三结构域蛋白29(TRIM29)与HBV复制及聚乙二醇干扰素α-2b抗病毒作用的关联性分析

目的三结构域蛋白29(TRIM29)参与多种疾病的发生和发展,与部分DNA和RNA病毒复制密切相关,本研究对TRIM29与HBV复制及聚乙二醇干扰素(PEG-IFN)α-2b抗病毒作用之间的关系展开初步讨论。方法选取2021年10月—2022年6月在贵州医科大学附属医院感染内科门诊就诊的CHB患者64例,其中未治疗患者34例(CHB组),经PEG-IFN-α-2b治疗患者30例,体检中心30例健康志愿者作为对照(健康对照组)。收集志愿者年龄、性别、ALT、AST、TBil、DBil、HBV DNA和外周血单个核细胞(PBMC)。采用Hep G2和Hep G2.2.15细胞作为细胞模型,将TRIM29特异性过表达质粒或si RNA和对照转染至细胞;PEG-IFN-α-2b(0、10、100、1000和10000 U/mL)处理Hep G2细胞和Huh7细胞;TRIM29特异性si-RNA或阴性对照联合PEG-IFN-α-2b处理Hep G2.2.15细胞。ELISA检测HBs Ag和HBe Ag的浓度,q RT-PCR检测TRIM29和HBV RNA相对表达水平,Western Blot检测STING、p-TBK1、TBK1、p IRF3、IRF3、MX1和IFIT1蛋白表达情况,免疫共沉淀检测TRIM29与STING蛋白相互作用关系。正态分布的计量资料两组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。计数资料两组间比较采用χ2检验或Fisher检验。结果CHB组患者外周血TRIM29表达明显高于健康对照组(P<0.001)。在细胞实验中,HBs Ag、HBe Ag和HBV RNA的表达均随TRIM29表达上调而升高,随TRIM29表达下调而降低(P值均<0.05)。TRIM29与STING互相结合,并通过蛋白酶降解STING,与对照组相比,过表达TRIM29对TBK1和IRF3总蛋白无明显变化,STING、p-TBK1和p-IRF3蛋白表达水平均降低(P值均<0.05)。处理Hep G2细胞和Huh7细胞的PEG-IFN-α-2b浓度越高,TRIM29蛋白和m RNA的表达水平越低(P值均<0.01)。CHB患者在PEG-IFN-α-2b治疗期间,TRIM29 mRNA表达水平逐渐降低,且早期应答组和无应答组间差异均有统计学意义(P值均<0.05)。在等量PEG-IFN-α-2b处理下,与对照相比,敲低TRIM29后Hep G2.2.15细胞的MX1和IFIT1蛋白表达水平明显增高(P值均<0.05)。在PEG-IFN-α-2b治疗早期,CHB患者PBMC中TRIM29表达逐渐降低。结论TRIM29靶向并降解STING,通过抑制STING-TBK1-IRF3信号通路促进HBV复制。TRIM29干扰PEG-IFN-α-2b的抗病毒作用,CHB患者PBMC中TRIM29的表达水平可能作为预测患者对PEG-IFN-α-2b治疗应答的指标。