不同产地滇黄精高效液相色谱法指纹图谱的建立及其多糖含量测定

目的探讨不同产地滇黄精高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱的建立及其多糖含量的测定。方法取贵州(剑河、安顺、天柱、铜仁、赤水、贵阳及纳雍)、广西百色及四川内江来源的9个批次滇黄精药材各1 g制备供试品溶液,采用DiKMA Platisll ODS C_(18)色谱柱(流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液、梯度洗脱,流速1 mL/min,柱温35℃,进样量20μL,检测波长203 nm)建立滇黄精HPLC指纹图谱,并采用相似度评价、主成分分析及聚类分析等方法评价不同产地滇黄精的质量;采用蒽酮-硫酸法测定各批次滇黄精的多糖含量。结果建立了9批滇黄精的HPLC指纹图谱,共确认12个共有峰;9批不同产地的滇黄精多糖含量均大于7%,含量顺序为贵州剑河>贵州安顺>贵州天柱>贵州铜仁>贵州赤水>贵州贵阳>贵州纳雍>广西百色>四川内江;相似度结果显示,四川内江、贵州贵阳及广西百色的相似度分别为0.762、0.809及0.846,贵州其余地区滇黄精的相似度≥0.853;主成分分析结果显示共得到3个主成分因子,聚类分析结果表明滇黄精被分为3类,且滇黄精多糖含量≥7.16%。结论本研究建立的滇黄精HPLC指纹图谱及黄精多糖成分含量的测定方法简便可行,准确可靠。

RAAS与心肌重塑及药物干预进展

近年来，心力衰竭（heart failure,HF）的发生率及致死率呈逐年上升趋势。HF是绝大多数心血管系统疾病的共同终末阶段，而心肌重塑（myocardial remodeling,MR）是其关键病理因素。MR是为了维持正常输出，心脏在应对压力负荷时的一种适应性反应，其主要病理表现为心肌肥厚、纤维化及电传导信号异常等，最终导致心衰发生。

艳山姜挥发油对四氧嘧啶诱导的胰岛细胞损伤保护作用及机制

目的探讨艳山姜挥发油(EOFAZ)对四氧嘧啶诱导大鼠胰岛细胞(NIT-1)损伤的保护作用及机制。方法体外培养NIT-1细胞至对数生长期,测定不同浓度四氧嘧啶(0、1、4、10、20、40、60、80及100 mmol/L)下细胞存活率,取存活率较高的浓度进行后续实验;细胞分为对照组、模型组、EOFAZ低、中、高剂量组(分别为50、100及200μg/L),采用MTT法检测各组细胞存活率,生化法检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量,ELISA法检测乳酸脱氢酶(LDH)含量和胰岛素分泌量,Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)以及半胱氨酸-天冬氨酸特异性蛋白酶9(Caspase-9)蛋白的表达;机制研究进一步设置EOFAZ组(200μg/L)、Z-VAD-FMK组(10μmol/L)以及EOFAZ+Z-VAD-FMK组(200μg/L EOFAZ+10μmol/L Z-VAD-FMK),采用Western blot法检测Caspase-9蛋白的表达。结果选择40 mmol/L四氧嘧啶(存活率70.7%)作为诱导细胞最佳损伤浓度,并复制NIT-1细胞损伤模型;与对照组比较,模型组细胞存活率降低、MDA和LDH释放量增加、SOD、GSH-PX释放和胰岛素分泌量减少、Bcl-2蛋白表达下调、Bax和Caspase-9蛋白表达上调(P<0.05);与模型组比较,EOFAZ各剂量组细胞存活率升高、胰岛素分泌增加(P<0.05),EOFAZ中、高剂量组MDA和LDH释放降低、SOD和GSH-PX释放量增加、Bcl-2蛋白表达上调、Bax和Caspase-9蛋白表达下调、Bax/Bcl-2降低(P<0.05);与EOFAZ组、Z-VAD-FMK组比较,EOFAZ+Z-VAD-FMK组Caspase 9蛋白表达均下调(P<0.05)。结论EOFAZ可改善四氧嘧啶诱导的NIT-1胰岛细胞损伤,其机制与抑制细胞凋亡有关。

EOFAZ抑制TNF-α诱导的血管新生和炎症损伤

目的研究艳山姜挥发油(essential oil of Fructus Alpiniae zerumbet,EOFAZ)对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)诱导内皮细胞血管新生及炎性损伤的作用,以及作用机制。方法分别建立TNF-α诱导的体外内皮细胞血管新生及体内小鼠胸主动脉炎性损伤模型。采用体外血管新生小管成环实验,分析TNF-α诱导HUVECs的血管新生;Western blot和qRT-PCR实验法分别检测HUVECs中VEGFR-2蛋白和mRNA的表达;ELISA法检测小鼠血清中VEGFR-2的分泌水平;采用HE染色分析小鼠胸主动脉炎性损伤。结果 EOFAZ和ERK抑制剂U0126明显抑制TNF-α诱导的HUVECs血管新生小管成环数量(P<0.01);EOFAZ能够下调TNF-α诱导小鼠血清中VEGFR-2的分泌(P<0.01);EOFAZ和U0126对TNF-α诱导的HUVECs中VEGFR-2的蛋白和mRNA表达有抑制作用(P<0.01);EOFAZ能够抑制TNF-α诱导小鼠胸主动脉炎性细胞的浸润。结论 EOFAZ能抑制TNF-α诱导血管新生和炎性损伤,其机制与通过ERK信号通路下调VEGFR-2的表达有关。

大鼠口服艳山姜挥发油后的入血成分分析

目的:检测艳山姜挥发油(EOFAZ)进入大鼠血浆的成分。方法:采用GC-MS技术和血清药物化学研究方法,分析大鼠经EOFAZ灌胃1h后的入血成分。结果:建立了大鼠给药后血浆样品的分析测定方法,并与空白血浆样品及EOFAZ对比,检测并鉴定出37个入血成分,且均为挥发油原型成分,主要活性成分β-蒎烯、α-蒎烯、莰烯、1,8-桉叶油醇在EOFAZ及大鼠血浆中所占百分含量均较高。结论:艳山姜活性部位37种挥发油进入大鼠血浆,为艳山姜作用的药效基础。

红景天苷下调BMP2/Smad1信号抑制血管平滑肌细胞表型转化的作用

基于BMP2/Smad1信号研究红景天苷(SAL)对高糖诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的作用.实验以不同剂量SAL预孵育2 h后,给予高糖(HG,24.5 mmol·L-1)共孵育VSMCs细胞,采用Giemsa染色观察VSMCs形态学变化,采用划痕修复实验检测细胞的迁移能力,qRT-PCR检测胶原Ⅰ(collagenⅠ)的mRNA水平,Western blot法检测骨形态发生蛋白2(BMP2)、磷酸化Smad1(p-Smad1)、骨桥蛋白(OPN)、平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)和平滑肌22 alpha(SM22α)蛋白表达.研究结果表明,高糖诱导细胞迁移能力增强,增加collagenⅠ的mRNA水平,同时下调收缩表型标志物α-SMA和SM22α蛋白水平,上调成骨表型标志物OPN、BMP2及p-Smad1的蛋白水平;低、高剂量的SAL预处理后,可明显降低高糖诱导VSMCs的细胞迁移能力,降低细胞内collagenⅠ的mRNA水平,上调α-SMA及SM22α的蛋白表达,下调BMP2、p-Smad1和OPN蛋白表达.研究结果表明,SAL抑制高糖诱导的平滑肌细胞表型转化,其作用可能与下调BMP2/Smad1信号有关.

住院患儿血标本中病原菌的分布特点及耐药性分析

目的:分析住院血培养阳性患儿分离病原菌的分布特点及耐药性。方法:收集0~14岁住院患儿血培养阳性标本442例,置于BACTECTMFX全自动血液细菌培养仪中培养,取少量培养物转种血平板和巧克力平板分离病原菌,使用Walk Away 96型全自动细菌鉴定仪对分离病原菌进行细菌鉴定,采用微量稀释法测定分离病原菌对抗生素的敏感性,采用WHONET5. 6软件对病原菌的抗生素敏感实验进行分析。结果:住院血培养阳性患儿血培养主要病原菌依次为凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)、大肠埃希菌、克雷伯菌属、金黄色葡萄球菌、其他肠杆菌属;新生儿和婴儿以CNS和大肠埃希菌为主,幼儿以CNS和其他肠杆菌属为主,学龄前期儿童以CNS和金黄色葡萄球菌为主,学龄期儿童以CNS、大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌为主;大肠埃希菌和肺炎克雷伯对亚胺培南、美洛培南及厄他培南的敏感率均为100%,且对其他抗生素均有不同程度耐药;非发酵菌对各类抗生素均存在耐药菌株,未检出对利奈唑胺和万古霉素耐药的葡萄球菌和肠球菌属,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCNS)的检出率分别为34. 7%和77. 6%。结论:不同年龄段血培养阳性儿童致病菌分布有所不同,病原菌耐药情况较严重,可选择的抗生素有限。

氧化苦参碱对醛固酮诱导大鼠心肌纤维化的作用及机制

目的探讨氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导大鼠心肌纤维化(MF)的作用及其机制。方法40只健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机均分为对照组、模型组、25 mg/kg OMT(低剂量)组及50 mg/kg OMT(高剂量)组,对照组大鼠予等容积生理盐水皮下注射、自由饮水,其余各组大鼠采用ALD皮下注射联合高钠盐饮水复制大鼠MF模型,持续4周,处死各组大鼠,取左心室;制作心肌组织切片,采用天狼星红染色观察各组大鼠心肌组织的胶原特点;采用碱水解法检测各组大鼠心肌羟脯胺酸(HYP)含量,采用Western blot法检测各组大鼠心肌成纤维细胞转分化(FMT)指标[Ⅰ型胶原(ColⅠ)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、MMP2、基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2)及TIMP1]水平和Notch-1信号蛋白(Jagged-1、Notch-1、DLL-4及Hes-1)表达。结果与对照组比较,模型组大鼠心肌组织见大量胶原纤维沉积、残留心肌数目少、心肌组织排列紊乱,心肌HYP含量升高(P<0.05),心肌组织中ColⅠ、MMP9、MMP2、TIMP2及TIMP1水平升高(P<0.05),Jagged-1、Notch-1、DLL-4及Hes-1蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,OMT低、高剂量组大鼠心肌组织胶原减少及MMP2、TIMP2、TIMP1水平降低(P<0.05),OMT低剂量组大鼠心肌组织HYP含量、ColⅠ、MMP9水平及Jagged-1、Notch-1、DLL-4蛋白表达降低(P<0.05)。结论OMT可缓解ALD诱导的大鼠MF过程,其机制可能与下调Nothc-1信号相关蛋白的表达有关。

艳山姜挥发油对小鼠高尿酸血症的保护作用

目的研究艳山姜挥发油对小鼠高尿酸血症的治疗保护作用。方法采用水蒸气蒸馏法提取艳山姜挥发油;取50只健康昆明雄性小鼠均分为空白对照组、阳性对照组(别嘌呤醇,35 mg/kg)、模型组(氧嗪酸钾,250 mg/kg)和艳山姜挥发油高、低剂量组(按生药量计为160、100 mg/kg),每组10只;每日给予后4组小鼠腹腔注射氧嗪酸钾(250 mg/kg),空白组腹腔注射生理盐水;1 h后,空白对照组和模型组小鼠灌胃生理盐水,另3组按剂量灌胃相应药物,每日1次,连续7 d;之后各组小鼠眼球后静脉丛取血,试剂盒测定血清尿酸、肌酐,肾组织HE染色观察。结果与空白组相比,模型组小鼠血清尿酸水平显著升高(P<0.01),提示氧嗪酸钾造模成功;与模型组相比,艳山姜挥发油高、低剂量组可以显著改善氧嗪酸钾盐诱导的高尿酸小鼠血清尿酸、肌酐指标的异常变化(P<0.05),且小鼠肾组织病变有不同程度减轻(P<0.05)。结论艳山姜挥发油能够显著降低高尿酸血症模型小鼠血清中尿酸、肌酐水平,以及对肾损伤具有一定保护作用。

心脉通胶囊对麻醉Beagle犬血流动力学的影响

目的:探讨心脉通胶囊(XMT)对麻醉Beagle犬部分血流动力学指标的影响。方法:30只Beagle犬随机分为5组,XMT低剂量(0.2 g/kg)、中剂量组(0.4 g/kg)、高剂量组(0.8 g/kg),以山绿茶降压胶囊(0.16 g/kg)为阳性对照组,以生理盐水组为阴性对照;各组动物手术分离十二指肠给药,比较给药前、给药30、45、60、90、120、150及180 min时Beagle犬的收缩压(SAP)、平均动脉压(MAP)、舒张压(DAP)、心率(HR)、左室内压(LVSP)、左室作功指数(LVWI)、总耗氧指数(TTI)及总外周血管阻力(TPVR)。结果:与生理盐水组相比,XMT高、中剂量组部分时间点SAP、MAP、LVSP、TPVR显著降低(P<0.05,或P<0.01),部分时间点LVWI、TTI水平显著减少(P<0.05);高剂量组部分时间点DAP显著降低(P<0.05);但各组Beagle犬的HR比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:XMT对麻醉Beagle犬降低血压的同时,并不减少心脏供血,其机制可能与减少后负荷,扩张外周血管有关。

OMT抑制钙调神经磷酸酶改善醛固酮诱导的心肌成纤维细胞增殖

目的:观察氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖分化模型的干预作用,探讨其对钙调神经磷酸酶(Ca N)表达的影响。方法:采用胰酶消化法、差速贴壁法获得体外培养1～3 d新生SD乳鼠CFs,建立ALD诱导CFs增殖模型,采用波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学法鉴定CFs;将鉴定并传代的2～3代CFs分为对照组(等量蒸馏水)、ALD组(1×10^(-7)mol/L)、OMT组(1×10^(-7)mol/L ALD及7. 56×10-4mol/L OMT)及Ca N I组[1×10^(-7)mol/L ALD及Ca N抑制剂环孢素A(Cs A1)],作用24 h;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定Ca N mRNA水平,Western blot法测定Ca N蛋白表达水平。结果:Vimentin鉴定分离培养的细胞结果阳性,提示分离细胞为CFs; ALD诱导24 h时,与对照组比较,ALD组Ca N mRNA及Ca N蛋白的表达水平升高(P <0. 01);与ALD组比较,OMT组Ca N mRNA及Ca N蛋白的表达水平降低(P <0. 01)。结论:OMT能够抑制ALD诱导的CFs增殖,其机制可能与抑制Ca N基因表达有关。

基于ZAc热点区域的BRD4 Bromodomain抑制剂设计与活性研究

Bromodomain是一种表观遗传读取器,在识别乙酰化组蛋白方面发挥关键功能而越来越受到关注。Bromodomain结构域的蛋白质与多种疾病的发展有关,靶向Bromodomain结构域已成为开发蛋白质-蛋白质相互作用抑制剂的重要策略。本研究在BRD4的乙酰赖氨酸结合位点中发现了ZA通道上的新热点。为探究该热点的重要性,对基于结构的3,5-二甲基异恶唑基BRD4抑制剂(4)进行了药物设计,并围绕ZA通道热点合成了一系列具有结构修饰的衍生物。结构优化产生了具有纳摩尔蛋白和细胞效力的有前途的衍生物21。研究表明,ZA通道热点可能在BRD4抑制剂的活性和选择性中起重要作用。

呋喃-2-羧酸(5-氯吡啶-3-基)酯类衍生物的设计、合成及3CL^(pro)蛋白酶抑制活性研究

目的 设计合成一系列呋喃-2-羧酸(5-氯吡啶-3-基)酯类新型冠状病毒3CL蛋白酶(SARS-CoV-2 3CL^(pro))抑制剂,并进行体外抗病毒活性以及细胞安全性评价。方法 以苯并[b]噻吩-2-羧酸(5-氯吡啶-3-基)酯(6)为先导化合物,对其苯并噻吩环进行结构改造。以苯并呋喃-2-甲酸或呋喃-2-甲酸衍生物与5-氯吡啶-3-醇为起始原料,经亲核取代、水解、缩合等反应合成15个目标化合物。采用FRET方法评估目标化合物对SARS-CoV-2 3CL^(pro)的抑制活性,采用MTT法初步评价目标化合物对人宫颈癌细胞(HeLa)以及人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的安全性。结果 合成了15个新型SARS-CoV-2 3CL^(pro)抑制剂,其结构均经~1H-NMR、^(13)C-NMR和HR-ESI-MS确证;其中,化合物9、11~13、19和20具有良好的3CL^(pro)蛋白酶抑制活性,除化合物15和16对HUVEC细胞显示出一定的细胞毒性,其他化合物对正常细胞均具有较好的安全性。结论 化合物9和20具有显著的抑制SARS-CoV-2 3CL^(pro)活性作用,其IC_(50)值分别为14.85 nmol·L^(-1)和23.24 nmol·L^(-1),优于奈玛特韦(IC_(50)=49.44 nmol·L^(-1)),且具有较好的细胞安全性,值得进一步深入研究。

基于蛋白质组学分析色胺酮抑制小鼠乳腺癌的作用机制

目的:采用非标记定量(Label-free)蛋白质组学技术研究色胺酮抗小鼠体内乳腺癌的作用机制。方法:采用超高效液相色谱-质谱联用技术检测色胺酮抗小鼠乳腺癌的表达蛋白,选择Ionoptics nano UPLC C18色谱柱(0.075 mm×250 mm,1.6μm),流动相0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液梯度洗脱,正离子模式,扫描范围m/z 100~1 700,使用MaxQuant 1.6.5.0进行数据库检索。采用Label-free高分辨质谱的蛋白质组学技术筛选4T1乳腺癌小鼠模型组与色胺酮(100 mg·kg-1)口服给药组之间的差异表达蛋白,进行色胺酮抗乳腺癌的蛋白质组学研究。结果:共鉴定出3 997个蛋白质,其中有2 911个蛋白可定量。模型组与色胺酮组共750个差异表达蛋白,其中286个蛋白上调,464个蛋白下调。基因本体分析表明,这些差异表达蛋白主要参与增殖、细胞迁移、凋亡、免疫、血管生成和炎症调节等生物学过程。京都基因与基因组百科全书通路分析进一步表明,这些蛋白主要集中于T细胞受体,B细胞受体,Toll样受体,核转录因子-κB(NF-κB),Ras蛋白,白细胞介素-17,肿瘤坏死因子,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等信号通路。结论:与色胺酮抗4T1乳腺癌作用密切相关的差异表达蛋白包括上调蛋白白细胞分化抗原14(CD14),前列腺素G/H合酶2(PTGS2),泛素蛋白连接酶E3和下调蛋白CD44,70 kDa热休克蛋白1A(HSPA1A),巨噬细胞移动抑制因子(MIF),NF-κB,核糖体蛋白S6激酶α-4(RPS6KA4)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1),提示色胺酮主要通过调节肿瘤炎症微环境来达到抑制小鼠乳腺癌的作用。

丹参素钠-PLGA缓释微球的制备及药剂学性能评价

目的:优选丹参素钠-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)缓释微球的处方工艺并考察其药剂学性能。方法:采用W/O/O型乳化溶剂挥发法制备丹参素钠-PLGA微球,以载药量、包封率及收率为考察指标,通过单因素试验优选处方工艺,并考察其体外释药性能。采用激光粒度分析仪、扫描电子显微镜和X射线衍射法对该微球进行表征。结果:选取内水相体积300μL,PLGA质量浓度125 g·L^(-1),二氯甲烷-丙酮(3∶7),外油相为液体石蜡200 m L,加入正己烷6 m L,0.25%司盘80为乳化剂,1 400 r·min^(-1)搅拌4 h。丹参素钠-PLGA微球平均载药量(20.71±1.42)%,平均包封率(63.27±1.70)%,平均收率(99.10±0.83)%,体外累积释放率达98%需要120 h。平均粒径(71.72±1.71)μm,表面圆整光滑,内部含有蜂窝状孔洞。部分药物可能以晶体状态分散于载体材料中。结论:W/O/O型乳化溶剂挥发法成功制备了丹参素钠-PLGA微球,优选的处方工艺稳定合理,可为丹参素钠制剂的开发提供参考。