PAX5表达对神经内分泌肿瘤临床病理特征和预后的影响研究

目的探讨PAX5表达与神经内分泌肿瘤临床病理特征和预后的关系。方法收集神经内分泌肿瘤病例的临床资料和石蜡包埋的档案肿瘤组织,用免疫组化染色检测PAX5的表达,随访研究病例,分析PAX5表达与神经内分泌肿瘤临床病理特征和预后的关系。结果PAX5的总阳性表达率为50%;PAX5表达在不同部位的NEN中有明显差异,以肺NEN的阳性表达率最高(68.2%);PAX5表达在神经内分泌癌(NEC)与神经内分泌瘤(NET)病例之间、早期(Ⅰ期和Ⅱ期)与晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)病例之间、淋巴结转移与无转移病例之间差异有统计学意义(P<0.05)。在晚期临床分期、NEC病例和伴有淋巴结转移的NEN中PAX5表达明显增多。生存分析:NENs的获访率98.2%(55/56),多因素Cox-Regression分析发现肿瘤分级(P=0.003)、分期(P=0.049)、部位(P=0.000)、淋巴结转移(P=0.014)、PAX5(P=0.015)是神经内分泌肿瘤患者预后的独立影响因素。PAX5阳性与阴性表达的NEN病例的生存状况差异有统计学意义(P<0.05),阳性表达病例的生存状况较差。结论 PAX5阳性表达对NENs的临床病理特征有一定影响,可能是NEN不良预后的相关因子。

内质网应激凋亡通路中Caspase12激活介导的肝纤维化大鼠肝细胞凋亡

目的:观察内质网应激凋亡通路中关键信号分子Caspase12活性变化,探讨其在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中的可能作用.方法:将Wistar大鼠随机分为正常4 wk组、正常8 wk组、肝纤维化4 wk组和肝纤维化8 wk组.皮下注射40%CCl_4花生油溶液诱导肝纤维化形成,剂量0.3 mL/100 g体质量,2次/wk.肝组织中GRP78、GRP94及Caspase12基因水平的表达通过实时荧光定量PCR技术测定;GRP78、GRP94、Procaspase12及活性Caspase12蛋白的表达采用蛋白质免疫印迹法检测;肝细胞凋亡通过TUNEL法测定.结果:肝纤维化4 wk组大鼠肝组织中GRP78、GRP94及Caspase12 mRNA表达显著高于正常4 wk组大鼠;肝纤维化8 wk时,肝组织中GRP78、GRP94、Caspase12 mRNA的表达较正常8 wk组显著增加.通过Western blot对各指标蛋白水平的检测发现,肝纤维化4 wk时大鼠肝脏中GRP78、GRP94、Procaspase12及活性Caspase12蛋白的表达较正常4 wk组大鼠显著增加;肝纤维化8 wk时,肝脏中GRP78、GRP94、Procaspase12、活性Caspase12蛋白的表达仍保持在高水平,但与肝纤维化4 wk时比较无显著差异.细胞凋亡检测发现,与正常组大鼠比较,肝纤维化4 wk及8 wk组大鼠肝细胞凋亡均明显升高.结论:内质网应激凋亡通路中关键信号分子Caspase12活化可能介导了肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的发生.

葛根素预处理上调内皮型一氧化氮合酶的表达减轻人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤

目的:探讨葛根素(puerarin,PUE)预处理对缺氧/复氧(hypoxia reoxygenation,H/R)损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:HUVECs随机分为正常对照(control)组、H/R组、单纯PUE组和PUE+H/R组(1.0×10^(-3)mol/L PUE预处理24 h后进行H/R)。采用Western blot方法检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)蛋白的表达,化学比色法检测组成型一氧化氮合酶(c NOS)的活性,TUNEL法检测细胞凋亡。此外,在PUE预处理前使用ERK蛋白激酶抑制剂U0126(1.0×10^(-5)mol/L)或PI3K/Akt蛋白激酶抑制剂LY294002(5.0×10^(-5)mol/L)处理细胞1 h,再进行H/R。结果:与control组相比,H/R组的e NOS蛋白表达水平降低(P<0.05),PUE预处理上调e NOS蛋白的表达水平(P<0.05),该上调作用均可被U0126及LY294002抑制(P<0.05);与control组相比,H/R组的c NOS活力下降(P<0.05),PUE预处理组的c NOS活力增加(P<0.05);与control组相比,H/R组细胞凋亡指数显著增大(P<0.01),PUE预处理组的细胞凋亡指数减小(P<0.01)。结论:H/R可使HUVECs受损伤,e NOS蛋白表达及活性降低,细胞凋亡增加。PUE预处理可通过ERK1/2信号通路和PI3K/Akt信号通路上调HUVECs的e NOS蛋白表达,增强e NOS活性,减少细胞凋亡,发挥内皮细胞保护作用。

肠型胃癌细胞中酪蛋白激酶2相互作用蛋白1与转化生长因子β_1表达的相关性

目的探讨酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(CKIP-1)与转化生长因子β1(TGF-β1)在肠型胃癌细胞中表达的相关性。方法 Western blotting方法检测不同分化肠型胃癌细胞(高分化MKN28细胞、中分化SGC7901细胞和低分化BGC823、MKN45及AGS细胞)中CKIP-1与TGF-β1表达,Spearman相关性分析CKIP-1与TGF-β1表达相关性;分别构建过表达及干扰表达CKIP-1的人肠型腺癌MKN28细胞模型,Westernblotting方法检测各组细胞TGF-β1表达。结果与高分化胃癌MKN28细胞相比,中分化SGC7901细胞与低分化BGC823、MKN45及AGS细胞CKIP-1表达均降低、TGF-β1表达均升高(P <0.01);与中分化SGC7901细胞相比,低分化BGC823、MKN45及AGS细胞CKIP-1表达降低、TGF-β1表达升高(P <0.01);Spearman相关性分析显示不同分化肠型胃癌细胞中CKIP-1与TGF-β1表达负相关(r=-0.689 2,P <0.01)。与空白对照组相比,CKIP-1过表达组MKN28细胞TGF-β1表达下降(P <0.01),CKIP-1干扰表达组MKN28细胞TGF-β1表达增加(P <0.01)。结论肠型胃癌细胞中CKIP-1与TGF-β1蛋白表达负相关,CKIP-1蛋白可能通过负性上调TGF-β1表达后促进了肠型胃癌的恶性转化、发展及浸润转移。

沉默Smo基因对大鼠原代软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的观察沉默Smo基因后对大鼠原代软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法用机械-酶消化法获取原代大鼠软骨细胞,经免疫细胞化学Ⅱ型胶原（ColⅡ）鉴定后,将实验分为对照组、control siRNA组和Smo siRNA 1~3组,以慢病毒为载体将siRNA转入软骨细胞,72 h后,MTT法检测细胞活力;反转录PCR（RT-PCR）及蛋白印迹（Western blot）检测Smo的表达量;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果各组序列经慢病毒载体成功转染到原代软骨细胞中,Smo siRNA1~3均不同程度的抑制Smo的表达,以Smo siRNA2组最为明显,其mRNA及蛋白的表达分别为0.19±0.03和0.39±0.07;同时,Smo siRNA2组细胞活力最低（77.38%±7.19%）而凋亡率最高（21.43%±2.97%）。结论沉默Smo可抑制原代软骨细胞增殖,并诱导软骨细胞凋亡,Smo具有保护软骨细胞免遭凋亡的作用。

重症肺炎患儿血清免疫球蛋白检测的临床意义

目的:了解重症肺炎患儿免疫球蛋白(Ig)A、Ig G及Ig M变化与其临床特征的关系。方法:住院治疗的重症肺炎患儿100例为观察组,健康体检的正常健康儿童30例为对照组,采用免疫比浊发测定观察组入院时和对照组体检当日清晨血清Ig A、Ig G及Ig M水平,记录Ig A、Ig G及Ig M降低在重症肺炎患儿的构成类型,分析不同Ig降低类型与重症肺炎患儿体温控制时间、肺部啰音吸收时间及临床治愈时间的关系。结果:观察组患儿血清Ig A、Ig G水平较对照组儿童低(P<0.05);重症肺炎患儿血清Ig降低以Ig A+Ig G二联为主,其次为Ig A降低和Ig A+Ig G+Ig M三联降低,单一Ig G降低及Ig A+Ig M二联降低少见,单一Ig M降低及Ig G+Ig M二联降低未见;Ig A+Ig G+Ig M三联降低型的重症肺炎患儿体温控制时间较Ig A+Ig G二联降低及单一Ig A降低患儿长;Ig A+Ig G+Ig M三联和Ig A+Ig G二联降低型患儿的肺部啰音吸收时间及住院时间较单一Ig A降低的患儿延长(P<0.05)。结论:重症肺炎患儿存在Ig降低,当存在两种或以上Ig降低时,临床上治疗难度较大。

2μm激光犬前列腺及膀胱颈切除后前列腺部尿道及膀胱颈创面TGF-β_1表达研究

目的观察2微米(μm)激光犬前列腺及膀胱颈切除后前列腺部尿道及膀胱颈创面修复后期转化生长因子β_1(TGF-β_1)表达,初步探讨前列腺部尿道创面修复后少瘢痕愈合的可能原因。方法建立2μm激光犬前列腺及部分膀胱颈切除动物模型,于术后3、4、8及12周留取前列腺部尿道及膀胱颈创面标本,免疫组化染色方法检测两创面TGF-β_1表达。结果与术后3周相比,术后4、8及12周前列腺部尿道创面内前列腺上皮细胞及成纤维细胞(或纤维细胞)TGF-β_1表达均降低(P<0.01,P<0.05);膀胱颈创面内成纤维细胞(或纤维细胞)TGF-β_1表达无明显变化。结论与膀胱颈创面相比,前列腺部尿道创面修复后期TGF-β_1表达水平降低,可能与前列腺部尿道创面"少瘢痕"愈合有关。

辛二酰苯胺异羟肟酸对人肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对人肝星状细胞系LX-2增殖及凋亡的影响及其可能机制。方法体外应用SAHA作用于LX-2细胞,倒置显微镜观察LX-2细胞形态,MTT法检测细胞增殖;荧光显微镜及流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率;Western blot检测α-SMA、Ⅰ型胶原、ac H3K9、ac H3K14和ac H3K18蛋白表达。结果 SAHA呈剂量依赖性显著抑制LX-2细胞增殖(P<0.05);SAHA对LX-2细胞凋亡具有呈时间依赖性的促进作用(P<0.05);SAHA处理LX-2细胞后,α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而ac H3K9、ac H3K14和ac H3K18乙酰化修饰水平明显升高(P<0.01)。结论 SAHA抗肝纤维化的机制可能与下调α-SMA及Ⅰ型胶原蛋白表达,上调组蛋白ac H3K9、ac H3K14和ac H3K18乙酰化修饰水平有关。

前列腺上皮细胞对成纤维细胞TGF-β_1、α-SMA表达的影响

目的观察人前列腺上皮细胞(BPH-1细胞)对人成纤维细胞(HFF-1细胞)TGF-β_1、α-SMA表达的影响。方法将BPH-1细胞与HFF-1细胞非接触性共培养(共培养组),另单独培养HFF-1细胞(对照组),Western blot方法检测两组HFF-1细胞的TGF-β_1、α-SMA蛋白表达。结果与对照组相比,共培养组HFF-1细胞TGF-β_1、α-SMA表达低于对照组(P<0.05)。结论前列腺上皮细胞可能对成纤维细胞TGF-β_1、α-SMA的表达起到抑制作用。

腺苷2a受体抑制剂抑制人非小细胞肺癌细胞系A549增殖和迁移

目的探讨腺苷2a受体抑制剂(A2aRi)对人非小细胞肺癌细胞系A549增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法将细胞分为对照组及干预组,干预组予不同浓度的A2aRi处理;用MTT法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移; 24 h后,免疫荧光观察A2aR和caspase3在细胞中表达定位;用Western blot和RT-qPCR检测A2aR、caspase3蛋白和A2aR m RNA的表达。结果 A2aRi能抑制A549细胞的增殖(P<0. 01),其迁移能力减弱,A2aR红色荧光强度较对照组减弱,caspase3绿色荧光强度较对照组增强,两者均在胞质中表达。Caspase3蛋白表达增加(P<0. 01),A2aR蛋白表达减少(P<0. 01); A2aR m RNA表达下调(P<0. 05)。结论 A2aR在人非小细胞肺癌细胞系A549中高表达,A2aRi能抑制A549细胞增殖和减弱其迁移能力。

AngⅡ/AT_1R通路下调内皮型一氧化氮合酶磷酸化的机制研究

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)/血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT_1R)通路通过激活蛋白磷酸酶2 A(protein phosphatase 2 A,PP2 A)导致大鼠肠系膜动脉中内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)磷酸化水平下调的机制。方法:采用体重160~180 g成年雄性SD大鼠90只,在无菌条件下分离大鼠肠系膜动脉。首先明确AngⅡ下调大鼠肠系膜动脉中e NOS(Ser1177)磷酸化的效应,将肠系膜动脉随机分为正常对照(control)组和AngⅡ组,AngⅡ组用浓度为1×10^(-7)mol/L、1×10^(-6)mol/L和1×10^(-5)mol/L AngⅡ分别孵育离体大鼠肠系膜动脉血管6 h、12 h和24 h;然后进一步探讨AngⅡ使eNOS(Ser1177)发生磷酸化下调的分子机制,将肠系膜动脉随机分为正常对照(control)组、AngⅡ组和坎地沙坦(candesartan,CAN;AT_1R特异性抑制剂)+AngⅡ组(用1×10^(-5)mol/L CAN预处理大鼠肠系膜动脉血管1 h后,再用1×10^(-7)mol/L AngⅡ继续孵育12 h)。采用Western blot法检测肠系膜动脉中eNOS蛋白表达和eNOS(Ser1177)磷酸化水平,以及PP2Ac的蛋白表达、PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白I^2^(PP2A)的表达水平,并用PP2A活性检测试剂盒测定大鼠肠系膜动脉PP2A活性变化。结果:(1)与control组比较,AngⅡ孵育离体大鼠肠系膜动脉血管6 h、12 h和24 h后,eNOS(Ser1177)磷酸化水平均明显降低(P<0.05),且12 h组和24 h组eNOS(Ser1177)磷酸化水平下降均出现明显浓度依赖性,但不同浓度组间eNOS蛋白表达水平差异均无统计学显著性;(2)与control组比较,1×10^(-7)mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,eNOS(Ser1177)磷酸化水平降低(P<0.05);CAN预处理可明显上调eNOS(Ser1177)磷酸化水平(P<0.05),且各组间eNOS蛋白表达水平差异无统计学显著性;(3)与control组比较,1×10^(-7)mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和I_2^(PP2A)蛋白表达均降低(P<0.05);CAN预处理可使PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和IPP2A2蛋白表达均增加(P<0.05),但各组间PP2Ac蛋白表达的差异无统计学显著性;(4)与control组比较,1×10^(-7)mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,PP2A活性增高(P<0.05);CAN预处理可明显抑制AngⅡ对PP2A的激活作用(P<0.05)。结论:AngⅡ可通过AT1R通路激活PP2A,从而介导大鼠肠系膜动脉eNOS(Ser1177)磷酸化水平下调,其分子机制可能与PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白I_2^(PP2A)表达降低有关。

AngⅡ/AT_1R通路通过激活人脐静脉内皮细胞PP2A导致eNOS Ser1177磷酸化水平下调

目的:初步探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)/血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype1 receptor,AT_1R)通路是否通过激活人脐静脉内皮细胞蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)导致内皮型一氧化氮合酶(eNOS)Ser1177磷酸化水平下调。方法:将人脐静脉内皮细胞随机分为正常对照(control)组、AngⅡ处理组、单纯坎地沙坦(candesartan,CAN;AT_1R特异性阻断剂)组和CAN预处理+AngⅡ组。用Western blot方法检测各组eNOS总蛋白表达、eNOS Ser1177磷酸化水平、PP2Ac蛋白表达、PP2Ac-Tyr307磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白I_2^(PP2A)表达水平。采用化学比色法检测各组细胞培养基中的NO含量。结果:与control组相比,AngⅡ处理后eNOS Ser1177磷酸化水平及细胞培养基中的NO含量降低(P<0.05);与同一浓度AngⅡ组相比,CAN预处理可增加eNOS Ser1177磷酸化水平及细胞培养基中的NO含量(P<0.05);各组间eNOS蛋白表达差异无统计学显著性。与control组比较,AngⅡ处理后PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达降低(P<0.05);与同一浓度AngⅡ组相比,CAN预处理可增加PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达(P<0.05);各组间PP2Ac蛋白表达差异无统计学显著性。结论:AngⅡ可通过AT_1R通路导致人脐静脉内皮细胞eNOS Ser1177磷酸化水平下调,NO合成减少,这一效应可能与AngⅡ/AT_1R通路降低PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达水平、导致PP2A活性增强有关。特异性AT_1R阻断剂CAN预处理可通过增加PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达水平而降低PP2A活性,最终上调eNOS Ser1177磷酸化水平,恢复eNOS活性。

阿托伐他汀对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织Wnt4/β-catenin信号通路的干预作用

目的探讨阿托伐他汀对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织Wnt4/β-catenin信号通路的干预作用。方法 36只SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和阿托伐他汀组,各组分别设7 d、14 d两个时间点。HE、Masson、PAS染色法观察肾脏病理改变;免疫组化观察Wnt4和β-catenin蛋白在肾组织的表达;Western印迹检测各组大鼠肾皮质Wnt4、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、Ecadherin、α-SMA和CollagenⅠ蛋白的相对表达量。结果与假手术组相比,模型组肾皮质Wnt4和β-catenin、p-GSK-3β、α-SMA蛋白表达显著增多(P<0.05),CollagenⅠ沉积增多(P<0.01),E-cadherin蛋白表达显著减少(P<0.01),GSK-3β在各组大鼠肾组织表达无差异;与模型组相比,阿托伐他汀组肾组织Wnt4、β-catenin、p-GSK-3β和α-SMA蛋白表达减少(P<0.05),CollagenⅠ蛋白沉积显著减少(P<0.05),并伴有E-cadherin蛋白表达显著增多(P<0.05),而GSK-3β蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论 Wnt4/β-catenin信号通路的活化促进了UUO大鼠肾脏纤维化的发生发展,阿托伐他汀能改善肾脏纤维化病变,减轻肾间质细胞外基质的沉积,可能与其抑制Wnt4/β-catenin信号通路的激活和传导有关。

还原型谷胱甘肽靶向氧化应激对肝癌干细胞的作用

目的探讨还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)干细胞性的作用。方法采用总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(T-GSH/GSSG)测试盒检测细胞内T-GSH/GSSG水平;应用CCK-8实验评估细胞活力及干细胞培养基培养干细胞球(HCC sphere);运用流式细胞技术分析CD133阳性细胞亚群比例。结果HCC细胞中内源性T-GSH/GSSG水平比正常细胞显著升高。外源性补充GSH减少胞内活性氧物质(reactive oxygen species,ROS)并抑制HCC细胞活力及HCC sphere形成。进一步分析发现GSH显著降低CD133+肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSC)的亚群比例。结论HCC细胞中ROS水平及抗氧化防御能力增强。外源性GSH能够降低胞内的ROS水平,并抑制HCC细胞活力及干细胞性,降低LCSC在HCC细胞中的亚群比例。为靶向异常氧化应激(oxidative stress,OS)及肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)治疗HCC提供了新靶点。

脓毒症及脓毒性休克大鼠脑细胞TLR4和TNF-α的表达及细胞凋亡研究

目的目的观察脓毒症及脓毒性休克时期大鼠脑细胞Toll样受体4(tol-like receptor4,TLR4)及肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)的表达及脑细胞凋亡情况。方法 1.建立动物模型及分组:72只SPF级SD大鼠随机分为正常对照组、脓毒症组及脓毒性休克组,脓毒症组腹腔注射10mg/kg内毒素、脓毒性休克组腹腔注射12mg/kg内毒素建立大鼠模型、正常对照组腹腔注射12mg/kg生理盐水;2.各组大鼠在注射后1h、6h、24h处死,每时点每组各8只,采集脑组织标本;标本制作石蜡切片,采用原位杂交探针序列,进行TLR4及TNF-α的mRNA原位杂交检测;TUNEL(原位末端1转移酶标记技术)法测定细胞凋亡。结果 TLR4、TNF-α及脑细胞凋亡在脓毒症及脓毒症休克组大鼠脑组的织表达在LPS攻击后1h、6h、24h随时间呈上升趋势,且每个时段脓毒症组、脓毒性休克组均显著高于对照组,脓毒性休克组显著高于脓毒症组(P均<0.05)。结论 TLR4及TNF-α在脓毒症,尤其是在脓毒性休克大鼠脑细胞的高表达,与重要脏器组织细胞凋亡有关。

改良Gallyas-Braak嗜银染色在阿尔茨海默氏病中的应用

中枢神经系统变性疾病是一组原因不明、具有选择性神经元和胶质细胞变性特征的疾病,包括阿尔茨海默病（AD）、多系统萎缩、Pick病及进行性核上性麻痹等。这些变性疾病有各自特殊的组织学病变,需经特殊嗜银染色或相应蛋白的免疫组织化学染色才能显示。国外多采用修订的Gallyas-Braak嗜银染色方法代替传统的Bodian或Bielschowsky嗜银染色方法显示AD脑组织中神经细胞外老年斑（SP）。

兔骨软骨骨折后软骨骨折块内固定方法的实验研究

外伤常常引起关节软骨及软骨下骨骨折,进而导致关节软骨面缺损,当缺损直径≥4mm,则引起创伤性骨关节炎或加速关节退变[1]。目前对于软骨骨折块,推荐解剖复位内固定治疗,常用的骨软骨骨折块固定方法包括：丝线、生物蛋白胶、可吸收螺钉和Herbert螺钉几种方法。本文构建相应的软骨骨折动物模型,采用不同的固定方法,从组织学角度观察软骨的愈合过程,探索内固定的最佳方案,为临床软骨骨折内固定作为参考。

脓毒症大鼠肝脏细胞TLR4和TNF-α表达及细胞凋亡研究

目的观察脓毒症时期大鼠肝脏Toll样受体4(toll-like receptor 4,tLR4)及肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达及肝脏细胞凋亡情况。方法 (1)建立动物模型及分组:72只SPF级SD大鼠随机分为正常对照组、脓毒症组及脓毒性休克组,脓毒症组腹腔注射10mg/kg内毒素(lipopolysaccharide,LPS)、脓毒性休克组腹腔注射12mg/kg内毒素建立大鼠模型;正常对照组腹腔注射12mg/kg生理盐水。(2)各组大鼠在注射后1h、6h、24h处死,每时点每组各8只,采集肝脏组织标本;标本制作石蜡切片,并设计原位杂交探针序列,进行mRNA原位杂交检测;TUNEL(原位末端1转移酶标记技术)法测定细胞凋亡;结果进行定量分析,并做数据统计。结果 (1)mRNA原位杂交检测TLR4在脓毒症及脓毒症休克组大鼠肝脏表达在LPS攻击后1h、6h、24h随时间呈上升趋势,且每个时段脓毒症组、脓毒性休克组均显著高于对照组,脓毒性休克组TLR4表达显著高于脓毒症组(P<0.05)。(2)TNF-α在LPS攻击大鼠后1h、6h、24h随时间呈上升趋势,且每个时段脓毒症组、脓毒性休克组均显著高于对照组,脓毒性休克组均显著高于脓毒症组(P<0.05)。(3)脓毒症及脓毒性休克大鼠肝脏组织细胞凋亡情况随时间呈上升趋势,且每个时段脓毒症组、脓毒性休克组显著高于对照组,脓毒性休克组细胞凋亡显著高于脓毒症组(P<0.05)。结论 (1)TLR4及TNF-α在肝脏的高表达,尤其在脓毒性休克大鼠肝脏的高表达,进一步证实由于LPS导致机体通过TLR4介导产生TNF-α等炎症因子的过度释放,产生炎症因子的瀑布反应,引起重要脏器组织细胞凋亡,对机体造成严重影响。(2)通过阻断TLR4的表达,可能抑制脓毒症大鼠炎症因子的大量释放,对减轻机体各重要脏器的损害可能有益。

慢性氟中毒仔鼠神经组织中4-HNE、NTY、8-OHdG表达

目的 观察DNA、脂质及蛋白质氧化损伤产物在慢性氟中毒大鼠仔代神经组织中的表达.方法 SD大鼠60只,随机分成氟中毒组与对照组.氟中毒组饮用含氟量为100 mg/L的自来水,对照组饮用正常自来水(含氟量不足0.5 mg/L),饲养6个月后自由交配产仔,每组选取20只一月龄仔鼠取材脑组织,检测仔代神经组织中8羟基脱氧鸟苷(8 -hydroxy-2 -deox-yguanosine,8-OHdG)、4羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)以及硝基酪氨酸(nitrotyrosine, NTY)的表达变化情况.结果 氟中毒组大鼠仔代神经组织中4-HNE、NTY与8-OHdG的相对灰度值(0.271 ± 0.121、0.301 ± 0.412、0.155 ± 0.012)明显高于对照组(0.131 ± 0.012、0.113 ± 0.008、0.127 ± 0.002).结论 慢性氟中毒会在仔代神经组织中形成积聚效应,仔代神经组织中4-HNE、NTY、8-OHdG蛋白产生增多,对仔代中枢神经系统造成氧化应激损伤.

硫酸软骨素对低营养状态下SH-SY5Y细胞保护作用的观察

目的通过观察硫酸软骨素对体外培养SH-SY5Y细胞株生长状态、细胞生存率和超微结构的影响,探讨硫酸软骨素对脑神经细胞生长促进作用及损害的保护作用。方法培养SH-SY5Y细胞,观察正常SH-SY5Y细胞、低营养处理及硫酸软骨素处理SH-SY5Y细胞的形态及细胞活力。用光学显微镜及透射电子显微镜观察各组细胞形态及超微结构改变,用MTT法检测细胞生存率。结果硫酸软骨素处理组SH-SY5Y细胞较低营养处理组细胞生长状态好,细胞形态完整,低营养处理组存活细胞数量减少,突起减少、变短;电镜观察低营养处理组细胞中内质网、高尔基体及线粒体肿胀呈空泡状,部分细胞破裂成碎片,正常对照组和硫酸软骨素处理组细胞结构完整,内质网、高尔基体及线粒体结构正常;细胞存活率低营养处理组较对照组明显降低,相同培养时间内存活细胞数量较少,而硫酸软骨素处理组较对照组和低营养处理组存活率明显升高,存活细胞数量明显增多。结论硫酸软骨素可延长SH-SY5Y细胞生存时间,可维持和改善低营养状态下SH-SY5Y细胞形态及生理功能。硫酸软骨素对保护和促进神经细胞生长具有一定作用。