靶向沉默HIF-1α和Survivin基因对鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响

目的:探讨RNAi靶向沉默人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和/或生存素(Survivin)基因对裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响。方法:设计合成靶向沉默HIF-1α和/或Survivin的microRNA干扰质粒,采用脂质体转染法将HIF-1α和/或Survivin的microRNA干扰质粒转染到CNE-2细胞;取35只4~6周龄的雌性BALA/c裸鼠,随机均分为HIF-1α干扰组、Survivin干扰组、HIF-1α&Survivin干扰组(联合干扰组)、空载组和阴性对照组;分别给予相应转染后的CNE-2细胞注射至裸鼠右侧腋窝皮下,待各组裸鼠成瘤后,给予5Gy X-射线照射,每隔3 d放疗1次,共15Gy X-射线,观察各组裸鼠放疗前后的肿瘤体积,照射结束3 d后处死裸鼠,测量瘤体体积,计算肿瘤体积增加率;RT-q PCR法检测瘤体组织中的HIF-1α和Survivin mRNA表达水平,Western Blot法检测HIF-1α和Survivin蛋白表达水平,TUNEL试剂盒检测鼻咽癌裸鼠移植瘤中细胞凋亡。结果:HIF-1α干扰组、Survivin干扰组与联合干扰组经过放射治疗后肿瘤体积增加率明显小于空载体组与阴性对照组(P<0.05);HIF-1α干扰组、Survivin干扰组与联合干扰组瘤体组织中HIF-1α、Survivin mRNA和蛋白质表达水平显著低于空载组与阴性对照组,细胞凋亡率高于空载组与阴性对照组(P<0.05);HIF-1α干扰组、Survivin干扰组及联合干扰组瘤体组织中HIF-1α、Survivin mRNA和蛋白质表达水平及细胞凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:单独干扰HIF-1α、Survivin基因与联合干扰HIF-1α和Survivin基因均能够增加鼻咽癌裸鼠移植瘤对放疗敏感性,但联合干扰并没有进一步提高鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗敏感性。

沉默HIF-1α对人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:探讨沉默缺氧诱导因子-1α对人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法:15只4~6周龄雌性裸鼠,随机均分为为HIF-1α干扰组、空载组及阴性对照组;采用脂质体转染法将HIF-1α的microRNA干扰质粒转染CNE-2细胞,RT-q PCR检测其沉默效应,将转染HIF-1α干扰质粒的CNE-2细胞、转染空载质粒的CNE-2细胞以及CNE-2细胞分别接种于3组裸鼠右腋皮下,建立鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤模型,形成肉眼可见的肿瘤后再喂养16 d,观察各组成瘤时间及肿瘤体积;RT-q PCR检测3组移植瘤中HIF-1α基因的表达,蛋白质印迹法检测3组移植瘤中HIF-1α蛋白的表达。结果:成功构建裸鼠移植瘤模型,HIF-1α干扰组、阴性对照组、空载组裸鼠成瘤时间分别为(8.60±1.40)、(4.60±0.55)、(4.80±0.84)d,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤体积分别为(128.60±77.70)、(1 411.10±212.50)、(1 306.80±154.60)mm3,差异有统计学意义(P<0.05);HIF-1α干扰组瘤体组织中的HIF-1α基因和蛋白的表达量明显降低(P<0.05)。结论:沉默HIF-1α基因能有效抑制人鼻咽癌裸鼠移植瘤成瘤时间和肿瘤的生长。

急性化脓性中耳炎并发岩锥炎1例

岩锥炎（petrositis）又称为岩尖炎。是一种非常少见的中耳炎并发症。由于抗生素的广泛使用,使得岩锥炎症状不典型,病情复杂化,因而诊断治疗有一定的困难。2014年4月收治1位急性化脓性中耳炎并发岩锥炎的患者,报告如下。

纳米载体介导沉默Survivin基因对鼻咽癌细胞增殖凋亡及放疗敏感性的影响

目的：探讨纳米载体转染沉默鼻咽癌CNEII细胞中Survivin基因后,CNEII细胞增殖、凋亡及对放疗敏感性的改变。方法：制备聚乙烯亚胺（PEI）-四氧化三铁（Fe3O4）磁性纳米粒,用PEI-Fe3O4磁性纳米粒包被miRNA-Survivin质粒（纳米干扰质粒）,将CNEII细胞分为空白对照组（不加质粒,C组）、加纳米干扰质粒组（S组）及加miRNA-NC对照质粒组（NC组）;3组细胞转染48 h后,荧光显微镜下观察质粒所带绿色荧光蛋白EGFP的表达,进行细胞计数,计算转染效率;利用Real Time RT-PCR及Western Blot方法检测Survivin mRNA及蛋白表达抑制情况;转染24、48、72及96 h时用MTT法检测3组细胞的增殖情况,转染48 h时用放射线照射3组,采用流式细胞术检测3组细胞放射线照射前后的细胞凋亡率。结果：转染48 h后,加入包被miRNA-Survivin质粒的PEI-Fe3O4磁性纳米粒的CNEII细胞转染效率为（60.9±3.9）%、mRNA表达抑制率为96.5%、蛋白表达抑制率为82.5%,均高于C组和NC组（P〈0.05）,说明构建PEI-Fe3O4磁性纳米粒成功;MTT结果显示48 h以后S组细胞的吸光度值低于NC组和C组,说明细胞增殖被抑制;转染48-72 h CNEII细胞施以6Gy的放射线照射,射线照射后S组细胞凋亡率高于S组照射前（P〈0.05）,S组细胞凋亡率高于NC组和C组（P〈0.05）。结论：鼻咽癌CNEII细胞沉默Survivin基因后的细胞的增殖被抑制、凋亡数增加,放射线照射凋亡更明显。

头颈鳞癌靶向放射治疗敏感性lncRNA的初步筛选

目的:初步探讨长链非编码RNA(lnc RNA)在研究头颈鳞癌(HNSCC)放疗中的作用。方法:将HNSCC-SCCⅦ细胞分为对照组(不予放疗)和实验组(予放疗干预),应用芯片技术,筛选出放疗干预后HNSCCSCCⅦ细胞中差异表达的lnc RNA及m RNA,通过Cis和Trans法对靶基因进行预测,应用DAVID软件进行KEGG通路筛选,得到对应的靶基因富集的KEGG通路包括肿瘤相关通路、Wnt信号通路及轴突导向通路,分析这3条通路上对应的靶基因,并找到与这些靶基因对应的lnc RNA。结果:筛选出1 280条放疗差异表达的lnc RNA,对照组相对实验组高表达5倍以上的共15条,低表达5倍以上的共8条;筛选发现表达差异的m RNA有1 087条,对照组相对实验组高表达的528条,对照组相对实验组低表达559条;KEGG通路信息分析lnc RNA对应的靶基因富集于肿瘤相关通路、Wnt信号通路和轴突导向通路;Wnt信号通路中靶基因PRKCA和STAT5B对应的lnc RNA与m RNA是共表达的,对应的16203-3lnc RNA在对照组的表达为实验组的3.176倍(P<0.05),对应的31238-3lnc RNA在实验组中的表达量为对照组中的2.037倍(P<0.05)。结论:PRKCA和STAT5B可能是控制HNSCC放疗反应敏感性的靶基因,对应的16203-3lnc RNA和31238-3lnc RNA可作为调控HNSCC放疗敏感性的候选lnc RNA。

咽鼓管球囊扩张术在咽鼓管功能障碍治疗中的应用价值分析

目的探讨咽鼓管球囊扩张术在咽鼓管功能障碍治疗中的应用价值。方法选取我院贵州省人民医院耳鼻咽喉头颈外科收治的78例(100耳)咽鼓管功能障碍患者进行研究,所有患者均行咽鼓管球囊扩张术治疗,分析其治疗效果。结果本组患者治疗前及治疗后1周比较耳闷塞感、听物朦胧感VAS评分均存在明显差异(P<0.05);治疗后6个月与治疗前比较耳闷塞感、听物朦胧感、耳内水泡声等主观症状的VAS评分,均存在明显差异(P<0.05);术前及术后6个月比较咽鼓管测压(TMM)出现正常R值的比率存在统计学意义(P<0.05)。本组患者治疗总有效率为96.0%。结论对咽鼓管功能障碍患者实施咽鼓管球囊扩张术治疗效果显著,有利于改善耳闷塞感、听物朦胧感等主观症状,具有临床推广价值。

纳米包被siRNA复合体在抗癌治疗中的应用

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是在研究新小杆线虫双链RNA（double strand RNA,dsRNA）介导的基因出现表达抑制时首次被发现的,但由于这样的基因沉默是系统性的,当时有假设RNAi的效应是由一些稳定的中间媒介所调控的,后来才有更进一步的研究发现了这些中间媒介,例如dicer酶和RNA诱导沉默复合体（RNA-inducedsi-lencingcomplex，RISC），RISC是由一系列蛋白和siRNA小分子组成的化合物，其中高度保守的Ar-gonaute蛋白AG02是组成RISC酶促反应的中心。

接头蛋白Crk Ⅰ在喉鳞癌中的表达及意义

目的:探讨接头蛋白Crk Ⅰ在喉鳞癌组织中的表达及意义;方法:采用免疫组化SP法,对54例喉鳞癌手术切除标本和22例癌旁正常组织进行检测,观察Crk Ⅰ在2种组织中的表达,分析Crk Ⅰ的表达与鳞癌临床分期、病理分级、肿瘤转移及生存时间的关系。结果:Crk Ⅰ在喉癌组织中主要表达于细胞质、细胞核可见少量表达、阳性率达64.8%,在癌旁正常组织中少量表达或无表达,2种组织中Crk Ⅰ表达阳性率比较,差异有统计学意义(χ~2=24.149,P<0.01);喉鳞癌组织中,有淋巴结转移者Crk Ⅰ蛋白阳性表达率为91.7%,与无淋巴结转移者的54.8%比较,差异有统计学意义(P<0.05);但Crk Ⅰ蛋白的阳性表达率在各年龄组、不同临床分期、病理分级及不同预后的喉鳞癌患者中比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:接头蛋白Crk Ⅰ可能在喉鳞癌细胞的发生、发展和转移中有重要意义。