羊耳菊活性部位提取物在大鼠胆汁中代谢产物的研究

采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(UHPLC/Q-TOF MS/MS)技术,分析大鼠灌胃羊耳菊活性部位提取物后,主要成分在大鼠胆汁中的排泄方式。SD大鼠胆管插管手术后,灌胃给予羊耳菊活性部位提取物(100 g/kg生药量),收集给药后12 h的胆汁样品。样品经正丁醇液液萃取法处理后,采用UHPLC/Q-TOF MS/MS对胆汁中的主要代谢产物的结构进行分析推测。实验结果显示,胆汁中共检测到27个代谢产物,样品中检测到大量的咖啡酰基奎宁酸还原,甲基化,葡萄糖醛酸化和甲基葡萄糖醛酸化代谢产物,以咖啡酰基奎宁酸的甲基葡萄糖醛酸化为主。说明大鼠口服羊耳菊提取物后,成分可通过胆汁进行消除,并且甲基葡萄糖醛酸结合物是主要的物质形式。

基于血清药理学和血清药物化学研究红禾麻治疗类风湿性关节炎的潜在药效物质基础

该文主要基于血清药理学和血清药物化学研究红禾麻治疗类风湿性关节炎的潜在药效物质基础。首先采用血清药理学研究方法,体外培养人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A),用50 ng·mL的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理细胞,考察红禾麻含药血清对MH7A细胞增殖抑制率及前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)炎症因子分泌的影响。采用血清药物化学研究方法,以建立红禾麻提取物UHPLC-Q-TOF-MS指纹图谱为基础,对比红禾麻提取物、含药血清及空白血清的指纹图谱,寻找红禾麻体内的移行成分。同时运用谱效关系分析法,将含药血清图谱(指纹图谱特征峰峰面积)与效(含药血清的药效数据)进行相关性分析,从含药血清中筛选出红禾麻抗类风湿性关节炎的药效物质基础。结果发现红禾麻含药血清能够有效显著抑制TNF-α活化的MH7A细胞增殖并显著降低炎症因子PGE2、IL-6及IL-1β的分泌,具有治疗类风湿性关节炎的作用。30个体内移行成分在红禾麻含药血清中被检测到,其中有8个成分被确定是以原型入血,分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、木犀草苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮苷,谱效关系分析显示,其中有12个特征峰(3、7、8、14、18、19、21、23、24、m6、m7、m15号)与药效有显著关联,新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸等对治疗类风湿性关节炎活性的贡献较大。该文初步阐明了红禾麻治疗类风湿性关节炎的药效物质基础,为揭示红禾麻抗类风湿性关节炎作用的物质基础奠定理论和实验基础。

红禾麻提取物在Caco-2细胞模型中的摄取转运研究

红禾麻提取物对炎症具有显著的抑制作用,对类风湿性关节炎大鼠具有较好的治疗效果。然而,红禾麻提取物中活性成分在Caco-2细胞中的吸收特性尚不清楚,限制了红禾麻药材的深度开发。该实验旨在考察红禾麻提取物中活性成分在Caco-2细胞模型中的吸收转运机制,探究不同因素(浓度、时间、pH、温度、外排转运蛋白抑制剂)对其摄取转运的影响。研究表明,在质量浓度为2.0~8.0 mg·mL^(-1)的条件下,红禾麻对Caco-2细胞无毒性。提取物在Caco-2细胞模型中的摄取转运存在一定浓度、时间依赖性;各成分主要吸收机制为被动扩散,酸性条件(pH 5.0~6.0)及37℃更有利于药物的吸收;转运研究中各成分P_(app)>1.0×10^(-6)cm·s^(-1),表明红禾麻为中等吸收的药物;P-gp、MRP2及BCRP均不参与其摄取转运过程。

基于大鼠离体外翻肠囊模型考察杜仲提取物在正常和自发性高血压状态下的肠吸收特性差异

目的：研究杜仲提取物在正常大鼠和自发性高血压大鼠的肠吸收特性差异。方法：采用大鼠外翻肠囊模型,收集10.0 g·L-1杜仲提取物给药后不同时间点的肠囊液,通过UPLC-MS/MS检测肠吸收液样品中京尼平苷酸、原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷7个成分的含量,计算累积吸收量和吸收速率常数,比较正常大鼠和自发性高血压大鼠肠吸收液中杜仲提取物各指标成分的吸收情况。结果：杜仲提取物中7种成分的肠吸收均为线性吸收（R2均〉0.99）,主要吸收部位在小肠,正常状态下以十二指肠的吸收最好。原儿茶酸和松脂醇二葡萄糖苷在高血压状态下的空肠有更好吸收,提示病理状态可能会改变药物吸收的特定部位。7个指标成分在SHR模型的肠吸收与正常大鼠相比均表现出了不同程度的差异。京尼平苷酸在自发性高血压大鼠各肠段的吸收弱于正常大鼠,但以松脂醇二葡萄糖苷为代表的其他成分都没有表现出一致的吸收趋势。结论：自发性高血压会影响杜仲提取物的肠吸收,从肠黏膜通透性降低和吸收部位后移的角度无法完全解释这些差异,可能还与肠道中存在的酶和转运蛋白等相关,具体作用机制有待进一步的深入研究。

抗EGFRvⅢ单链抗体的原核表达条件的优化及纯化

为了构建抗EGFRvⅢ单链抗体大肠杆菌表达体系,优化抗EGFRvⅢ单链抗体在大肠杆菌中的表达条件,并建立纯化方法。构建抗EGFRvⅢ单链抗体的pET-22b（＋）重组质粒,将其转化到大肠杆菌BL21中,研究不同温度、不同浓度诱导剂对目的蛋白表达效率的影响。用Ni^2＋亲和层析纯化蛋白,并通过免疫印迹对其进行鉴定。抗EGFRvⅢ单链抗体重组质粒经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切,菌落PCR和测序验证,结果显示重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明BL21表达的目的蛋白相对分子量为29kD左右,与理论分子量一致,免疫印迹结果表明在29kD左右出现一条特异性条带,与SDS-PAGE结果一致。15℃和0.6μmol/L的诱导剂为抗EGFRvⅢ单链抗体的最佳诱导条件。本研究成功构建了抗EGFRvⅢ单链抗体大肠杆菌表达体系,并获得了大肠杆菌表达单链抗体的最佳诱导条件。