生物钟在口腔医学研究中合理应用专家共识

机体生物钟(也称昼夜节律)是地球上所有生物体能适者生存在地球自转环境中的基础。昼夜节律是生命活动最基本的调控机制,在维持人体正常生理生化稳态、疾病发生及治疗中均扮演关键角色。研究表明,生物钟在口腔组织发育生长、口腔疾病发生及治疗中具有重要作用。由于目前还没有包括口腔医学在内的生物钟研究方法的指导性文献,研究者主要基于已发表的参考文献进行探讨,致使口腔医学中有关生物钟的研究方法存在争议,如何合理应用昼夜节律的研究方法还存在诸多困惑。该共识在总结生物钟的作用特点以及分析目前生物钟在口腔医学研究中不足的基础上,组织相关专家归纳推荐了生物钟在口腔医学研究中合理实施的10条原则,为生物钟在口腔医学研究中的合理应用提供参考。

促红细胞生成素在骨组织工程中的应用及前景

背景:骨缺损是由许多因素引起的,如炎症、肿瘤、创伤或骨骼疾病等,促红细胞生成素通过作用于间充质干细胞,促进其向成骨细胞、破骨细胞分化,作用于血管内皮细胞诱导血管生成,促进骨缺损、软骨缺损的修复,是一种在骨组织工程构建中具有应用潜力的生长因子。目的:阐述促红细胞生成素在骨组织工程中的应用及其潜在机制。方法:由第一作者运用计算机检索中国知网、万方、维普数据库及PubMed数据库中2004-2022年发表的相关文献,以“Erythropoietin,Bone defect,Bone regeneration,Angiogenesis,Osteogenesis、Osteoblast,Osteoclast,Bone tissue engineering”为英文检索词,以“促红细胞生成素,骨缺损,骨再生,血管生成,成骨分化,成骨细胞,破骨细胞,骨组织工程”为中文检索词检索,并进行筛选、归纳与总结,最终纳入64篇相关文献进行综述。结果与结论:①促红细胞生成素可以直接作用于骨髓微环境中的成骨细胞及破骨细胞,通过促进间充质干细胞向成骨细胞、破骨细胞、脂肪细胞、神经细胞和基质细胞分化,通过激活Wnt/β-catenin、缺氧诱导因子1α/血管内皮生长因子、p38MAPK和EphrinB2/EphB4等信号通路介导间充质干细胞完成成骨向分化;②通过调节红细胞的生成以改变血液的携氧能力,通过刺激血管内皮细胞促进血管生成,新生的血管可以将成骨所需的氧气、养分、生长因子和骨祖细胞携带到成骨的位置,从而促进骨形成和骨折愈合;③促红细胞生成素目前作为一种具有成骨成血管作用的生长因子,通过多种载药手段已被应用于壳聚糖、聚己内酯、生物陶瓷和纳米纤维等各类型支架材料研究中,并与其他生长因子如骨形态发生蛋白2,9等共同作用于支架材料表面参与了骨缺损的修复,在新型组织工程骨的构建中展现了其优异的实用性,具有潜在的临床应用价值。

不同类型气管套管联合自制堵管对气管切开术后并发症的临床分析

目的:探讨口腔颌面部患者使用带气囊套管、金属气管套管联合自制堵管对气切后并发症的临床分析。方法:研究对象选择2020年6月~2023年8月在贵州医科大学附属口腔医院口腔颌面外科行气管切开的100例患者,随机分组,对其进行临床资料的回顾性分析,将患者分为带气囊套管组(47例)和气囊套管+金属套管组(53例),两组均使用自制堵管,统计临床资料、住院时间、术后并发症以及术后肺炎的临床分析、治疗方法、致病菌,总结气切后发生肺炎的相关因素进行统计分析。结果:在气管切开术后,术后肺炎发生率为36.00%。气囊组相比于气囊+金属组,发生率为2.12%(P<0.0001),出血发生率为1%,皮下气肿1%。气囊组未出现脱管,而气囊+金属组脱管发生率为20%。所有患者未出现呼吸困难,拔管困难及气管食管瘘。此外单因素分析结果显示有吸烟史及饮酒史的患者在气管切开术后发生肺炎的发生率高,具有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析发现拔气管套管时间的长短及气管套管类型是气切后发生肺炎的综合危险因素(OR=0.021,95%CI:0.002~0.19,P<0.0001)。结论:在口腔颌面部患者行气管切开术后,常规使用气囊套管联合自制堵管,可减少患者住院时间,降低术后并发症及肺炎的发生。

消退素D1在甲状旁腺激素促进牵张成骨中的水平变化及其对巨噬细胞极化效应研究

目的:研究甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)促进牵张成骨过程中消退素D1(resolvin D1,RvD1)表达水平变化及其对巨噬细胞极化的影响。方法:48只兔建立下颌骨牵张成骨模型,随机分为对照组和实验组。对照组术后注射生理盐水,实验组间歇性注射PTH 20μg/kg。分别对各组兔牵张后第3、5、7天进行取样,通过苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察牵张区新骨组织;液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测新骨组织中RvD1含量;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测新骨组织中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)及精氨酸酶1(Arginase 1,Arg1)的表达。体外构建由脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7炎症模型,并添加100 ng/mL RvD1进行处理,qPCR和流式细胞术检测巨噬细胞极化标记物的表达。结果:PTH促进下颌骨牵张成骨兔牵张区新骨生成并明显提高新骨中RvD1含量(P<0.01)。同时,实验组牵张区新骨中巨噬细胞M2型极化标志物Arg1的表达升高,而iNOS的表达降低(P<0.01)。体外实验结果显示RvD1上调了LPS处理的RAW264.7细胞中M2型极化标志物Arg1、CD206和抑炎因子白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的表达(P<0.05),并下调M1型标志物iNOS、CD86和促炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达(P<0.01)。结论:PTH能提高兔下颌骨牵张新骨组织中RvD1含量,RvD1可进一步诱导巨噬细胞向M2型极化而发挥促进炎症消退和骨再生作用。

两种3D打印导板在下颌角成形术中的适应证及应用效果研究

目的分析不同数字化设计及3D打印导板在下颌角成形术中的应用效果。方法选取贵州医科大学附属口腔医院2022年1月至2023年1月收治的12例下颌角肥大患者作为研究对象。所有患者术前均行颅面部CT扫描用于三维模型重建,参考面部协调性及美观需求设计个性化下颌角截骨范围。所有患者均以下颌骨保留部分设计升支固定式截骨导板,以下颌角截除部分设计下颌下缘固定式截骨导板,术中根据不同3D打印导板使用情况分为升支固定组(组1)及下颌下缘固定组(组2)。比较两组患者术前术后下颌角形态变化。术后2周行颅面部CT扫描,重叠配准患者虚拟手术设计与手术后颅面部CT数据,测量手术设计与术后下颌角的偏差。结果所有患者均顺利完成下颌角截骨成形手术,患者对术后面型满意。组1患者术前下颌角均为外展型,组2患者中1例下颌角为外展型,其余患者下颌角为内卷型。所有患者术后下颌角角度显著高于术前(P<0.01),术后左、右侧下颌角角度对比差异无统计学意义(均P>0.05)。两组患者手术设计与术后下颌下缘之间前部、中部、后部偏差水平对比差异无统计学意义(均P>0.05)。结论数字化设计及3D打印导板引导下颌角截骨成形术具有较高的精确性,可获得良好的美容效果;升支固定式截骨导板适用于下颌角外展型患者,下颌下缘固定式截骨导板更适合下颌角内卷型患者。

CAV1在肿瘤化疗敏感性和耐药性中的研究进展

陷窝蛋白(caveolin-1,CAV1)是细胞膜上陷窝的基本成分之一,是一种完整的膜蛋白,与CAV1相关的信号转导可调节细胞增殖、侵袭、细胞死亡和脂质代谢,并与多种免疫相关信号有关。化疗是临床上治疗肿瘤、预防肿瘤复发的重要手段,但其在治疗过程中时常发生药物耐药及敏感性降低,这在很大程度上削弱了化疗的治疗效果,而CAV1与肿瘤化疗的耐药性及敏感性关系密切。该文围绕相关机制及研究进展进行综述,并对这一领域未来的发展方向进行讨论,以期为基于肿瘤化疗治疗的临床试验及机制研究提供帮助。

AURKA基因在口腔鳞癌中的表达及意义

目的检测极光激酶A(AURKA)基因在口腔鳞癌中的表达及意义。方法收集20例口腔正常组织及42例口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织,采用Real-Time PCR检测AURKA基因在不同口腔组织中的表达。结果 AURKA mRNA在OSCC中高表达,且不同分化程度,不同临床分期,组间差异有统计学意义。不同年龄,不同性别,组间差异无统计学意义。结论 AURKA在OSCC中高表达,AURKA作为激酶可能直接或间接地激活多种致癌蛋白或使多种抑癌蛋白失活,从而推动肿瘤的发生发展。

GSK-3β、E-cadherin、Cytokeratin在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的本实验通过观察已确诊的口腔鳞状细胞癌组织中上皮间质化(EMT)相关蛋白及糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的表达,初步探讨其在人口腔鳞状细胞癌中的临床意义,并研究其在口腔鳞癌及正常上皮组织中上皮间质化中的作用,为口腔鳞状细胞癌的预防、控制和治疗提供一定参考。方法通过免疫组织化学的方法检测32例口腔鳞癌组织中上皮源性标记物:上皮-钙黏蛋白(E-cad)及细胞角蛋白(CK)、GSK-3β的表达情况,并与临床病理资料作对照分析。结果在口腔鳞癌组中,GSK-3β、CK及E-cad的表达明显低于正常组织组(P<0.05);T4+T3组中,E-cad、GSK-3β的表达明显低于T1+T2组(P<0.05);在有淋巴结转移组中,E-cad、CK及GSK-3β的表达低于无淋巴结转移组(P<0.05),E-cad与GSK-3β表达呈正相关(r=0.572,P=0.001)。结论口腔鳞癌组织中存在上皮间质化现象,E-cad、CK表达减少,GSK-3β在OSCC与正常上皮组织表达中存在差异,GSK-3β的减少可促进OSCC细胞发生EMT,使口腔鳞癌侵袭及转移,联合上述3个因子,可能为预测OSCC的转移及针对OSCC转移的治疗研究提供一定帮助。

Twist在口腔鳞状细胞癌中的表达及其与鳞状细胞癌上皮间质化的关系

目的观察人口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中上皮间质化相关蛋白及转录因子Twist的表达,研究Twist在OSCC上皮间质化中的作用及OSCC转移情况的相关性,并探讨其在人OSCC中的临床意义。方法通过免疫组织化学及原位杂交的方法分别检测30例OSCC组织中上皮源性标记物E-钙黏蛋白(E-cad)和细胞角蛋白(CK),间质源性标记物N-钙黏蛋白(N-cad),转录因子Twist蛋白及m RNA的表达情况,并与临床病理资料作对照分析。结果免疫组织化学结果:在OSCC组织中,Twist、N-cad的表达明显高于正常组织,E-cad及CK的表达明显低于正常组织(P<0.05);在OSCC中低分化组,Twist、N-cad的表达高于高分化组,E-cad及CK的表达明显低于高分化组(P<0.05);在有淋巴结转移组中,Twist、N-cad的表达高于无淋巴结转移组,E-cad及CK的表达低于无淋巴结转移组(P<0.05)。原位杂交结果:Twist m RNA在OSCC中低分化组,T3、T4组和有转移淋巴结组的表达分别高于高分化组,T1、T2组和无淋巴结转移组,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 OSCC组织中存在上皮间质化,Twist可使肿瘤细胞的侵袭力增加,促进OSCC的浸润和转移。联合检测Twist、E-cad和N-cad的表达可能会更有效地判断和预测OSCC的转移。

程序性死亡受体-1及其配体在口腔鳞状细胞癌中的研究进展

口腔鳞状细胞癌(OSCC)是一种常见的口腔颌面部恶性肿瘤,目前对于OSCC的治疗主要是以手术为主的综合序列治疗,但5年生存率仍不高。因此,对OSCC发病机制及治疗的研究就显得极其重要。免疫检查点程序性死亡受体-1(PD-1)和程序性死亡受体-1配体(PD-L1)是近年来的研究热点,大量研究表明PD-1/PD-L1在多数OSCC微环境中高表达,有助于实现肿瘤的免疫逃逸。本文对PD-1/PD-L1及其抑制剂在OSCC中的研究现状进行综述。

S100A8蛋白在口腔鳞癌中的表达及临床意义

采用免疫组化法和免疫印迹法检测S100A8蛋白在30例正常口腔组织及35例口腔鳞癌组织中的表达。35例OSCC组织中S100A8蛋白阳性表达率为68.5%,在正常组织中的表达率为36.7%(P<0.05),S100A8可能参与OSCC的发生与发展。

钙卫蛋白对口腔鳞状细胞癌细胞侵袭迁移的影响及机制

目的观察钙卫蛋白(S100A8/A9蛋白)对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞迁移能力和侵袭能力的影响,并探求其潜在的相关机制。方法CCK8法检测浓度不同的S100A8/A9蛋白处理细胞24 h后的增殖活性,确定合适浓度后,进行划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。蛋白质印迹法检测细胞内PI3K/AKT信号通路表达情况,并用免疫荧光染色检测p-akt在OSCC细胞中的表达分布情况。RT-qPCR检测各组细胞中与侵袭迁移相关的MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA的表达情况。结果在不同浓度的S100A8/A9蛋白作用下,OSCC细胞增殖活性呈浓度依赖性(P<0.05)。划痕实验、Transwell实验显示S100A8/A9组细胞迁移和侵袭数多于空白组(P<0.001)。抑制剂组细胞迁移和侵袭数明显少于S100A8/A9组和空白组(P<0.001)。蛋白质印迹实验和免疫荧光染色结果显示,p-akt蛋白水平在0.5~1 h内表达上调,3 h后下调(P<0.05)。RT-qPCR结果显示,抑制剂组与S100A8/A9组和空白组对比,抑制剂降低了MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达情况(P<0.001)。结论低浓度S100A8/A9蛋白通过活化P13K/AKT信号通路,促进OSCC细胞的迁移和侵袭。

二甲双胍在口腔癌中的应用及研究进展

研究发现二甲双胍可能在体内和体外具有抑制口腔癌细胞增殖、转移等特性,其在抗口腔癌细胞生长方面有很好的潜力。口腔癌等肿瘤的发病风险及病死率可在二甲双胍的作用下有所改善,主要是通过线粒体复合物Ⅰ、一磷酸腺苷活化蛋白激酶、雷帕霉素等多种生化机制抑制肿瘤细胞增殖和促进其凋亡,还通过抑制肿瘤细胞迁移和侵袭、协同抗癌药物治疗发挥抗肿瘤作用。文章就二甲双胍在口腔癌中的应用及作用机制研究进展作一综述。

S100A8/A9通过Wnt/β-catenin促进口腔鳞癌的侵袭迁移

目的研究外源性钙结合蛋白A8/A9(S100A8/A9)通过Wnt/β-catenin促进口腔鳞癌(OSCC)细胞CAL-27和SCC-25迁移和侵袭能力。方法分别或共同添加S100A8、S100A9蛋白培养CAL-27、SCC-25,蛋白印记法(Western blot)检测β-catenin的表达情况;免疫荧光鉴定添加S100A8/A9蛋白培养CAL-27、SCC-2548 h后β-catenin的表达;加入20μg/ml Wnt/β-catenin通路抑制剂Dickkopf相关蛋白1(DKK-1),Western blot和实时定量荧光PCR(qPCR)检测β-catenin的表达;采用Transwell实验比较正常对照组(Control组)、添加S100A8/A9蛋白组、加入DKK-1组、加入DKK-1并添加S100A8/A9蛋白回复组的细胞侵袭和迁移能力;Western blot实验检测细胞髓细胞瘤病毒癌基因(c-Myc)和细胞周期蛋白D(cyclinD1)的表达。结果S100A8、A9能激活Wnt/β-catenin通路,与S100A8和S100A9分别培养相比,共同培养时CAL-27和SCC-25细胞中的β-catenin表达随着时间上调,qPCR结果与Western blot结果一致;在免疫荧光实验中,SCC-25及CAL-27细胞的细胞质和细胞核内均观察到β-catenin表达量变化,SCC-25及CAL-27细胞内β-catenin蛋白在48 h表达量增加(P<0.05);加入DKK-1,Western blot和qPCR显示β-catenin的表达降低(P<0.001);添加S100A8/A9组细胞迁移和侵袭数多于Control组(P<0.001),添加DKK-1抑制剂组细胞侵袭迁移数量减少,加入DKK-1并添加S100A8/A9蛋白回复组细胞侵袭迁移数量减少,提示DKK-1能够抑制外源性S100A8/A9蛋白对SCC-25及CAL-27细胞的侵袭迁移能力的促进作用,差异有统计学意义(P<0.001);加入Wnt/β-catenin通路抑制剂DKK-1,Western blot实验显示Wnt/β-catenin通路关键分子c-Myc和cyclinD1的表达降低(P<0.001)。结论外源性S100A8/A9蛋白可通过激活Wnt/β-catenin信号通路,促进SCC-25和CAL-27细胞的侵袭和迁移。

钙卫蛋白S100A8/A9对口腔鳞癌细胞增殖和迁移的影响

目的:研究钙卫蛋白S100A8/A9对口腔鳞癌(OSCC)细胞SCC-25增殖和迁移能力的影响。方法:选取人舌鳞状细胞癌细胞SCC-25作为模型细胞,将S100A8和S100A9人重组蛋白以质量比1∶1均匀混合形成钙卫蛋白S100A8/A9,分别以0mg/L(对照组)、5、10、20、30和40mg/L的浓度作用于SCC-25细胞24及48h,观察钙卫蛋白S100A8/A9对SCC-25细胞增殖能力的影响;选取5mg/L钙卫蛋白S100A8/A9处理SCC-25细胞,采用Transwell小室及细胞划痕实验观察S100A8/A9对SCC-25细胞的侵袭及迁移能力的影响。结果:5、10、20、30和40mg/L钙卫蛋白S100A8/A9作用下SCC-25细胞24h时的增殖能力较对照组增强(P<0.05),5、10、20和30mg/L钙卫蛋白S100A8/A9作用下SCC-25细胞48h时的增殖能力表现出相同趋势,但40mg/L钙卫蛋白S100A8/A9作用SCC-25细胞48h时的增殖能力较对照组减弱(P<0.05);Transwell小室实验显示,5mg/L钙卫蛋白S100A8/A9作用的实验组穿过聚碳酸酯膜的SCC-25细胞数目多于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);划痕实验结果显示,5mg/L钙卫蛋白S100A8/A9作用的实验组在24、48及72h后细胞划痕面积明显小于对照组。结论:5mg/L钙卫蛋白S100A8/A9促进SCC-25细胞的增殖和迁移。

S100A9在口腔鳞癌中的水平检测及其临床意义

目的了解在口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织中S100A9m RNA的表达水平,探讨其与口腔鳞癌的关系及临床意义。方法收集40例口腔鳞癌组织和40例正常口腔黏膜组织,运用q-PCR检测肿瘤组织及正常口腔黏膜组织中S100A9m RNA表达情况。结果与正常口腔黏膜组织比较,40例口腔鳞癌组织S100A9m RNA表达明显升高;病理分化程度不同的口腔鳞状细胞癌组织中S100A9m RNA水平差异显著,具有统计学意义(P<0.01)。结论口腔鳞状细胞癌组织S100A9基因在m RNA水平上表达上调,并与其病理分化程度具有明显相关性,可能参与口腔鳞状细胞癌的发生发展过程。

口腔鳞癌中结合珠蛋白与肿瘤血管生成的初步研究

目的:研究结合珠蛋白(Hp)在口腔鳞癌(OSCC)中的表达,并探讨口腔鳞癌中结合珠蛋白与血管生成的关系。方法:收集口腔鳞癌患者手术切除并经病理证实的标本30例,对照口腔黏膜组织标本30例,通过Western blot和免疫组化染色,分析结合珠蛋白在口腔鳞癌中与血管生成的关系。结果:在口腔鳞癌和对照组中,Hp均围绕着血管分布;在口腔鳞癌中,Hp的表达高于正常组织,微血管密度计数高于对照组织。结论:口腔鳞癌中Hp促进肿瘤的血管生成,Hp的表达可能和MVD呈正相关。

钙卫蛋白调控口腔鳞癌细胞侵袭迁移作用机制

目的:研究钙卫蛋白(S100A8/A9蛋白)对OSCC细胞迁移和侵袭能力的影响及其相关机制。方法:CCK8法检测不同浓度S100A8/A9蛋白处理细胞后的增殖活性,确定合适浓度后,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,Western blot和细胞免疫荧光染色检测1μg/ml S100A8/A9蛋白下OSCC细胞内p-p38MAPK表达分布,RT-qPCR检测OSCC细胞中与侵袭转移相关基因的表达情况。结果:1μg/ml S100A8/A9蛋白作用下,OSCC细胞增殖活性增加(P<0.05),细胞迁移和侵袭数增多(P<0.001);S100A8/A9抑制剂组细胞迁移和侵袭数减少(P<0.001);p-p38MAPK蛋白表达上调(P<0.05);S100A8/A9组MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达上调,抑制剂组MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达下调(P<0.001)。结论:1μg/ml S100A8/A9蛋白可能通过活化p38MAPK通路促进OSCC细胞迁移和侵袭,上调MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA。

可变剪接在肿瘤血管生成及肿瘤治疗中的研究进展

可变剪接普遍存在于高等真核生物的基因表达调控中,是其转录后调控和产生蛋白质多样性的重要机制,异常的可变剪接直接参与调控肿瘤发生、发展所涉及的多种生物学过程。血管生成参与维持机体正常的生理过程,在恶性肿瘤的增殖和侵袭转移过程中有重要作用,当促血管生成因子和抗血管生成因子失衡可促进肿瘤血管形成。在肿瘤的发生发展中,血管生成受到许多分子和细胞机制和介质的严格调控,其中血管生成相关基因可变剪接的调控作用不容忽视,基于可变剪接的靶向肿瘤血管生成治疗也展现了一定应用前景。本文将对可变剪接与肿瘤血管生成的相关研究作一综述。

NF-κB在ACC-2和CAL-27细胞中的表达及对^(125)I粒子放射敏感性的影响

目的探讨核转录因子(NF)-κB在腺样囊性癌ACC-2细胞和舌癌CAL-27细胞中的表达及对放射性^(125)I粒子放射敏感性的影响。方法分别用放射性^(125)I粒子对ACC-2细胞和CAL-27细胞进行持续低剂量率体外照射,用噻唑蓝(MTT)法观察细胞活力,用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹分别检测NF-κB中p65亚基的表达情况;然后用NF-κB抑制剂PDTC对NF-κB的活性进行抑制后,用MTT法和流式细胞术检测两种细胞受^(125)I照射后的细胞活力和凋亡情况,分析NF-κB表达量和活性与放射敏感性的关系。结果ACC-2细胞较CAL-27细胞对^(125)I更加敏感(P<0.05)。NF-κB在ACC-2细胞和CAL-27细胞中存在明显表达差异(P<0.05)。受照射后CAL-27细胞中磷酸化p65的水平明显较ACC-2细胞高(P<0.05)。用PDTC抑制NF-κB后,ACC-2和CAL-27细胞的放射敏感性均明显增强(P<0.05)。结论NF-κB在腺样囊性癌ACC-2细胞和舌癌CAL-27细胞中的表达存在明显差异,并与两种细胞对^(125)I粒子放射敏感性有关。