小鼠β防御素4体外对人呼吸道合胞病毒抑制作用研究

目的观察小鼠β防御素4体外对人呼吸道合胞病毒的抑制作用。方法将小鼠β防御素4基因克隆到pET32a载体中并导入大肠埃希菌表达,获得的小鼠β防御素4融合蛋白,通过镍亲和层析法纯化和离子交换层析法复性,分别以半数组织感染剂量法和荧光定量PCR法分别测定小鼠β防御素4和阳性对照利巴韦林对人呼吸道合胞病毒的半数抑制浓度,以噻唑蓝比色法检测小鼠β防御素4和利巴韦林对细胞的半数毒性浓度,依据半数毒性浓度与半数抑制浓度的比值计算小鼠β防御素4和利巴韦林对人呼吸道合胞病毒的治疗指数(TI)。同时检测不同浓度小鼠β防御素4对人呼吸道合胞病毒感染细胞的保护程度。结果成功构建pET32a-Trx-His-β-D-4重组质粒,转化BL21后诱导表达融合小鼠β防御素4蛋白。以半数组织感染剂量法和荧光定量PCR法分别测定纯化的小鼠β防御素4对人呼吸道合胞病毒的TI值分别为189和152,而利巴韦林的TI值分别为87和85,且小鼠β防御素4对人呼吸道合胞病毒的抑制作用呈量效关系。结论体外实验表明,融合小鼠β防御素4能高效抑制人呼吸道合胞病毒感染,其效果优于利巴韦林。