阿德福韦衍生物灌胃给药后的代谢产物阿德福韦在大鼠体内的药动学研究

目的:建立阿德福韦(PMEA)的含量测定方法,并研究阿德福韦衍生物[阿德福韦前药,阿德福韦-熊去氧胆酸-3-丙基酯,L-亮氨酸-3-丙基酯(PMEA-1c)]灌胃给药后的代谢产物PMEA在大鼠体内的药动学。方法:采用高效液相色谱-串联质谱(HPLCMS/MS)法。色谱柱为BEH C_(18),流动相为0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水(梯度洗脱),流速为0.25 mL/min,柱温为30℃,进样量为1μL;检测离子对为PMEA质荷比(m/z)274.1→162.1,葛根素(内标)m/z 417.1→267.1。12只大鼠随机分为阿德福韦酯(ADV)组(阳性对照,90 mg/kg)、PMEA-1c组(160 mg/kg),每组6只,分别灌胃给予相应药物1次,于给药后0.083、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、10、12、24 h尾静脉取血测定PMEA血药浓度;利用DAS 2.0软件计算相关药动学参数。结果:PMEA检测质量浓度线性范围为6.1～440.0 ng/mL(r=0.998 5),日内、日间精密度和稳定性试验的RSD均<10%(n=3、5、6),准确度为82.16%～97.33%(RSD≤6.4%,n=5),基质效应为95.96%～106.35%(RSD≤4.9%,n=5);ADV组和PMEA-1c组大鼠血浆中PMEA的t_(1/2)分别为(1.762±0.117)、(2.548±0.174)h,AUC_(0-24) h分别为(2 170.059±146.091)、(4 704.257±176.792)μg·h/L,c_(max)分别为(613.092±9.504)、(697.295±15.275)μg/L;与ADV组比较,PMEA-1c组大鼠t_(1/2)、AUC_(0-24 h)、AUC_(0-∞)、c_(max)均显著增加(P<0.01或P<0.001)。结论:建立的方法准确可靠,本实验结果表明PMEA-1c代谢为单室模型,其可作为阿德福韦前药的潜力药物,为阿德福韦前药的继续研究奠定了基础。

苗药头花蓼含药血清对巨噬细胞释放炎症因子的影响

目的:探讨苗药头花蓼对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)释放炎症因子的影响。方法:制备苗药头花蓼水提醇沉提取物的含药血清(PCWEPS),采用10μg/L脂多糖(LPS)建立RAW264.7细胞炎症损伤模型,Griess试剂法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的表达,实时荧光定量PCR法(Real Time-PCR)检测TNF-α及IL-6 mRNA的表达水平,Western blot法检测NF-κB通路中I-κBα蛋白和p-I-κBα蛋白表达水平。结果:与模型组比较,3种给药剂量的PCWEPS均显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO,TNF-α和IL-6(P<0.001);PCWEPS能够显著降低TNF-α和IL-6 mRNA的表达水平(P<0.001),下调p-I-κBα蛋白的表达(P<0.001),降低NF-κB通路中I-κBα蛋白的磷酸化。结论:头花蓼抑制巨噬细胞中炎症因子释放,可能与抑制NF-κB通路中I-κBα的磷酸化有关。

醒脾养儿颗粒化学成分鉴定

目的 运用UHPLC-QE-Orbitrap-HRMS法鉴定醒脾养儿颗粒化学成分。方法 分析采用Hypersil GOLD C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.9μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.2 mL/min;柱温30℃;进样量2μL;热电喷雾离子源(HESI);正负离子模式下分别进行一级、二级高分辨质谱数据采集,并根据对照品、数据库及文献报道进行鉴定。结果 共鉴定出95个化合物,包括32个有机酸类、31个黄酮类、5个香豆素类、2个生物碱类、3个醛类、4个氨基酸类、7个核苷类和11个其他类。结论 UHPLC-QE-Orbitrap-HRMS法能快速、准确地鉴定醒脾养儿颗粒化学成分,可为该制剂进一步的药效物质基础和质量控制研究提供依据。

超高效液相色谱法检测6种探针底物代谢产物并评价人细胞色素P450同工酶活性

目的：建立同时测定非那西丁（CYP1A2）、氯唑沙宗（CYP2E1）、甲苯磺丁脲（CYP2C9）、奥美拉唑（CYP2C19）、睾酮和咪达唑仑（CYP3A4）6种探针底物代谢产物的Cocktail体外方法,评价药物对人肝微粒体CYP450同工酶活性的影响。方法：人肝微粒体与6种探针底物在还原系统NADPH的作用下,37℃共同孵育;以蛋白沉淀法处理样品,采用超高效液相色谱系统（UPLC-MS/MS）,建立Cocktail混合探针,对药物的6种代谢物进行定量分析,并分析药物对人肝微粒体CYP450同工酶活性的影响。结果：6种探针底物物代谢产物乙酰氨基酚（0.26~8.35μmol/L）、6-羟基氯唑沙宗（3.02~96.63μmol/L）、5-羟基奥美拉唑（0.10~3.09μmol/L）、羟基甲苯磺丁脲（0.15~4.88μmol/L）、6β-羟基睾酮（3.67~117.37μmol/L）和α-羟基咪达唑仑（1.64~52.37μmol/L）线性关系良好,各成分相关系数（R2）〉0.996,准确度为95.96%~103.10%,日内和日间精密度RSD（%）〈15%,提取回收率、基质效应RSD（%）〈11%,稳定性好。结论：UPLC-MS/MS准确、灵敏度高,可作为研究受试药物对CYP450酶影响及相关研究的分析测定方法。

气相色谱法测定参芎葡萄糖注射液中甘油含量

目的：建立参芎葡萄糖注射液中甘油含量方法的测定。方法：采用气相色谱法对参芎葡萄糖注射液中甘油的含量测定进行测定，色谱柱为AT-624毛细管柱、初始140℃保持13．5min、120℃／min升至255℃、保持5min；分流进样，分流比5．0，进样口温度250℃，进样量1μL，FID检测器温度300℃，柱流量6．0mL／min，载气高纯氮气。结果：成功建立了气相色谱法测定参芎葡萄糖注射液中甘油的方法，所测甘油浓度在1-10g/L内线性关系良好，平均回收率为102．5％，RSD为2．0％；精密度试验RSD为0．9％，重复性试验RSD为2．4％，稳定性试验RSD为4．2％。结论：气相色谱测定参芎葡萄糖注射液中甘油含量的方法，操作简便、准确可靠。

阿德福韦单L-氨基酸酯及单胆酸酯衍生物的合成、抗病毒活性及原代肝细胞摄取研究

以阿德福韦为原料,设计并合成了6个新型结构的阿德福韦单L-氨基酸酯、单胆酸酯衍生物1a^1f,通过ESIMS、HRMS、1H NMR和13C NMR确证结构。采用Hep G2.2.15细胞和大鼠原代肝细胞考察了化合物1a^1f的抗HBV活性和肝细胞摄取情况。结果表明,阿德福韦膦酸基上引入胆酸酯结构片段能够明显提高化合物被肝细胞摄取的能力,同时提高其抗病毒活性。化合物1c的抗病毒活性与肝细胞摄取能力最好,值得进一步研究。