SIRT1通过调节FOXO1/RAB7信号通路促进低氧诱导的胰腺癌细胞自噬

目的:探讨SIRT1对低氧诱导的胰腺癌细胞自噬的影响及FOXO1/RAB7信号通路在其中的作用。方法:利用Western blot和免疫荧光法检测SIRT1在低氧诱导的自噬胰腺癌细胞核内的表达情况。将下调 SIRT1 基因的小干扰RNA和过表达 SIRT1 的质粒转染到胰腺癌Panc-1细胞中,敲减和过表达 SIRT1 基因;激光共聚焦显微镜追踪双色LC3荧光蛋白表达,Western blot实验检测自噬相关蛋白LC3、p62及FOXO1/RAB7信号通路的蛋白表达情况。通过生物信息学GEPIA网站关联性分析预测SIRT1与FOXO1的相互作用,并进一步利用免疫共沉淀技术检测 SIRT1与FOXO1蛋白的相互作用。结果: SIRT1在低氧诱导的胰腺癌细胞核内表达增加。敲减SIRT1 的表达可以引起胰腺癌细胞自噬受抑制。过表达 SIRT1 能够增强Panc-1细胞中FOXO1和RAB7的蛋白表达水平( P <0.05),而当 SIRT1 表达下调时,FOXO1和RAB7表达受到抑制( P <0.05)。SIRT1与FOXO1蛋白存在相互作用。结论: SIRT1可能参与胰腺癌细胞自噬的调控,其机制可能与 FOXO1/RAB7信号通路有关。

原发性肝癌患者血清代谢产物初步研究

目的:分析原发性肝癌(PHC)患者血清中小分子代谢产物的改变,为早期诊断和治疗原发性肝癌提供依据。方法:收集52例原发性肝癌(实验组)和同期17例正常体健者(对照组)血清,Bruker 600核磁共振检测两组血清中小分子代谢产物,通过主成分分析法比较两组受检者血清中代谢产物含量的差别情况。结果:与对照组比较实验组血清中α-葡萄糖、β-葡萄糖、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白、糖蛋白、乳酸盐、异丁酸盐、丙氨酸、精氨酸、赖氨酸及肌酸等含量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:质子核磁共振代谢组学技术可以无创而有效地识别肝癌患者血清代谢变化,有望成早期诊断原发性肝癌的一种新的方法。

缺氧下HIF-1α对胰腺癌细胞“干性”的影响及机制

目的:通过构建人胰腺癌PANC-1、As PC细胞缺氧模型、检测缺氧对胰腺癌细胞"干性"及生物学恶性行为的影响。方法:在缺氧培养箱中构建人胰腺癌PANC-1、As PC细胞缺氧模型,通过Western Blot检测胰腺癌细胞中缺氧诱导因子(HIF-la)表达情况;通过悬浮培养成球实验检测肿瘤细胞成球生长能力,流式细胞术检测胰腺癌细胞表面CD133阳性率,PCR和Western blot实验检测常氧和缺氧培养下干性相关基因(BMI-1、OCT4A、Nanog、SOX2)在mRNA以及蛋白水平的表达差异,免疫荧光观察CD133的表达量以及其定位变化。结果:随着缺氧时间的延长,HIF-1a、CD133表达逐渐上升,在16 h时HIF-1a表达处于高峰;缺氧时间超过16 h后,随着HIF-1a表达降低,CD133表达也降低,同时缺氧胰腺癌细胞悬浮成球能力增强,CD133+细胞比例增多,干性标记物mRNA表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05);缺氧培养下胰腺癌表面标记CD133阳性率显著上调,差异具有统计学意义(P<0.05);在缺氧条件下,下调HIF-1α后,BMI-1、OCT4A、Nanog、SOX2表达显著下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:缺氧可诱导胰腺癌细胞"干性"维持或增强,在缺氧条件下HIF-lα对胰腺癌细胞"干性"调节有着重要作用。

过表达microRNA-137对体外人胰腺癌细胞增殖能力的影响

目的:过表达microRNA-137(miR-137)对体外人胰腺癌增殖能力的影响及其机制初探。方法:将胰腺癌PANC-1和As PC细胞分为miR-137 mimics转染组和对照组,并通过qRT-RCR检测转染效率;利用流式细胞仪检测细胞凋亡率和周期阻滞变化,CCK-8实验、平板克隆实验检测miR-137对胰腺癌细胞增殖能力的影响,qRT-RCR、Western blot等实验检测miR-137对PTN的mRNA及蛋白表达的影响。结果:上调miR-137表达后,PANC-1、As PC胰腺癌细胞凋亡率增加(P<0.05)、周期阻滞于G1期比例增加(P<0.05);CCK8及平板克隆实验结果均显示过表达miR-137后,胰腺癌细胞增殖能力降低PTN表达显著下调。结论:miR-137在胰腺癌细胞中的表达水平影响抑制胰腺癌的增殖能力,其机制可能与抑制PTN的表达有关。

microRNA-100对胰腺癌细胞侵袭和转移能力的影响及机制

目的:探讨miR-100对胰腺癌细胞在体外侵袭和迁徙能力的影响及其机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶连反应(qRT-PCR)检测miR-100在6株人胰腺癌细胞系及1株人正常胰腺上皮细胞系中的表达,选取表达差异较明显的PANC-1和MIA PaCa-2细胞系进行后续实验;针对miR-100设计miR-100 mimic和空载体(NC),并转染上述两株细胞系中,用PCR检测转染效率;Transwell实验及划痕实验检测miR-100对胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响,免疫荧光检测miR-100对胰腺癌细胞骨架的影响,Western blot检测转染细胞后FZD-8的表达。结果:PCR实验显示miR-100在胰腺癌细胞系中低表达,在正常胰腺上皮细胞系中高表达,所设计的miR-100 mimic可以有效地升高PANC-1和MIA PaCa-2细胞系中miR-100的表达;Transwell实验及划痕实验显示转染miR-100之后,能有效的抑制胰腺癌细胞的侵袭及迁移能力(P<0.05);免疫荧光显示转染miR-100后,F-肌动蛋白(F-actin)减少;Western blot结果显示,转染miR-100后,FZD-8的表达减少,胰腺癌细胞的侵袭转移能力明显降低。结论:上调miR-100后,胰腺癌细胞可能通过下调FZD-8的表达来抑制其侵袭转移的能力,提示miR-100有望成为胰腺癌治疗的潜在靶点。

microRNA-125b对胰腺癌侵袭转移的影响及其机制

目的:探讨miR-125b对胰腺癌细胞(PC)侵袭转移能力的影响及其机制。方法:构建miR-125b过表达载体(miR-125bMIMIC)及空白载体(miR-125bNC)并转染PC细胞系PANC-1细胞作为实验组及阴性对照组,设胰腺正常导管上皮细胞作为BC组;采用划痕实验及Transwell实验检测miR-125b对PC细胞侵袭能力的影响,采用激光共聚焦检测细胞骨架的改变、Westernblot检测上皮-间质细胞转化(EMT)相关蛋白钙黏附蛋白E(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的变化。结果:Transwell实验及细胞划痕实验结果显示,过表达miR-125b能显著抑制PANC-1细胞的侵袭转移能力,差异有统计学意义(P<0.05);激光共聚焦结果显示,过表达miR-125b后,PANC-1细胞骨架形态紊乱,细胞极性消失;Westernblot结果显示,过表达miR-125b后,PANC-1细胞EMT相关蛋白E-cadherin下调、Vimentin上调,细胞侵袭能力增强(P<0.05)。结论:miR-125b能显著抑制PC细胞侵袭转移能力,其机制可能与miR-125b抑制PC细胞EMT转换有关。

艾迪注射液对人肝癌细胞株多药耐药性的逆转作用

目的:探讨艾迪注射液对人肝癌细胞株Bel-7402/5-FU多药耐药性(MDR)的逆转作用及可能机制。方法:采用5-氟尿嘧啶(5-FU)药物浓度梯度递增法建立人肝癌MDR细胞株Bel-7402/5-FU,采用cck-8法检测Bel-7402及Bel-7402/5-FU对5-FU、阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)、甲氨蝶呤(MTX)、环玲酰胺(CTX)及顺铂(CDDP)6种化疗药物的敏感性、并计算半数致死浓度(IC50)及6种化疗药物对Bel-7402/5-FU细胞的IC50及耐药指数(RI),同时观察不同浓度艾迪注射液对Bel-7402/5-FU细胞的抑制率,Western blot法检测经过IC50艾迪注射液处理的Bel-7402/5-FU细胞中多药耐药相关蛋白1(MRP1)、P-糖蛋白(P-gp)、程序化死亡因子5蛋白(PDCD5)的表达水平。结果:6种化疗药物对Bel-7402/5-FU细胞株的IC50较Bel-7402细胞株明显升高,与Bel-7402细胞相比,Bel-7402/5-FU细胞株中MRP1、P-gp表达明显升高,PDCD5表达明显降低(P<0.05);经IC50艾迪注射液处理后的Bel-7402/5-FU细胞中升高的MRP1、P-gp表达和PDCD5降低得到抑制(P<0.05)。结论:艾迪注射液具有逆转肝癌细胞MDR的作用,其机制可能与下调多药耐药相关蛋白MRP1、P-gp表达,上调凋亡相关蛋白PDCD5的表达有关。

CRY2过表达对肝癌细胞增殖及生物钟基因、蛋白表达的影响

目的观察CRY2过表达对肝癌细胞系HepG2增殖及生物钟基因、蛋白表达的影响。方法将HepG2细胞分为实验组和对照组,分别转染CRY2过表达病毒上清液及阴性对照病毒上清液,以未转染的HepG2细胞为空白组,分别于转染24、48、72、96 h后采用CCK-8实验观察细胞增殖能力变化。采用real-time PCR法检测实验组和对照组细胞中的生物钟基因CLOCK、BMAL1、PER1、PER2、PER3、DEC1、DEC2、CRY1、CRY2、NPAS2,采用Western blotting法检测上述生物钟基因蛋白。结果转染48、72、96 h后,实验组细胞增殖能力较对照组和空白组降低(P均<0.05)。实验组细胞中PER1、PER2、PER3、CLOCK、CRY1、CRY2、BMAL1、NPAS2、DEC2 mRNA及蛋白相对表达量均高于对照组,DEC1 mRNA及蛋白相对表达量均低于对照组(P均<0.05)。结论 CRY2过表达可抑制肝癌细胞增殖,同时在mRNA及蛋白水平上调相关生物钟基因表达。CRY2表达上调后可能通过调控生物钟网络从而抑制肝癌细胞的增殖能力。

长链非编码RNA ITGβ2-AS1对胰腺癌细胞增殖和侵袭及迁移能力的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)整合素β2(ITGβ2)-AS1在体外对人胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及其机制。方法:采用癌症基因组图谱(TCGA)公共数据库分析ITGβ2-AS1在胰腺癌组织及癌旁组织中的表达,通过qPCR实验检测ITGβ2-AS1分别在人正常胰腺导管上皮细胞及人PC细胞株AsPC-1、CFPAC-1、PANC-1、MIAPaCa-2、Capan-2、BxPC-3、Hs766T及SW1990细胞中的表达,利用慢病毒载体稳定转染ITGβ2-AS1最高的表达细胞,采用CCK-8和平板克隆实验检测ITGβ2-AS1对PANC-1细胞增殖能力的影响;通过细胞划痕及Transwell实验检测ITGβ2-AS1对PANC-1细胞侵袭及迁移能力的影响,qPCR及Westernblot实验检测干扰ITGβ2-AS1后PANC-1细胞中ITGβ2的基因表达情况。结果:ITGβ2-AS1在胰腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织,且在各胰腺癌细胞株中的表达显著高于人正常胰腺导管上皮细胞,PANC-1中表达最高,差异有统计学意义(P<0.05);干扰ITGβ2-AS1后,PANC-1细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著降低,ITGβ2的表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:LncRNAITGβ2-AS1在胰腺癌中高表达,干扰其表达可抑制胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力和抑制ITGβ2的转录及翻译过程。

长链非编码RNA ITGβ2-AS1对胰腺癌MAPK信号通路的作用及机制

目的:探讨长链非编码RNA整合素β2(ITGβ2)-AS1在胰腺癌(PC)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的作用及机制。方法:选择癌症基因组图谱(TCGA)中胰腺导管腺癌数据库PAAD的mRNA表达谱类型,根据TCGA数据库分析结果,选取与ITGβ2-AS1相关的基因中相关系数较大(Person系数>0.6)的基因进行GO富集分析,筛选出与ITGβ2-AS1的表达显著相关的基因及信号通路;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Westernblot验证人PC细胞株PANC-1中相关mRNA及蛋白的表达。结果:GO分析显示,ITGβ2-AS1与PC的增殖及相关肿瘤信号通路转导密切相关;qRT-PCR及Westernblot结果显示,与正常PANC-1细胞比较,干扰ITGβ2-AS1后,PANC-1细胞中BCL2、MMP9、MYC及磷酸化的ERK1/2的mRNA及蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论:ITGβ2-AS1可能通过正向调控MAPK信号通路上靶基因的表达,促进PC细胞的增殖、侵袭及迁移。

青藤碱对人胰腺癌细胞系PANC-1侵袭转移的影响

目的:体外实验探讨青藤碱对胰腺癌细胞PANC-1侵袭和迁移能力的影响。方法:用高糖培养基DMEM培养胰腺癌PANC-1细胞,取对数期生长的细胞,实验组用0.5、1.0 mmol/L青藤碱处理,运用侵袭和迁移实验研究青藤碱对胰腺癌侵袭转移的影响,采用激光共聚焦实验观察青藤碱对细胞骨架的改变,免疫印迹技术检测青藤碱对胰腺癌细胞PANC-1 E-钙粘着蛋白Nimentin和波形蛋白(E-cadherin)表达水平的改变。结果:实验组PANC-1细胞穿过铺有Matrigel胶小室的细胞数量显著减少,差异有统计学意义(P<0.05);细胞划痕实验表明,青藤碱处理24 h和48 h的胰腺癌细胞迁移速度明显小于对照组(P<0.05);激光共聚焦显示,实验组PANC-1细胞内绿色荧光染色的F-actin与对照组比较显著减少,且荧光强度也较弱(P<0.05);β-微管蛋白(β-tubulin)红色荧光强度明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05);免疫印迹结果显示,实验组Vimentin逐渐减少,E-cadherin逐渐增多,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:一定浓度的青藤碱可抑制体外胰腺癌PANC-1细胞的侵袭和转移能力。

乐伐替尼与瑞格菲尼对肝癌细胞PD-L1的作用及机制

目的:探究乐伐替尼与瑞格菲尼在肝癌细胞中对程序性细胞死亡配体1(PD-L1)作用的分子机制。方法:取人肝癌Hep3B、SMMC-7721细胞,分别转染转化生长因子-β1(TGF-β1)空载体、干扰质粒后的肝癌细胞培养,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF 1α)、髓细胞增生原癌基因(MYC)、缺氧诱导因子-2α(HIF 2α)、信号传导与转录激活因子3(STAT 3)、黏蛋白1-C(MUC 1-C)、细胞周期素依赖蛋白激酶5(CDK 5)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK 14)、表皮生长因子受体(EGFR)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)及TGF-β1的mRNA表达,采用Western blot实验检测各组肝癌细胞中PD-L1和TGF-β1的蛋白表达量;取4周龄雌性裸鼠(BALB/c)小鼠30只,人肝癌Hep3B细胞皮下接种于小鼠右侧腹肋下,1周后将皮下成瘤的小鼠随机均分为对照组(DMSO)、乐伐替尼组(注射乐伐替尼)及瑞格菲尼组(注射瑞格菲尼),于末次给药后24 h处死小鼠,采用Western blot实验检测各组小鼠皮下瘤组织PD-L1和TGF-β1的蛋白表达量。结果:与对照组比较,乐伐替尼组和瑞格菲尼组小鼠皮下肝癌移植瘤组织中HIF 1α、MYC、HIF 2α及MUC 1-C mRNA表达均上调,STAT 3、CDK 5、MAPK14、EGFR及ALK mRNA表达均下调,但乐伐替尼组TGF-β1 mRNA表达增加,瑞格菲尼组TGF-β1 mRNA表达降低(P<0.05);与对照组比较,乐伐替尼组肝癌细胞Hep3B和SMMC-7721的TGF-β1 mRNA、PD-L1和TGF-β1蛋白表达均上升,瑞格菲尼组的TGF-β1 mRNA、PD-L1及TGF-β1蛋白表达均下降(P<0.05);肝癌细胞Hep3B和SMMC-7721干扰组TGF-β1 mRNA、PD-L 1 mRNA、TGF-β1及PD-L1蛋白表达分别较对照组降低(P<0.05)。结论:乐伐替尼使肝癌细胞PD-L 1表达上调,瑞格菲尼使PD-L 1表达下调,其机制可能是通过影响TGF-β1的表达。

加速康复外科应用于胆囊微创手术的临床观察

目的观察加速康复外科(enhanced recovery after surgery,ERAS)应用于腹腔镜下胆囊切除术或腹腔镜联合胆道镜保胆取石术治疗中的有效性及安全性。方法前瞻性观察2016年4月至2017年6月于贵州医科大学附属医院应用加速康复外科围手术期治疗策略进行腹腔镜胆囊切除术或腹腔镜联合胆道镜保胆取石术的563例病人,观察病人术后不同时间点的疼痛评分[采用疼痛视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)]、术后肠道功能恢复时间及手术后并发症发生的情况。结果本研究中563例病人术后不同时间点VAS评分均未超过3分,最高VAS评分为5分;术后平均肠鸣音恢复时间为5.8 h,术后平均首次排气时间为15.2 h;术后平均住院日为2.85 d,并发症发生率为7.46%,无术后30 d再住院及死亡。结论 ERAS针对腹腔镜胆囊微创手术是安全有效的,病人术后疼痛控制良好,是一种有效的围手术期治疗策略。

MMP28在胰腺癌PI3K-Akt信号通路中的作用及机制

目的:探讨基质金属蛋白酶28(MMP28)在胰腺癌(PC)中磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PI3KAkt)信号通路中的作用及机制。方法:利用c Bio Portal网站在线分析TCGA数据库,选取TCGA数据库中与MMP28相关基因中相关系数较大(Person系数> 0. 5)的基因进行GO和KEGG生物信息学分析;选取人PC细胞株PANC-1细胞培养后分为MMP28对照组(NC组)、MMP28下调组(si-MMP28组)和MMP28上调组(UMMP28组),采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)实验检测B淋巴细胞瘤-2 (BCL2)、叉头框转录因子1(FOXO1)及细胞程序性细胞死亡因子4(PDCD4) mRNA表达,采用Western blot实验检测各组PANC-1细胞中Akt和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的蛋白表达情况。结果:生物信息学分析结果表明MMP28和PI3K-Akt信号通路相关,且MMP28与BCL2、FOXO1及PDCD4 mRNA表达呈负相关;与NC组比较,si-MMP28组PANC-1细胞的p-Akt蛋白表达水平上调,U-MMP28组p-Akt蛋白表达水平下降(P <0. 05)。结论:MMP28可能通过抑制BCL2、FOXO1及PDCD4表达来调控PI3K-Akt信号通路,从而促进PC的发生发展。

SYT1对肝癌细胞侵袭、转移的影响及其分子机制

目的:研究突触囊泡蛋白Ⅰ(SYT1)对肝癌侵袭转移的影响及其机制。方法:选择人肝癌细胞(Hep3B、Huh7、HCCLM3、SMMC-7721、HLF和BEL-7404)和人正常肝细胞HL-7702作为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应实验(q PCR)检测SYT1在这些细胞中的表达;选取150例原发性肝癌组织及其对应癌旁组织作为研究对象,通过免疫组化实验分析SYT1在这两种组织中的表达;选择肝癌细胞Hep3B、Huh7作为观察对象,根据转染的载体不同分别将其分为对照组(转染表达空载体)、干扰组(转染干扰质粒)和过表达组(转染过表达质粒),通过Transwell迁移实验和OrisTM细胞迁移实验检测SYT1对肝癌细胞迁移能力的影响,通过Transwell侵袭实验检测SYT1对肝癌细胞侵袭能力的影响,采用Western blot实验检测上皮-间充质细胞转化(EMT)相关蛋白钙黏附蛋白E(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:SYT1的m RNA和蛋白在肝癌组织中的表达高于对应的癌旁组织(P<0.05);从基因水平检测SYT1的表达,SYT1在肝癌细胞中的表达高于正常肝细胞,Huh7和Hep3B细胞中SYT1的表达高于其他肝癌细胞(P<0.05);与对照组比较,干扰组的肝癌细胞迁移、侵袭能力降低,过表达组的肝癌细胞迁移、侵袭能力增强(P<0.05);与对照组比较,干扰组的肝癌细胞E-cadherin蛋白表达增多,Vimentin蛋白表达量减少(P<0.05)。结论:干扰SYT1的表达能抑制肝癌细胞EMT过程,进而抑制其侵袭、迁移能力。

乐伐替尼诱导肝癌耐药细胞株的构建及其生物学特性探析

目的:构建乐伐替尼诱导的原发性肝细胞癌(HCC)SMMC-7721耐药细胞株,并探讨其生物学特性。方法:选取HCC细胞株SMMC-7721进行培养传代,采用药物逐步递增法建立体外乐伐替尼诱导的SMMC-7721耐药细胞株(耐药组),以未经处理的肝癌细胞为对照组;采用CCK-8法检测乐伐替尼、阿霉素、氟尿嘧啶和顺铂对两组细胞的半数抑制浓度(IC50),并计算乐伐替尼耐药指数(RI);采用Real time-PCR检测两组细胞耐药基因MDR1、LRP、MRP2、GST-pi、TopoⅡɑ和BCRP的表达,采用Western blot检测两组细胞P-gp、LRP、MRP2、GST-pi、TopoⅡɑ和BCRP蛋白的表达。结果:乐伐替尼对对照组和耐药组SMMC-7721细胞IC50分别为(0.15±0.03)μmol/L和(4.34±0.12)μmol/L,RI为28;阿霉素、氟尿嘧啶和顺铂对耐药组SMMC-7721细胞的IC50较对照组降低(P<0.05);耐药组SMMC-7721细胞中MDR1、LRP、MRP2、GST-pi、TopoⅡɑ及BCRP耐药基因的相对表达量均较对照组下降(P<0.05或P<0.01),耐药组SMMC-7721细胞中P-gp、LRP、MRP2、GST-pi、TopoⅡɑ及BCRP蛋白表达均较对照组降低(P<0.05)。结论:实验成功诱导获得耐乐伐替尼的体外肝癌SMMC-7721细胞株,该细胞株对阿霉素、氟尿嘧啶和顺铂的敏感性增高,其体制可能与耐药基因MDR1、LRP、MRP2、GST-pi、TopoⅡɑ及BCRP表达降低有关。

MMP28在胰腺癌中的表达和对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的:分析基质金属蛋白酶28(MMP28)对PANC-1细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法:通过GEPIA网站分析MMP28在PC组织和对照组织中的表达及其对PC患者无病生存期和总生存期的影响,实时荧光定量聚合酶链反应实验(qPCR)检测MMP28分别在人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)及其他PC细胞中的表达情况;PANC-1细胞培养后转染分为MMP28对照组(NC组)、MMP28下调组(D-MMP28组)和MMP28上调组(U-MMP28组),通过qPCR和Western blot实验验证,细胞增殖实验(CCK8)和平板克隆实验检测MMP28对PANC-1细胞增殖能力的影响,细胞划痕及Transwell实验检测MMP28对PANC-1细胞侵袭及迁移能力的影响。结果:MMP28在PC组织中的表达高于对照组织且对胰腺癌患者的无病生存期和总生存期有影响,在PC细胞株中的表达高于人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE),差异有统计学意义(P <0. 05);与NC组PANC-1细胞比较,D-MMP28组PANC-1细胞增殖、迁移及侵袭能力降低,而U-MMP28组升高,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论:MMP28在PC中高表达并对预后有影响,且促进PANC-1细胞的增殖、侵袭及迁移能力。

肝癌ceRNA调控网络的分析研究

目的:通过对TCGA数据库中肝癌和癌旁组织lnc RNA、mi RNA和m RNA进行差异表达分析,研究lnc RNA、mi RNA和m RNA对肝癌发生发展的影响。方法:用得到差异表达的lnc RNA、mi RNA和m RNA构建肝癌ce RNA调控网,明确肝癌中lnc RNA、mi RNA和m RNA之间相互作用的关系及其对肝癌发生发展的影响;为了进一步明确ce RNA调控网对肝癌疾病的作用,对ce RNA调控网中的m RNA进行GO注释分析、KEGG通路分析和蛋白互作分析。结果:发现调控网中的m RNA在肿瘤Mi RNAs、细胞周期、膀胱癌、黑色素瘤、小细胞肺癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌、P53信号通路、PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路等18个KEGG信号通路中明显富集(校正后的P<0.01),通过对肝癌ce RNA调控网中的lnc RNA、mi RNA和m RNA进行Kaplan-Meier曲线分析,筛选与肝癌预后有明显相关性的lnc RNA、mi RNA和m RNA。结论:lnc RNA LOC107985899影响mi RNA-137的表达,从而调控m RNA MITF的表达;lnc RNA C2orf48、C10orf91、LINC00114影响mi RNA-204的表达,从而调控m RNA ITPR1、BCL2、AP1S2、TGFBR2、SLC43A1、PRLR、ZCCHC24、ANGPTL2、CHRDL1的表达;lnc RNA LOC107985899影响mi RNA-222的表达,从而调控m RNA ESR1、TIMP3、ZEB2、GALNT3的表达。

LincRNA00858靶向miR-3126-5p影响肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)Linc00858通过调控靶向小分子RNA-3126-5p(miR-3126-5p)影响肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测Linc00858在肝癌组织、癌旁正常组织、人正常肝细胞LO2和人肝癌细胞系中的表达情况及两者相对关系。筛选出人肝癌细胞HUH-7和MHCC-97H作为研究对象,分别转染Linc00858过表达和干扰Linc00858表达的重组慢病毒,使用q RT-PCR测定转染效果,通过CCK-8实验、Transwell实验检测肿瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力,Western blot实验检测Linc00858对上皮-间质转化和细胞周期相关的蛋白表达水平的影响;生物信息学预测和双荧光素酶报告实验确定两者的结合关系。调整Linc00858的表达水平后,采用qRT-PCR法检测肝癌细胞中miR-3126-5p表达水平的变化,将miR-3126-5p mimics和miR-3126-5p inhibitor分别进行转染,通过上述方法再次检测肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力及相关蛋白表达情况。结果Linc00858在肝癌组织和细胞中的表达量高于癌旁正常组织和LO2;过表达Linc00858后HUH-7细胞增殖、迁移及侵袭能力明显上升,细胞周期蛋白E1(cyclin E1)、周期素依赖性激酶2(CDK2)和波形蛋白(Vimentin)的表达明显上升,P27和钙粘附蛋白E(E-cadherin)的表达明显下降;沉默Linc00858可以抑制MCHH-97H细胞增殖、迁移及侵袭能力,cyclin E1、CDK2和Vimentin的表达明显下降,P27和E-cadherin的表达明显上升;Linc00858靶向调控miR-3126-5p的表达,miR-3126-5p mimics能明显逆转过表达Linc00858对HUH-7细胞的增殖、迁移及侵袭能力以及相关蛋白表达水平;miR-3126-5p inhibitor可以逆转沉默Linc00858对MHCC-97H细胞的增殖、迁移及侵袭能力以及相关蛋白表达水平。结论Linc00858通过负向调控miR-3126-5p来促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

敲低LEF1-AS1对胰腺癌细胞的影响

目的:探究淋巴增强因子1反义RNA1(LEF1-AS1)对胰腺癌(PC)细胞的影响及机制。方法:使用Gene Expression Profiling Interactive Analysis(GEPIA)网站分析来源于癌症基因组图谱(TCGA)数据库中PC组织和正常胰腺组织LEF1-AS1的表达;取对数生长期的正常人胰管上皮细胞株HPDE和PC细胞株Panc-1、Bxpc-3、As PC-1、Capan-1、CFPAC-1及MIA Pa Ca-2,采用q PCR检测LEF1-AS1在各细胞中的表达;选取q PCR检测后LEF1-AS1表达较高的PC细胞株Panc-1和MIA Pa Ca-2,用si LEF1-AS1与si Control分别转染后分为下调组和对照组,分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、平板克隆实验、划痕实验和Transwell实验检测敲低LEF1-AS1对各组PC细胞增殖、细胞侵袭及迁移能力的影响,采用Western blot实验检测敲低LEF1-AS1对各组PC细胞中B细胞白血病淋巴瘤2(Bcl-2)、B细胞白血病淋巴瘤相关蛋白(Bax)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达的影响。结果:PC组织中LEF1-AS1的表达高于正常组织(P<0.05),Panc-1、Bxpc-3、As PC-1、Capan-1、CFPAC-1及MIA Pa Ca-2细胞中LEF1-AS1表达水平较HPDE细胞上调(P<0.05);下调组Panc-1和MIA Pa Ca-2细胞24 h、48 h和72 h时OD值均较对照组下降,下调组细胞集落形成数较对照组降低(P<0.05);下调组Panc-1和MIA PaCa-2细胞迁移和侵袭能力较对照组细胞降低(P<0.05);敲低LEF1-AS1表达后,下调组Panc-1和MIA Pa Ca-2细胞Bcl-2和Vimentin蛋白的表达量均较与对照组下降,Bax和E-cadherin蛋白的表达量均较与对照组升高(P<0.05)。结论:敲低LEF1-AS1表达后抑制PC细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与促进PC细胞的凋亡和抑制上皮细胞-间充质转化进程有关。