贵阳市15套检测系统测定血清尿素氮的比对调查

目的：了解贵阳市部分医院临床实验室血清尿素氮检测的差异。方法：向贵阳市10家医院临床实验室15套检测系统发放添加不同浓度尿素氮标准物质的冰冻混合人血清样本5支，尿素氮定值为4.7、9.26、13.8、22.06和31.07 mmol/L，测定尿素氮水平，以水平2（含尿素氮标准物9.26 mmol/L）血清样本作为校准品，对15套检测系统进行校准后重新测量尿素氮水平，观察校准前后不同检测系统测定结果的变异（ CV）及测定结果与靶值的偏倚。结果：在统一校准前，实验室间各检测系统尿素氮测定结果的总CV为4.83%-6.8%，封闭检测系统测定结果的CV为3.95%-4.62%，非封闭检测系统测定结果的CV为5.23%-8.08%；统一校准后分别为3.18%-4.71%，1.96%-3.4%及3.59%-5.5%，校准前15套系统测定结果的总CV均高于校准后测定结果的总CV，无论是校准前还是校准后非封闭检测系统测定结果的CV均大于封闭检测系统；在统一校准前，各测定系统对4水平样本测定结果与靶值的相对偏倚分别为0.85%-27.23%、-3.55%-12.88、-3.5%-12.19%、-3.12%-11.04%；统一校准后分别为-1.7%-19.36%、-2.75%-10.06%、-3.26%-5.17、-3.54%-8.56%，比校准前减小。结论：各医院检验科各检测系统血清尿素氮测定结果的变异较大，校准后变异明显下降；封闭检测系统测定结果的可比性好，开放检测系统测定结果可比性较差。

三聚氰胺对雄性小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

目的:探讨三聚氰胺对雄性小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。方法:健康雄性昆明种小鼠50只随机均分为阴性对照组、实验组(三聚氰胺低、中、高剂量组)及阳性对照组,阴性对照组按0.1mL/10g体质量灌胃生理盐水,三聚氰胺低、中、高剂量组分别按400、800、1600mg/kg,阳性对照组腹腔注射环磷酰胺40mg/kg,各剂量组按照体质量每天定时经口给药1次,连续5d,于首次给药后的第35天处死各组小鼠;睾丸病理切片HE染色,观察小鼠睾丸组织的病理学改变,流式细胞术检测小鼠睾丸生精细胞凋亡率,免疫组化法检查凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的阳性表达情况。结果:三聚氰胺各剂量组睾丸形态结构随着染毒剂量的增加出现不同程度的损伤,睾丸细胞凋亡率呈上升趋势,其中高剂量组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);三聚氰胺低、中、高剂量组Bcl-2表达均呈下降趋势,与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);Bax各组表达呈上升趋势,三聚氰胺中剂量组、高剂量组Bax的表达与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Caspase-3表达亦呈上升趋势,三聚氰胺中、高剂量组Caspase-3的表达与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:三聚氰胺促进雄性小鼠睾丸生精细胞凋亡,其机制可能与下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达和上调促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达有关。

慢病毒载体介导的RNA干扰对HDAC2基因表达的影响

目的:构建组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)基因的慢病毒表达载体,研究HDAC2基因在肝癌Hep G2细胞中的表达。方法:将前期构建并鉴定正确的3条重组表达质粒p LKO.1-HDAC2-shRNA 1组、2组、3组及1条阴性对照p LKO.1-HDAC2-shRNAneg和空载体对照p LKO.1,运用脂质体法分别与包装质粒ps PAX2和包膜质粒p MD2.G共同转染人胚肾细胞293T,制备具有感染能力慢病毒颗粒;收集、纯化含病毒颗粒的上清液并感染人肝癌Hep G2细胞,设未处理Hep G2细胞为空白对照,采用Real time PCR和Western blotting检测感染48 h和72 h后Hep G2细胞中HDAC2基因mRNA和蛋白表达水平,鉴定、分析重组质粒的干扰效果。结果:与空白对照组相比,3条干扰序列转染肝癌Hep G2细胞后均能明显抑制HDAC2 mRNA的表达(P<0.05),其中以p LKO.1-HDAC2-shRNA 1组的抑制率更明显,达到82.09%;3条干扰序列均能明显抑制HDAC2蛋白的表达(P<0.05),以p LKO.1-HDAC2-shRNA 1组和3组的干扰效果最明显,但两者相比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:构建的重组质粒p LKO.1-HDAC2-shRNA能从转录水平和蛋白水平有效抑制HDAC2基因在Hep G2细胞中表达。

HDAC2基因RNA干扰载体的构建

目的:构建组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)基因RNA慢病毒干扰质粒载体。方法:对比HDAC2基因序列,设计并合成短发夹RNA(shRNA)干扰靶点序列,克隆入经Age I与EcoRI双酶切后的RNA干扰载体p LKO.1-puro,构建p LKO.1-HDAC2-shRNA重组质粒,采用酶切法和测序法验证重组质粒。结果:成功退火合成3对短发夹RNA序列并将其克隆入p LKO.1-puro载体中,构建重组质粒p LKO.1-HDAC2-shRNA1、p LKO.1-HDAC2-shRNA2及p LKO.1-HDAC2-shRNA3,经酶切鉴定和测序验证重组质粒载体与预期靶序列相同。结论:成功构建HDAC2-shRNA慢病毒干扰载体,为进一步研究HDAC2的功能及应用提供有效工具。