产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药机制研究

目的了解贵阳地区医院内检出的大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株的耐药性及基因型,为指导临床合理用药提供依据。方法由贵州医科大学附属白云医院ATB系统完成菌株鉴定及药敏试验检测,采用纸片扩散法进行ESBLs表型确证试验,采用碱裂解法提取产ESBLs菌的质粒DNA,采用聚合酶链反应扩增TEM型、SHV型、CTX-M-1组和CTX-M-9组基因。结果产ESBLs大肠埃希菌阳性率为66.7%（279/418）;对阿米卡星耐药率为4.3%;对青霉素类,头孢菌素第1、2代药物耐药率均为100.0%;庆大霉素、妥布霉素、喹诺酮类、磺胺类药物耐药率在60.6%～84.9%;对亚胺培南和美罗培南仍保持较高的敏感度。116株产ESBLs大肠埃希菌基因型有113株（97.4%）为CTX-M型,其中CTX-M-9亚型68株（58.6%）,CTX-M-1亚型67株（57.8%）;TEM型有86株（74.1%）;未检出SHV型。结论产ESBLs阳性的大肠埃希菌的耐药率明显高于产ESBLs阴性的大肠埃希菌,且具有多重耐药性。贵州医科大学附属白云医院产ESBLs大肠埃希菌的基因型以CTX-M型为主;碳青霉烯类为最敏感的药物,但本研究中发现亚胺培南耐药菌株,需引起临床重视。

子宫颈癌患者Treg及Th细胞因子测定的临床意义

目的研究调节性T细胞(Treg)与Th细胞因子IFN-γ、IL-4在子宫颈癌患者外周血中的表达水平,探讨其与人乳头瘤病毒(HPV)感染的宫颈疾病之间的关联。方法应用流式细胞及酶联免疫吸附技术检测40例子宫颈癌、35例宫颈上皮内瘤变(CIN)、20例宫颈炎患者及20例健康对照组外周血中Treg及IFN-γ、IL-4的水平;统计观察Treg与IFN-γ及IL-4水平的相关性。结果子宫颈癌组Treg的水平显著高于健康对照组、宫颈炎组及CIN组,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫颈癌患者血清中IFN-γ水平明显低于健康对照组及宫颈炎组(P<0.05)。子宫颈癌患者血清中IL-4水平明显高于健康对照组、宫颈炎组及CIN组(P<0.05)。Treg的水平与IFN-γ的水平呈负相关关系(r=-0.291,P<0.05);而与IL-4水平呈正相关关系(r=0.383,P<0.05)。结论 Treg的高水平以及Th细胞因子失衡可能在子宫颈癌患者免疫耐受以及子宫颈癌前病变进展至子宫颈癌的过程中发挥重要的作用;Treg与IFN-γ及IL-4存在相关性,Treg与Th细胞因子IFN-γ及IL-4可能共同参与了子宫颈癌的发病机制。

慢性心力衰竭合并缺铁患者的临床特征分析

慢性心力衰竭（chronic heart failure,CHF）为继发于各种心脏疾病严重阶段所表现出来的一种复杂的临床症状群,发病率高及快速增长为其主要特点。然而,近期国外大宗报道指出缺铁（iron deficiency,ID）伴或不伴贫血在心衰的发生发展过程中亦起较关键的作用。

两种检测系统测定血清降钙素原的比较研究

降钙素原（PCT）是降钙素的前体,主要由甲状腺C细胞分泌,是一种无激素活性的糖蛋白。在正常生理状态下,血液中PCT水平非常低。PCT的生成受细菌毒素及炎性细胞因子的调节,其中细菌内毒素是诱导PCT生成的主要刺激因子。PCT已作为一个新的标志物,已广泛应用于感染性疾病的诊断和鉴别诊断、抗生素的指导应用及抗生素治疗后疗效评估等领域[1-4]。2001年国际脓毒症会议将PCT作为脓毒症的诊断指标之一[5]。

间日疟并重度血小板减少1例

患者．男，45岁．贵州省金沙县安落乡人，农民。2014年12月20日无明显诱因出现高热．体温最高达40．3℃。发热过程中伴寒战．盛汗退热．退热后感困倦．伴口渴、多饮（约3000m1）、多尿（同饮水量），发热隔日1次，每次持续约4-6h．多次就诊于当地诊所，具体诊断不详，予多种抗生素治疗无效、12月25日患者全身出现散托瘀点及皮疹伴皮肤瘙痒．

D-二聚体及纤维蛋白单体在骨科术后监测中的价值

目的探讨血浆D-二聚体(DD)、纤维蛋白单体(FM)水平监测在骨科术后对深静脉血栓(DVT)风险评估中的价值。方法分别在术后第1天、第3天采用免疫比浊法检测60例骨科患者血浆DD和FM水平,并在术后第7天进行下肢彩色多普勒超声检查。以彩色多普勒检查的阳性结果作为DVT的诊断标准,评价DD、FM的改变与DVT的相关性,探讨DD、FM在骨科术后改变的价值。结果经彩色多普勒检查诊断并发DVT 9例。并发DVT患者术后第1天、第3天的DD和FM与未并发DVT患者相比,差异均有统计学意义(P<0.05);并发DVT组和未并发DVT组术后第3天DD、FM均比术后第1天增高,差异具有统计学意义(P<0.05);FM在术后1d先于DD增高(P>0.05)。结论同时监测血浆DD和FM水平对骨科患者术后评估DVT发生的风险具有重要价值。提示临床医生可依据术后监测DD、FM的改变进行早期干预,降低DVT发生的风险;FM在血栓发生、发展的过程中,先于DD出现,提示FM能更早评估血栓风险。

全自动生化分析仪检测系统精密度和准确度性能验证

目的验证罗氏cobas 8000全自动生化分析仪检测系统的精密度和准确度,以证实厂家声明的检测系统性能指标。方法参照CLSI文件及其他文献,验证罗氏cobas 8000全自动生化分析仪的精密度、准确度。结果在本实验条件下,罗氏cobas 8000全自动生化分析仪的精密度和正确度与厂商声明的性能一致。结论罗氏cobas 8000全自动生化分析仪检测系统精密度好、准确度高,可较好地应用于临床常规检测。CLSI实验评价方案具有可操作性和实用性。

尿液检查方法的应用与比较

尿液分析（urinalysis）,即采用理学、化学、显微镜方法来检查尿液,由于是每个住院患者必须完成的常规检验,故常简称为尿常规。随着科学的发展,新技术、新方法、新仪器（如流式细胞仪、电镜等）检查尿液,微生物、免疫、生物化学、分子生物学的检查项目逐渐增多,分析手段进展很快,因超过常规分析的范畴,故改称为尿液分析法[1]。

婴幼儿重症和非重症肺炎淋巴细胞亚群的差异分析

目的:观察重症肺炎和非重症肺炎患儿淋巴细胞亚群水平,探讨患儿的细胞免疫功能变化并为临床治疗提供参考。方法:收集重症肺炎患儿27例、非重症肺炎(普通肺炎)患儿28例以及20例健康对照,采用流式细胞术检测研究对象外周血中CD3^+T、CD3^+CD4^+T、CD3^+CD8^+T、CD19^+B、CD16^+CD56^+NK细胞的水平,并进行比较分析。结果:重症肺炎组CD3^+T、CD3^+CD4^+T、CD3^+CD8^+T淋巴细胞及NK细胞比例明显低于健康对照(P<0.01,P<0.05,P<0.01,P<0.05),而CD4/CD8比值、CD19^+B淋巴细胞比例则显著高于健康对照组(P<0.05,P<0.01);非重症肺炎组CD3^+CD8^+T淋巴细胞低于健康对照(P<0.01),而CD19^+B淋巴细胞比例则显著高于健康对照组(P<0.01);与非重症肺炎组相比,重症肺炎组CD3^+T、CD3^+CD8^+T淋巴细胞比例显著降低(P<0.01),而CD19^+B淋巴细胞比例则明显升高(P<0.01)。结论:重症与非重症肺炎患儿机体存在明显的细胞免疫功能紊乱,重症肺炎患儿的细胞免疫功能受损更为严重,为临床评估病情及免疫治疗提供一定的理论依据。

肺结核患者外周血中Treg细胞和Th17细胞等4种T细胞亚群与其发病的关系

目的通过检测肺结核患者和健康人群外周血中Treg细胞、Th17细胞以及CD8^+CD28^+T细胞和CD8^+CD28-T细胞的数量,探讨各细胞亚群的数量与肺结核发病的关系,为结核的诊断、治疗及预后提供新思路。方法应用流式细胞技术检测Treg细胞、Th17细胞以及CD8^+CD28^+T细胞和CD8^+CD28-T细胞,分别比较肺结核组、初治组、复治组与健康对照组之间的上述指标是否存在差异。结果 (1)肺结核组、初治组及复治组外周血中Th17细胞的数量分别为(0.74±0.33)%、(0.76±0.34)%、(0.73±0.32)%,CD8^+CD28^+T细胞的数量分别为(39.5±11.4)%、(39.5±10.9)%、(38.7±12.2)%,均分别低于健康对照组(1.17±0.38)%、(62.5±12.0)%,差异有统计学意义(P<0.01);(2)肺结核组、初治组及复治组外周血中Treg细胞的数量分别为(10.1±2.7)%、(11.4±3.8)%、(9.4±2.5)%,CD8^+CD28-T的数量分别为(60.5±11.4)%、(60.5±10.9)%、(61.3±12.2)%,均分别高于健康对照组的(7.2±2.2)%、(37.5±12.0)%,差异有统计学意义(P<0.01);(3)初治组患者与复治组患者外周血中Th17细胞、Treg细胞、CD8^+CD28^+T细胞、CD8^+CD28-T细胞数量之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论肺结核患者外周血中的效应性T细胞亚群Th17细胞和CD8^+CD28^+T细胞下降,具有抑制功能的CD4^+CD25^+CD127low/-Treg细胞和CD8^+CD28-T细胞升高,以上4个T细胞亚群可能与肺结核的发病过程相关。

人乳头瘤病毒16和52型双荧光等温多自配引发扩增的检测方法

应用等温多自配引发扩增(IMSA)技术,分别针对人乳头瘤病毒(HPV)16型的E7和52型的E6基因序列设计6条特异性引物,并在检测体系中加入羟基萘酚蓝(HNB)和SYBR GreenⅠ的混合双荧光指示剂,建立快速检测人乳头瘤病毒的双荧光IMSA方法.结果表明:340μmol/L HNB与1∶10 000SYBR GreenⅠ混合构建的双荧光指示剂在IMSA反应体系中具有明确的指示效果,455nm蓝光激发下阳性反应管双荧光显色为黄绿色,阴性反应管双荧光显色为橘红色;该方法对HPV16和HPV52型检测限分别达60,600拷贝/μL,可特异性检出样品中HPV16和HPV52,与临床检测结果比对无差异.

强直性脊柱炎患者单个核细胞TLR2、TLR4与淋巴细胞凋亡的研究

目的:通过检测强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)患者外周血单个核细胞(单核细胞、淋巴细胞)表面TLR2 (Toll-like receptors2, TLR2)、TLR4 (Toll-like receptors4, TLR4)的表达及淋巴细胞凋亡的数量,探讨TLR2、TLR4及淋巴细胞的凋亡与强直性脊柱炎发生发展的关系。方法:应用流式细胞术检测67例AS患者(非活动性组39例,活动性组28例)和30例健康体检者的外周血标本。通过应用FITC-TLR2、PE-TLR4两种试剂检测外周血单个核细胞表面TLR2、TLR4的表达水平,以及流式Annexin-v FITC/PI法检测外周血淋巴细胞的凋亡量。各实验检测均设定相应的同型或阴性对照。结果:1) AS患者外周血单个核细胞表面TLR2在疾病组、活动性组和非活动性组分别为:23.16%、23.07%和23.22%,均高于健康对照组12.53%,差异有统计学意义(P 0.05)。2) AS患者外周血单个核细胞表面TLR4在疾病组、活动性组和非活动性组分别为:24.43%、24.51%和24.38%,均高于健康对照组12.55%,差异有统计学意义(P 0.05)。3) AS患者外周血淋巴细胞凋亡在疾病组、活动性组、非活动性组分别为: 84.00%、79.64%和87.14%,均低于健康对照组98.26%,差异有统计学意义(P 0.05);AS患者外周血淋巴细胞凋亡与活动性呈中度负相关(r = ?0.568, P <0.05)。结论:1) AS患者外周血单个核细胞表面TLR2、TLR4出现异常增高。2) AS患者外周血淋巴细胞凋亡量减少。

低蛋白条件对燃煤型氟中毒雌鼠卵巢颗粒细胞的影响

为了解低蛋白条件对燃煤型氟中毒雌鼠卵巢颗粒细胞的影响,选取120只断乳2周的60~80 g清洁级SD雌性大鼠,随机分为对照组、低蛋白组、染氟组、低蛋白染氟组,每组30只。对照组和低蛋白组进食75%非病区玉米饲料(含氟量为5.2 mg/kg),染氟组和低蛋白染氟组进食75%燃煤型氟中毒病区玉米饲料(含氟量为96 mg/kg);对照组及染氟组饲料中大豆蛋白质含量为18 g/kg,低蛋白组和低蛋白染氟组为9 g/kg。每组分别于60、120、180 d动态观察雌鼠氟斑牙变化情况,测定尿氟、骨氟水平,采用透射电镜观察卵巢颗粒细胞超微结构变化,以末端转移酶标记技术(TUNEL法)检测卵巢颗粒细胞凋亡情况。结果显示,成功建立燃煤型氟中毒雌鼠模型,低蛋白染氟组较染氟组电镜下病理损伤更明显。与对照组比较,低蛋白组120、180 d卵巢颗粒细胞凋亡率升高,染氟组和低蛋白染氟组60、120、180 d卵巢颗粒细胞凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05);低蛋白染氟组60、120、180 d卵巢颗粒细胞凋亡率高于低蛋白组,60、120 d卵巢颗粒细胞凋亡率高于染氟组,差异均有统计学意义(P<0.05)。染氟组180 d时卵巢颗粒细胞凋亡率高于60 d,差异有统计学意义(P<0.05)。析因分析结果显示,饲养60、120、180 d时氟对雌鼠卵巢颗粒细胞凋亡率有影响(F值分别为1 180.051,1 187.294,999.577,P<0.05);饲养60、120 d时低蛋白对雌鼠卵巢颗粒细胞凋亡率有影响(F值分别为17.613,12.706,P<0.05),而饲养180 d时无影响(F=4.017,P>0.05),氟与低蛋白对雌鼠卵巢颗粒细胞凋亡率的影响无交互效应(F值分别为3.479,0.088,0.941,P>0.05)。提示低蛋白条件下燃煤型氟中毒雌鼠卵巢颗粒细胞病理损伤有所加重,但低蛋白与氟染毒对凋亡率的影响无明显相关性。

强直性脊柱炎患者外周血中循环滤泡辅助性T细胞与抗体分泌B细胞关系的研究

目的探讨AS患者外周血中循环滤泡辅助性T细胞（cTfh）与抗体分泌B细胞（CD19＋ CD38＋ B）的关系及其在AS发病机制中的作用。方法收集AS患者59例（其中活动组36例，非活动组23例）、健康对照20名，流式细胞术检测研究对象外周血中CD4＋ CXCR5＋ T细胞（cTfh）、CD4＋ CXCR5＋ PD-1＋ T细胞、CD4＋ CXCR5＋ ICOS＋ T细胞、CD19＋ B细胞、CD19＋ CD38＋ B细胞的表达水平；统计学处理采用独立样本t检验,单因素方差分析、Pearson及Spearman相关分析。结果AS患者组外周血cTfh[（26.8±10.4）%]、CD4＋ CXCR5＋ PD-1＋ T细胞[（12.1±14.0）%]、CD4＋ CXCR5＋ ICOS＋ T细胞[（13.6±9.5）%]、CD19＋ CD38＋ B细胞[（80.7±13.0）%]的百分率高于健康对照组[（15.6±4.5）%、（6.4±2.4）%、（9.4±4.5）%、（68.2±13.0）%]（t=6.663，P〈0.01；t=2.999，P〈0.01；t=2.573，P〈0.05；t=2.712，P〈0.01）。AS活动组外周血cTfh细胞的百分率[（30.2±11.0）%]明显高于非活动组[（21.4±6.5）%]及健康对照组（t=3.444，P〈0.01；t=7.004，P〈0.01）；AS活动组外周血CD19＋ CD38＋ B细胞的百分率[（85.1±10.0）%]显著高于AS非活动组[（73.8±14.2）%]及健康对照组（t=3.561，P〈0.01；t=5.410，P〈0.01）；AS患者外周血cTfh、CD19＋ CD38＋ B细胞的表达水平分别与BASDAI呈正相关（r=0.442，P〈0.01；r=0.405，P=0.001），且CD19＋ CD38＋ B细胞的百分率与cTfh的百分率呈正相关（r=0.420，P=0.001）。 结论AS患者外周血CD4＋ CXCR5＋ T（cTfh）细胞水平显著升高，伴随抗体分泌B细胞（CD19＋ CD38＋ B）比例增加，提示cTfh细胞与抗体分泌B细胞可能在AS发病机制中发挥重要作用。