FcγRIIB缺失加重顺铂诱导小鼠的急性肾损伤

目的:探究IgG Fc受体IIB(FcγRIIB)对顺铂诱导小鼠急性肾损伤(AKI)的影响。方法:8～10周龄雄性野生型(FcγRIIB^(+/+)) C57BL/6小鼠、FcγRIIB基因缺失(FcγRIIB^(-/-))小鼠随机分成FcγRIIB^(+/+)对照组、FcγRIIB^(+/+)AKI模型组、FcγRIIB^(-/-)对照组及FcγRIIB^(-/-)AKI模型组,模型组按20 mg/kg体质量腹腔注射顺铂,对照组予同等量生理盐水;注射72 h后,取动脉血检测血清尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)水平; ELISA检测肾组织匀浆因子TNF-α,IL-6,IL-10水平,HE染色观察肾组织学变化。结果:与FcγRIIB^(+/+)对照组及FcγRIIB^(-/-)对照组比较,FcγRIIB^(+/+)AKI模型组及FcγRIIB^(-/-)AKI模型组BUN和Scr含量升高(P <0. 01)、肾组织匀浆TNF-α及IL-6水平升高(P <0. 01),在FcγRIIB^(-/-)AKI模型组这些改变更为明显,差异有统计学意义(P <0. 01); FcγRIIB^(-/-)AKI模型组肾组织匀浆IL-10水平低于FcγRIIB^(-/-)对照组,差异有统计学意义(P <0. 01); FcγRIIB^(-/-)AKI模型组小鼠较FcγRIIB^(+/+)AKI模型组小鼠肾小管坏死症状严重,其肾小管坏死评分更高(P <0. 01)。结论:缺乏FcγRIIB可加重顺铂诱导AKI。

FcγRIIB缺失促进顺铂诱导的急性肾损伤小鼠肾组织巨噬细胞浸润

目的:探究巨噬细胞表面免疫球蛋白Fc gamma IIB受体(FcγRIIB)缺失对顺铂诱导的急性肾损伤(AKI)小鼠巨噬细胞浸润及肾组织损伤的影响。方法:8～10周龄雄性野生型(WT) C57 BL/6及FcγRIIB基因敲除(FcγRIIB-/-)小鼠随机分成WT对照组(WC),WT AKI模型组(WM),FcγRIIB-/-对照组(FC)和FcγRIIB-/-AKI模型组(FM),两个模型组予20 mg/kg体质量腹腔注射顺铂,两个对照组予等量的生理盐水;造模后3 d取血检测血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)、处死小鼠取肾组织HE染色,免疫组织化学检测观察肾组织巨噬细胞(CD68)浸润情况,ELISA检测组肾组织匀浆单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,流式细胞术检测巨噬细胞CD86(M1)和CD206(M2)亚型,荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)测肾组织MCP-1(CCL2)、MCP-1α(CCL3)及MCP-1β(CCL4) mRNA相对表达量。结果:与FC组及WC组比较,WM组及FM组血清BUN和Scr水平升高、HE染色显示肾损伤严重、肾组织MCP-1及TNF-α水平升高、CD68+巨噬细胞浸润增多、CCL2及CCL4 mRNA水平增加,差异均有统计学意义(P <0. 05),且FM组较WM组改变更明显(P <0. 05);流式细胞术结果显示各组小鼠肾组织巨噬细胞亚型差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论:FcγRIIB缺失可能引起肾组织巨噬细胞浸润增多而加重顺铂引起的AKI。

基于MeCP2蛋白和双酶信号放大的DNA甲基化电化学免疫分析

目的:探讨甲基化CpG结合蛋白2(MeCP2)和双酶信号放大电化学免疫传感器用于DNA甲基化定量检测的效果。方法:固定在纳米金(AuNPs)修饰电极表面的探针与靶DNA杂交后,将电极于37 ℃下与MeCP2蛋白溶液孵育,再与葡萄糖氧化酶(GOD)和辣根过氧化物酶(HRP)共同标记的MeCP2-His标签抗体(GOD-HRP/anti-His tag)反应;于含葡萄糖和对苯二酚的检测液中测试其电化学信号,建立电信号大小与DNA甲基化浓度之间的关系,确定该传感器的检测限,考察实验所设计的双酶信号放大策略的放大效果。结果:在1.0×10 -14 ~1.0×10 -7 mol/L范围内,电信号大小与DNA甲基化浓度的对数呈线性关系,回归方程为 I (峰电流值,μA)=1.038 lg C (DNA甲基化的浓度,mol/L)+16.598,相关系数 r 为0.993,检出限为0.1 fmol/L;双酶标记体系的DPV峰电流最高(9.105 μA),单独HRP标记体系的DPV峰电流为1.99 μA,单独GOD标记体系的电信号极其微弱、仅为0.969 μA;重复性实验得 RSD 为4.6%;将传感器置于pH 7.4的PBS中,4 ℃条件下放置28 d后,响应电流大小为最初的93.7%,表明该传感器具有较好的稳定性;与单酶标记体系相比,双酶标记体系产生的电化学信号更强。结论:采用基于MeCP2和双酶信号放大电化学免疫传感器具有较高的灵敏度,能实现痕量DNA甲基化的检测。

基于5-甲基胞嘧啶抗体的DNA甲基化电化学检测

目的:构建一种基于5-甲基胞嘧啶(5-mC)抗体的电化学生物传感器,用于DNA多甲基化位点的定量分析。方法:采用纳米金修饰金电极(AuNPs/Au),以自组装方式依次将单链DNA(ssDNA)、巯基己醇(MCH)和靶DNA连接到AuNPs/Au上制备DNA电化学传感器,经过电化学表征检测电极修饰效果;再以5-mC抗体特异性识别靶DNA中的甲基化位点,并以辣根过氧化物酶标记二抗(HRP-IgG)为信号示踪物,优化杂交时间及抗5-mC抗体浓度;采用差分脉冲伏安法(DPV)分别检测非甲基化与不同数量甲基化DNA的电化学信号,同时考察该方法的重复性与稳定性。结果:电化学表征结果表明电极修饰成功,优化实验条件结果显示最优杂交时间为90 min、最佳抗体浓度为10 mg/L,在该条件下DNA电化学传感器能有效区分甲基化与非甲基化DNA,并且DPV峰电流的大小与DNA甲基化位点的数量呈线性关系,具有较好的重复性与稳定性。结论:制备的DNA电化学传感器能对多个位点的DNA甲基化定量检测,有望成为临床DNA甲基化位点定量检测的有效手段。

血管性血友病因子在感染性关节炎发生发展中的作用

目的:研究血管性血友病因子(VWF)在感染性关节炎发生发展中的作用。方法:采用金黄色葡萄球菌尾静脉注射方法建立小鼠感染性关节炎模型,分为两个阶段实验;第一阶段研究去除VWF对感染性关节炎的影响,使用7只VWF基因敲除小鼠作为实验组,7只NMRI小鼠作为对照组,于建模后第3、4、7、10天观察小鼠的一般情况,计算体质量变化率,评定关节炎指数和关节炎频率;第二阶研究VWF对感染性关节炎的影响,使用NMRI小鼠25只,随机分为Minirin组(n=13)和PBS组(n=12),Minirin组于建模前1 h腹腔注射醋酸去氨加压素(DDAVP),PBS组注射等量PBS处理,分别于建模后第3、4、7、10天观察小鼠的一般情况,称量并计算小鼠的体质量变化率和存活率,评定关节炎指数、关节炎频率和多关节炎频率,计算肾脏肿胀指数及肾脏进行细菌承载量,实验结束时取两组小鼠关节进行影像学检查,并评估骨损伤指数和骨损伤频率;于实验第10天处死小鼠后收集血清检测白细胞介素-6(IL-6)和角质形成细胞衍生的细胞因子(KC)水平。结果:第一阶段实验,实验组和对照组小鼠的体质量变化率比较,差异无统计学意义(P<0.05);从实验第3天起,实验组小鼠关节炎指数和关节炎频率均明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);第二阶段实验,两组小鼠在感染后第3天开始出现不同程度的关节炎症状,关节及皮肤表面出现红肿等炎症变化;影像学显示,Minirin组和PBS组均出现骨损伤;与PBS组比较,Minirin组小鼠存活率、关节炎指数、关节炎频率、多关节炎频率、肾脏脓肿程度、肾脏细菌承载量、骨损伤指数、骨损伤频率以及小鼠血清中IL-6、KC水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:VWF减少是影响金黄色葡萄球菌感染性关节炎的关键因素,DDAVP对关节炎的发生发展无明显作用。

蛋白酶体抑制剂MG132改善胶原诱导性关节炎模型大鼠炎症反应的研究

目的:观察蛋白酶体抑制剂MG132对牛Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠炎症相关因子的影响。方法:48只雌性SD大鼠随机分为对照组、关节炎模型组、MG132干预组。于大鼠左足趾部皮内注射牛Ⅱ型胶原构建关节炎模型,干预组在关节炎模型基础上于皮下注射MG132进行干预。建模后每周观察大鼠关节肿胀程度,并计算关节炎指数。第42天处死大鼠,取大鼠踝关节进行HE染色观察其病理改变;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-10的水平。结果:牛Ⅱ型胶原成功诱导大鼠关节炎病变,MG132干预明显降低了关节炎指数,减少关节损坏、滑膜组织细胞增生及炎症反应,同时降低大鼠血清TNF-α、IL-6表达水平(P<0.01),提高IL-10表达水平(P<0.01)。结论:MG132能减轻胶原诱导性大鼠关节炎相关炎症指标,调节胶原诱导性关节炎模型大鼠血清促炎因子与抑炎因子的表达平衡,改善其炎症症状。