较模型组明显提高(P<0.05),caspase-3在海马齿状回的表达水平比模型组明显降低(P<0.05)。结论:Ani能增强VD大鼠的空间认知能力,机制可能与其下调caspase-3表达而保护海马细胞免受凋亡损伤有关。

MIS后病灶区灌注RSG对家兔ICH模型血肿周围继发性脑损伤的作用

目的探讨立体定向微创颅内血肿清除术(MIS)后病灶区灌注罗格列酮(RSG)对家兔脑出血(ICH)模型血肿周围继发性脑损伤的作用。方法 60只家兔分为4组,分别为模型对照组(MC组)、罗格列酮组(RSG组)、微创手术组(MIS组)和微创手术+罗格列酮组(MIS+RSG组)。各组家兔均制作ICH模型,MC组及RSG组在模型制作成功后6h模拟手术过程进行假性血肿清除,RSG组病灶区灌注RSG,MIS组及MIS+RSG组进行微创血肿清除,MIS+RSG组随后病灶区灌注RSG,于实施相关处理后第7天对各组家兔进行神经功能缺损(Purdy)评分并处死,取血肿周围脑组织检测过氧化物酶体增殖物激或受体γ(PPARγ)水平及血脑屏障(BBB)通透性。结果 MC组Purdy评分、BBB通透性明显高于其他组,提示颅内血肿损害神经功能并破坏BBB通透性;与MC组相比,RSG组及MIS+RSG组的PPARγ表达显著增加,而MIS组PPARγ表达减少,提示RSG能明显增加PPARγ的表达,而微创清除颅内血肿后则可减少PPARγ的产生;与MC组比较,RSG组及MIS组血肿周围伊文思蓝(EB)水平显著降低,提示RSG治疗及MIS均可降低BBB通透性,MIS+RSG组EB含量降低更为明显,提示MIS后病灶区灌注RSG降低BBB通透性的效果更加明显。结论 MIS后病灶区灌注PPARγ激动剂RSG能有效减少家兔ICH模型继发性脑组织损伤,改善神经功能。

脓毒症患儿内皮细胞损伤标记物水平变化及其与严重程度的关系

目的探讨脓毒症患儿内皮细胞损伤标记物水平变化,以及与脓毒症严重程度之间的关系。方法选择0~14岁急性脓毒症及脓毒性休克小儿各30例为研究对象,对照组为非脓血症对象60例,入院后第1,3,7天对内皮细胞损伤相关的标记物进行检测,并比较两组对象之间标记物水平。结果脓毒血症患者观察循环内皮祖细胞（cEPCs）、内皮细胞特异性分子-1（ESM-1）、可溶性血栓调节蛋白（sTM）和可溶性E-选择素（sE-选择素）的浓度均明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）,且此四种标记物水平在病程的发展早期中均呈逐渐上升,发病第7天的cEPCs、ESM-1、sTM和sE-选择素水平明显高于第1天（P〈0.05）。严重脓毒症和/或脓毒性休克组患者在早期cEPCs和ESM-1的水平明显高于脓毒血症组,差异均有统计学意义（P〈0.01）,但sTM和sE-选择素的水平在两组患者之间的差异无统计学意义。结论内皮细胞损伤与脓毒血症的发生和发展均显著相关,且cEPCs和ESM-1与脓毒血症严重程度存在显著关联。

糖尿病大鼠肾组织中miR-21和SnoN表达的变化

目的探讨糖尿病(DM)大鼠肾组织中微小核糖核酸-21(miR-21)和核转录共抑制因子(SnoN)在肾纤维化过程中的表达变化及其可能机制。方法用链脲佐菌素复制DM大鼠模型,并设对照组(NC),每组n=8。10周后处死大鼠,观察肾组织形态变化;免疫组织化学染色、Western blot及RT-q PCR检测miR-21、SnoN、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、p-Smad3(Ser423/425)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)和胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ)的表达。结果与对照组相比,DM组肾组织p-Smad3(Ser423/425)、TGF-β1和α-SMA蛋白表达增加(P<0.05),SnoN、E-cadherin蛋白表达减少(P<0.05),但SnoN mRNA和miR-21表达明显上调(P<0.05),并伴有collagenⅠ、collagenⅢ和FN在间质沉积增多。结论 TGF-β1可能上调miR-21表达,抑制SnoN翻译水平的表达,促进DN的纤维化病变。