FMEA在实验室化学品安全管理中的应用

失效模式与效应分析(FMEA)是一种用来确定潜在失效模式及其原因的前瞻性风险管理模式,通过分析其基本原理、实施流程及要点,结合FMEA在实验室化学品管理中的应用,阐明FMEA应用于实验室建设及管理的可行性。作为风险管理模式的FMEA方法,可量化识别实验室化学品管理潜在失效模式的控制点,能有效降低RPN值和不良事件发生率,进而提升了实验室的管理水平。

贵州槐属(Sophora)植物资源与应用情况分析

通过文献总结与实地调查,以掌握贵州槐属植物种类、资源分布与应用情况,为其可持续开发利用与资源保护提供参考。调查发现,贵州有槐属植物8种,包括3变种,各地均有分布。6种槐属植物在贵州8个少数民族中入药使用,槐、白刺花与苦参使用最为广泛,以根部入药为主。具有清热解毒,利湿消肿、利咽消肿、止痛杀虫等功效,用于治疗咽喉疼痛、劳伤疼痛、血痢,尿血等疾病。

贵州沙参属(Adenophora)植物资源与应用情况分析

通过文献总结与实地调查,以掌握贵州沙参属植物种类、资源分布与应用情况,为其可持续开发利用与资源保护提供参考。调查发现,贵州有沙参属植物8种,包括2亚种,各地均有分布。8种沙参属植物均为药用,7种在贵州4个民族中作为药用,轮叶沙参与杏叶沙参使用最为广泛,以根部入药为主。具有清热养阴,祛痰止咳、益胃生津等功效。用于治疗虚劳咳嗽,阴虚、肺热咳嗽,咽喉痛、燥咳痰少,津伤口渴等疾病。此外,共有3种(杏叶沙参、轮叶沙参、无柄沙参)在民间作为食用。

基于网络药理学及实验验证探究苗药虎掌草不同溶剂提取物抗前列腺癌活性及其作用机制

运用网络药理学预测结合实验验证研究苗药虎掌草不同溶剂提取物的抗前列腺癌活性及其作用机制。分别以水、75%乙醇和乙酸乙酯提取虎掌草获得粗提物,通过MTT法体外检测3种溶剂提取物对前列腺癌细胞PC3增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,评价提取物对PC3细胞的抑制作用;采用GC-MS分析乙酸乙酯提取物的化学成分;运用网络药理学分析虎掌草的活性成分及抗前列腺癌作用靶点,构建PPI网络,拓扑分析筛选核心靶点,通过GO生物功能富集和KEGG通路富集分析构建虎掌草抗前列腺癌的信号通路,预测潜在作用机制;利用RT-PCR检测虎掌草提取物对预测的TNF信号通路相关基因转录水平表达的影响,验证预测靶点,进一步分析作用机制。细胞实验表明,3种溶剂提取物对PC3细胞均具有较强的抑制增殖作用,且能显著诱导细胞凋亡(P<0.01);GC-MS和网络药理学结果表明白桦脂酸和虎掌草皂苷D为提取物的主要药效成分,检索得到与抗前列腺癌相关的靶点89个,进一步筛选得到核心靶点15个,涉及ALB、JUN、HSP90AA1等靶点;GO功能富集涉及142个生物过程、28个细胞组成和41个分子功能,KEGG通路富集分析交集靶点主要涉及TNF、TRP、NF-κB、癌症通路等。RT-PCR靶点验证实验表明3种溶剂提取物均能显著影响TNF信号通路关键基因的表达,证明了网络药理学预测机制的可靠性。本研究揭示了虎掌草水、75%乙醇和乙酸乙酯提取物具有较强的抗前列腺癌活性,白桦脂酸和虎掌草皂苷D为主要药效成分,其作用机制可能与调控TNF、TRP、NF-κB、癌症通路等有关。

基于SPSS的贵州中药饮片外源性污染现状分析

目的:调查贵州省不同来源、不同药用部位的中药饮片外源性污染现状,综合分析本地区的污染情况。方法:研究收集了贵州省不同来源的中药饮片286批,对其重金属及有害元素、有机氯及菊酯类农药残留、二氧化硫、黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2进行了测定,采用内梅罗综合污染指数法、因子分析法,通过SPSS 22.0软件对测定结果进行统计分析。结果:不同来源的中药饮片中,来源于药材集散市场的饮片外源性污染超标率较高;不同药用部位的中药饮片中污染严重程度依次为动物类>叶类>花类,根茎类和果仁类基本属于清洁级;通过对关键污染因子进行统计分析,结果表明本地区中药饮片中外源性综合污染影响权重依次为Cd、Pb>Hg、As>Cu>SO2,可见本地区的外源性污染物主要为重金属及有害元素。结论:该研究可为本地区药材种植、加工及管理提供理论依据及建议。

两种植物精油对米象的驱避活性及其化学成分研究

采取水蒸气蒸馏法提取两种常用调味品花椒(Zanthoxylum bungeanum Maxum.)和孜然(Cuminum cyminum L.)的精油,采用滤纸片法测定精油对储粮害虫米象(Sitophilus oryzae L.)成虫的驱避活性。结果表明:当精油浓度为5.0 mg/m L时,花椒和孜然精油对米象成虫72 h平均驱避率分别为64.0%和75.7%,120 h平均驱避率分别为51.8%、63.2%,其驱避等级均在Ⅲ级以上。采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)分析了两种植物精油的化学成分,结果从花椒精油中鉴定出57种化合物,其相对含量达到98.887%,相对含量最高的为芳樟醇L(26.071%),其次为萜烯醇(14.830%)、α-萜品醇(12.754%)和乙酸芳樟酯(9.531%);从孜然精油中鉴定出24种化合物,其含量达到97.999,相对含量最高的为茴香甲醛(44.057%),其次为茴香脑(38.691%)、草蒿脑(7.960%)和γ-萜品烯(2.799%)。上述结果说明两种植物精油对米象成虫的驱避活性显著,具备开发成新型绿色驱虫剂的潜力。

DNA条形码技术在淫羊藿属植物分类鉴定中的可行性分析

目的拟探讨基于叶绿体基因片段psbA-trnH与matK序列的DNA条形码技术在淫羊藿属中的分类与鉴定中的可行性。方法选用不同来源的34个种,共计84份材料,对其psbA-trnH与matK序列片段进行PCR扩增、测序,分析其序列组成和结构特点,应用Kimura双因素模型(Kimura-2-parameter,K-2-P)计算遗传距离,同时应用邻接法(Neighbor-Joining,N-J)构建系统发育树。结果PsbA-trnH序列在34种淫羊藿属材料中的通用性较matK好;通过K-2-P模型评估,psbA-trnH鉴定成功率为36.7%,matK鉴定成功率为24.2%,2条序列遗传距离均存在一定gap;N-J进化树显示,matK序列N-J系统进化树鉴定效率为17.1%,psbA-trnH序列N-J系统进化树鉴定效率为25.7%。结论本研究丰富了淫羊藿属植物的分类鉴定资料,但在淫羊藿属中的分类与鉴定中,应用基于叶绿体基因片段psbA-trnH与matK序列的DNA条形码技术仍具有一定局限性。

基于网络药理学及实验验证探究廖氏化风丹抗白血病活性

目的基于网络药理学探究廖氏化风丹抗白血病活性及作用机制,并通过实验进行验证。方法采用气相色谱-质谱联用分析结合中药系统药理学数据库与分析平台检索廖氏化风丹的化学成分;应用Swiss Target Prediction数据库检索该成分的潜在作用靶点;通过数据库GeneCards、CTD和OMIM检索白血病相关靶点;使用STRING数据库对交集靶点进行互作分析,构建PPI网络,筛选核心靶点;借助Cytoscape 3.8.0软件构建“药物-成分-靶点”网络,分析抗白血病关键活性成分;应用DAVID数据库进行基因本体(GO)功能富集与京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路注释分析,将得到的主要活性成分与核心靶蛋白进行分子对接验证。采用MTT实验检测廖氏化风丹对白血病细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对白血病细胞凋亡的影响;构建白血病小鼠模型,通过动物实验检测廖氏化风丹体内抗白血病活性。结果分析确定了廖氏化风丹活性成分111个,作用靶点1170个,其中与白血病相关的潜在靶点970个,核心靶点10个,主要包括ABL、BCL-2、KIT等;GO富集分析与KEGG注释分析显示这些作用靶点主要参与细胞凋亡、细胞增殖的调控等生物过程及cAMP信号通路、癌症通路、神经活性配体-受体相互作用、PI3K-Akt信号通路等;分子对接结果显示廖氏化风丹核心活性成分与核心靶蛋白ABL、BCL-2、KIT有较强的亲和力;体外细胞实验表明廖氏化风丹能够抑制HEL、K562细胞增殖并诱导细胞凋亡(P<0.01);动物体内实验结果表明廖氏化风丹对小鼠白血病有明显治疗作用(P<0.05,P<0.01)。结论揭示了廖氏化风丹抗白血病多成分、多靶点、多通路的作用机制,明确了其具有抗白血病活性,为进一步研究开发廖氏化风丹的药用价值提供依据。

薇甘菊内酯衍生物LY19380b对人白血病细胞HEL的作用及机制研究

目的 研究薇甘菊内酯衍生物LY19380b对人白血病细胞HEL的作用及机制。方法 四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测LY19380b对不同的人肿瘤细胞的抗增殖活性,利用流式细胞术测定细胞周期,Annexin V-FITC/PI和Hoechst 33258染色测定细胞凋亡;Western blot分析LY19380b对细胞凋亡及周期相关蛋白的影响。结果 LY19380b对不同的人肿瘤细胞均具有抗增殖活性,对人白血病细胞HEL具有显著的生长抑制作用,可诱导HEL细胞发生凋亡并导致细胞周期阻滞;此外,LY19380b作用于HEL细胞后显著增加P53、BIM、BID、BAD、BAX、FLIP、P21及Cyclin B1蛋白的表达,降低Bcl-2、p-CDC25C、p-AKT、p-STAT3、p-ERK蛋白的表达。结论 LY19380b通过增加促凋亡蛋白BIM、BID、BAD、BAX的表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,诱导人白血病细胞HEL发生凋亡,上调周期蛋白P21、Cyclin B1的表达,从而导致HEL细胞周期阻滞。

隔山消水溶性部位对阿托品抑制小鼠胃肠功能的影响

目的:研究隔山消水溶性部位对阿托品所致小鼠胃肠运动及胃肠激素分泌抑制的影响。方法:将实验小鼠随机分为空白组、模型组(硫酸阿托品)、阳性药组(多潘立酮组)、隔山消水溶性部位低、中、高剂量组,多潘立酮组以0. 5 mg/10 g灌胃给予多潘立酮混悬液,隔山消低、中、高组灌胃分别给予0. 18、0. 36及0. 72 g/kg隔山消水溶性部位提取物混悬液,空白组和模型组均给予生理盐水,连续给药4 d,每天2次;末次给药30 min后,除空白组外其余5组小鼠均腹腔注射硫酸阿托品建立胃肠功能障碍模型(0. 5 mg/kg),取血、取胃及小肠组织,采用酚红测定各组胃排空率、小肠推进率,同时检测血清中胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)、血管活性肠肽(VIP)的含量。结果:与模型组相比,隔山消水溶性部位低、中、高剂量组胃排空率和小肠推进率均显著提高(P<0. 01),其中中剂量组与多潘立酮组相当;胃肠激素水平测定结果表明隔山消水溶性部位中、高剂量组显著提高了模型小鼠的MTL、GAS含量(P <0. 05或P <0. 01),降低了VIP含量(P <0. 05)。结论:隔山消水溶性部位提取物能促进小鼠胃排空和肠推进,其机制可能与促进胃肠道MTL及GAS的释放和抑制VIP的释放有关。

艳山姜叶部一个新病害的鉴定及其化学防治

【目的】在贵州民族药艳山姜的栽培过程中,发现一种艳山姜叶部未知病害,该病害严重地影响艳山姜药材的产量和品质,给药农造成了巨大的经济损失。因此,开展该病害病原菌的鉴定、化学药剂对该病原菌抑菌作用的初步研究,对制定病害防治对策有重要意义。【方法】利用柯赫氏法则对病原菌进行了分离和回接;使用形态学及分子系统学方法对病原菌进行了分类鉴定;采用含药平板法研究了7种化学杀菌剂对该病原菌进行室内药效试验。【结果】分离鉴定该病害的病原菌为新拟盘多毛孢属真菌,并筛选了可行的化学防治药剂:75%百菌清,80%代森锰锌和57.6%冠菌清对病原菌的抑制效果不明显,25%咪鲜胺和70%甲基托布津的抑菌效果相对较好,EC_(50)分别为0.150 3μg/mL和0.872 3μg/mL。【结论】该病害为艳山姜上的首次报道,笔者将其命名为艳山姜褐斑病,致病菌为新拟盘多毛孢属真菌;25%咪鲜胺对该病原菌室内防治效果较好,可作为艳山姜褐斑病的防治备选化学药剂。

SLC22A12瞬时转染HEK293细胞模型的建立与鉴定

目的:构建SLC22A12瞬时转染HEK293细胞模型并进行鉴定。方法:构建GV142-SLC22A12重组质粒,并优化质粒转染人胚肾细胞HEK293的条件。通过qRT-PCR和Western blot检测SLC-HEK293细胞中SLC22A12mRNA和h URAT1蛋白的表达情况,借助超高效液相色谱-串联质谱法考察尿酸钠摄取能力。结果:HindⅢ和EcoRⅠ双酶切和测序验证显示GV142-SLC22A12质粒构建成功,最佳转染条件为2μg质粒,试剂(μL)∶质粒(μg)=3∶1。与HEK293细胞相比,SLC-HEK293细胞中SLC22A12 mRNA和h URAT1蛋白表达量上调(P<0.001);尿酸钠摄取能力更强(P<0.05)。结论:成功建立了SLC22A12瞬时转染HEK293细胞模型。

藤茶总黄酮对酒精性肝损伤小鼠的保护作用

目的探究藤茶总黄酮对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。方法随机将50只小鼠随机分为空白组、模型组及藤茶总黄酮低、中、高(50、75、100 mg/kg)给药组,每组10只,除正常组外,其余各组按16 mL/kg剂量灌胃56%白酒,每天1次,灌酒1 h后各剂量组灌胃给药,正常组和模型组灌胃等体积蒸馏水,连续给药21 d。对肝脏进行HE染色,生化法检测肝脏匀浆上清液的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活性及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平,酶联免疫吸附法检测血清中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果与空白组比较,模型组呈现典型酒精肝组织病变特征,肝组织ALT、AST、MDA、IL-4、IL-6及TNF-α水平升高(P<0.05),而SOD、T-AOC及GSH水平降低(P<0.05)。与模型组比较,藤茶总黄酮各剂量组对酒精性肝组织炎性程度、水肿程度及脂变程度均呈现不同程度的减轻,肝组织ALT、AST、MDA、IL-4、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05),而SOD、T-AOC、GSH水平升高(P<0.05)。结论藤茶总黄酮对酒精性肝损伤小鼠具有一定保护作用,其可能机制与增加肝组织抗氧化酶的活性、降低脂质过氧化水平、降低肝组织IL-4、IL-6、TNF-α等炎症因子水平有关。

刺梨酵素化果醋对小鼠急性酒精性肝损伤的改善作用

探究刺梨酵素化果醋对小鼠急性酒精性肝损伤的影响。将50只小鼠随机分为空白组、模型组、醋低、中、高剂量组。除空白组外,其余各组均先灌胃给予刺梨酵素化果醋14 d,在给药最后一天,以体质量计,灌胃12 mL/kg 53%vol的白酒。酒后12 h收集小鼠粪便分析肠道菌群,取血并解剖取肝脏称重,测定血清中生化指标。研究表明,与模型组相比,刺梨酵素化果醋高剂量组肝脏指数、TG(甘油三酯)含量、MDA(丙二醛)含量均显著降低19.23%、58.68%、51.93%,SOD(超氧化物歧化酶)、GSH(谷胱甘肽)含量显著提高28.67%、21.88%;ALT(丙氨酸氨基转移酶)、AST(谷草转氨酶)含量均显著降低37.36%、22.66%。从肠道菌群结构组成分析,刺梨酵素化果醋低、中、高剂量组相较于模型组厚壁菌门丰度分别增加了19.60%、13.63%、11.02%,乳酸杆菌属的相对丰度增加了14.44%、5.99%、16.30%。综上所述,刺梨酵素化果醋对酒精诱导的急性肝损伤小鼠的脂质代谢紊乱、肝脏氧化应激具有显著的改善效果,可调节急性肝损伤小鼠肠道群落的丰度与种类,增加益生菌含量。

微波辅助提取刺梨多糖工艺优化及抗肿瘤活性研究

目的:优化微波辅助提取刺梨多糖工艺,并对最优条件下提取的刺梨多糖进行抗肿瘤活性评价。方法:以刺梨多糖得率为考察指标,在单因素试验的基础上,采用响应面试验优化提取工艺参数,并通过建立S180实体瘤模型来进行抗肿瘤活性评价。结果:微波辅助提取刺梨多糖的最优工艺条件为微波功率240 W,液料比37∶1 (mL/g),微波时间24 min,微波提取次数3次,此条件下的刺梨多糖得率为(3.19±0.05)%。当灌胃剂量为100 mg/kg时,微波辅助提取刺梨多糖对S180肿瘤小鼠的抑瘤率为(52.13±1.84)%,比超声辅助提取刺梨多糖的抗肿瘤活性更强,并能显著提高肿瘤小鼠的白细胞数量、胸腺指数和脾脏指数。结论:在最优工艺条件下,微波辅助提取的刺梨多糖具有一定的提升肿瘤小鼠免疫能力和抗肿瘤作用,并具有成为功能性食品添加剂的潜力。

金刺梨发酵前后风味物质变化研究

该研究对金刺梨的风味物质(氨基酸、有机酸和挥发性风味成分)经过发酵处理前后的变化进行分析研究。结果表明,金刺梨经过发酵处理后,氨基酸总含量与种类均有所降低,但发酵后的甜味氨基酸、苦味氨基酸、芳香味氨基酸含量/总氨基酸分别提高了5.78%、7.96%、11.10%,鲜味氨基酸含量降低了24.92%;有机酸含量和数量均增加,发酵后新增的有机酸包括苹果酸、乳酸、醋酸三种,其中原有柠檬酸和草酸含量相对未发酵前分别增加了3倍和7倍;挥发性风味物质变化显著,其中醇类和酯类的相对含量百分比分别增加了23.79%、32.52%,而酸类、醛类和酮类相对含量百分比分别降低了48.08%、1.73%、0.93%。金刺梨经过发酵工艺处理后无不愉悦风味,口感更佳,更具营养价值。

重楼中一株产纤维素酶内生真菌的分离及鉴定

从重楼根茎中分离、鉴定具有产纤维素酶活性的内生真菌。采用表面消毒法从重楼块茎中分离内生真菌;用纤维素酶活性CMC平板检测分离菌株的产纤维素酶活性;对高产菌株进行形态学观察和分子生物学测序鉴定;探究影响纤维素酶活力的因素;利用平板法检测该株菌产其他胞外水解酶的活性。从3个来源的重楼中分离出41株内生真菌,通过平板检测发现AS-5、AS-7、AS-9和AS-18菌株能产生纤维素酶,其中AS-9菌株活性最强;通过形态学观察和ITS、LSU序列分析将AS-9菌株鉴定为Setophoma terrestris;该菌在pH值为7.0和温度为28℃时表现出最大纤维素酶活性,紫外线照射对产纤维素酶活性无明显作用;检测发现AS-9菌株同时具有产酪蛋白酶、脂肪酶、天冬酰胺酶、谷氨酰胺酶和脲酶活性。首次在重楼中发现内生真菌Setophoma terrestris,且具有较好的产纤维素酶能力,值得深入研究。

乳安消片对乳腺增生大鼠的治疗作用

目的观察乳安消片对乳腺增生大鼠的治疗作用。方法 60只大鼠随机分为空白对照组、模型组、乳癖消片组(960 mg/kg)及乳安消片低、中、高剂量组(580、1 160、1 740 mg/kg),每组6只,除空白对照组外各组大鼠后腿内侧肌内注射苯甲酸雌二醇和黄体酮以建立乳腺增生模型。灌胃给药45 d后,测定第2对乳头高度及乳房直径,ELISA检测血清雌二醇(E2)、催乳素(PRL)、孕酮(PROG)水平,HE染色进行组织病理学观察。结果与模型组比较,乳安消片组E2、PRL水平显著降低(P<0. 05),PROG水平显著升高(P<0. 05),并且中、高剂量组乳头高度及乳房直径显著减小(P<0. 05)。结论乳安消片对乳腺增生大鼠具有明显的治疗作用,其机制可能与调节体内性激素水平有关。

酶法辅助热水浸提刺梨多糖工艺优化及其抗肿瘤活性研究

以刺梨干果为原材料,研究酶法辅助热水浸提刺梨多糖的提取工艺及其抗肿瘤活性。通过单因素实验结合响应面法优化刺梨多糖的提取工艺,并通过建立S_(180)实体瘤模型对最优条件下提取的刺梨多糖进行抗肿瘤活性研究。结果表明,酶法辅助热水浸提刺梨多糖的最优工艺条件为:酶解pH6.2,酶解时间4 h,酶解温度41℃,酶添加浓度1.62%,液料比30:1 mL/g,酶解反应完成后90℃热水浸提3 h。在此工艺条件下,刺梨多糖得率为6.32%±0.12%。抗肿瘤活性研究表明,在灌胃剂量为200 mg/kg时,酶法辅助热水浸提刺梨多糖对S_(180)肿瘤小鼠的抑瘤率为52.13%±1.84%,具有明显的抗肿瘤活性,并能显著(P<0.05)提高肿瘤小鼠的白细胞数量、胸腺指数和脾脏指数,说明在此工艺条件下提取的刺梨多糖,具有一定的提升肿瘤小鼠免疫能力和抗肿瘤的作用,可作为潜在的功能性食品添加或天然抗肿瘤药物来源。

天麻酵素对失眠小鼠的镇静催眠功效评价

为探究天麻酵素镇静催眠功效,该研究分析了天麻酵素理化指标以及对失眠模型小鼠脑组织内神经递质及氧化应激水平的调节。将KM雄性小鼠随机分为空白组、模型组、枣仁安神液组(阳性对照组1)、天麻粉组(阳性组对照组2)、天麻酵素低(0.10 g/kg)、中(0.30 g/kg)、高(0.49 g/kg)剂量组,以对氯苯丙氨酸建立失眠模型,连续灌胃给药7 d后通过测定小鼠自主活动的变化、小鼠脑组织神经递质和氧化应激水平的变化,分析其对失眠小鼠镇静催眠功能的影响。结果显示,天麻酵素中γ-氨基丁酸含量为0.48 mg/kg,是QB/T 5232-2018标准中要求的16倍;天麻酵素高、中剂量组与模型组相比,小鼠活动时间和站立次数显著减少(p<0.05),分别减少13.00 s、14.63 s和10.62次、9.12次;小鼠脑组织中5-HT、GABA、IL-1β含量显著增加(p<0.01)、SOD活性显著提高(p<0.05)、MDA含量显著降低(p<0.05),其中5-HT增加50.62 pg/mL、49.51 pg/mL,GABA增加5.47 ng/mL、5.15 ng/mL。这表明天麻酵可通过调节小鼠脑组织内神经递质及氧化应激水平来达到镇静催眠作用。