药前酶基因修饰的骨髓间充质干细胞对黑色素瘤靶向治疗的研究

目的:利用药前酶基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)提高恶性黑色素瘤局部化疗效果。方法:从雄性大鼠股骨、胫骨骨髓中分离、培养大鼠BMSCs并鉴定;将细胞色素氧化酶P4502E1(CYP2E1)以含增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的重组腺病毒为载体转染BMSCs,用RT-PCR和荧光显微镜观察绿色荧光的方法来检测目的基因的表达;将人黑色素瘤细胞MV3注射到裸鼠背部皮下,建立裸鼠MV3移植瘤模型,将移植瘤模型分为4组,分别给予CYP2E1-BMSCs及达卡巴嗪,单用CYP2E1-BMSCs,单用达卡巴嗪以及生理盐水治疗,并检测各组的体内局部抗肿瘤效应。结果:成功分离培养大鼠BMSCs,形态上均一,贴壁生长,以长梭形为主,体积小,核浆比大,呈明显的同向性改变,漩涡状盘旋排列;流式细胞术检测提示高表达CD29、CD71,低表达CD34、CD45;体外经不同诱导体系培养后提示具有成骨、成脂、成软骨潜能;鉴定后的BMSCs经重组腺病毒转染后,荧光显微镜可观察到转基因靶细胞EGFP表达,RT-PCR法从mRNA水平检测到目的基因在转基因细胞中表达;荧光显微镜观察治疗后裸鼠的肿瘤及各脏器的组织切片提示CYP2E1-BMSCs能聚集在肿瘤组织及转移灶周围,CYP2E1-BMSCs联合化疗药物组局部凋亡率明显高于单纯化疗组及空白对照。结论:CYP2E1-BMSCs在体内具有协同化疗药物抗肿瘤的作用,并有向肿瘤细胞聚集的特点。

白桦脂酸联合硼替佐米诱导U266细胞凋亡及其机制研究

目的：探讨白桦脂酸（BA）联合硼替佐米诱导多发性骨髓瘤（MM）U266细胞凋亡及其机制。方法：用不同浓度的BA（20、40、60及80 mg/L）、硼替佐米（10、80及320 nmol/L）、40 mg/L BA分别联合10、80及320 nmol/L硼替佐米（联合1~3组）处理U266细胞,MTT法检测上述各组U266细胞增殖抑制率;Real-time PCR和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测40 mg/L BA、80 nmol/L硼替佐米及40 mg/L BA联合80 nmol/L硼替佐米（联合4组）的U266细胞Survivin、Cyto-C、BCL-2及Bax的mRNA和蛋白表达水平。结果：联合1~3组对U266细胞增殖抑制率显著高于BA组和硼替佐米组（P〈0.05）;与硼替佐米组和BA组相比,联合4组U266细胞的cyto-C,Bax mRNA和蛋白表达水平显著升高（P〈0.05）,而Survivin、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著降低（P〈0.05）。结论：BA联合硼替佐米可以促进MM肿瘤细胞凋亡,机制可能与下调Survivin、Bcl-2表达,上调Cyto-c、Bax表达有关。

白桦脂酸联合沙利度胺诱导U266细胞凋亡机制研究

目的:探讨白桦脂酸联合沙利度胺诱导多发性骨髓瘤(MM)U266细胞凋亡的机制。方法:分别用白桦脂酸(20、40、60和80 mg/L,白桦脂酸组)、沙利度胺(10、50和100 mg/L,沙利度胺组)及白桦脂酸(40 mg/L)联合沙利度胺(联合组,白桦脂酸40 mg/L,沙利度胺10、50和100 mg/L)分别处理U266细胞,同期设对照组;MTT法和流式细胞术分别检测不同浓度白桦脂酸组、沙利度胺组及联合组U266细胞增殖抑制率和凋亡率;Real-time PCR检测4组U266细胞中Survivin、Cyto-C、Bcl-2、Bax mRNA的表达,蛋白免疫印迹法检测4组U266细胞中Survivin、Cyto-C、Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果:随着白桦脂酸浓度的增加,U266细胞增殖抑制率增加,差异有统计学意义(P<0.05),最适浓度为40 mg/L;与沙利度胺组相比,联合组U266细胞的增殖抑制率和凋亡率明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与沙利度胺组或白桦脂酸组相比,联合组U266细胞中Survivin、Bcl-2 mRNA的表达明显降低,Cyto-C和Bax mRNA表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与沙利度胺、白桦脂酸组相比,联合组U266细胞中Survivin、Bcl-2蛋白表达明显降低,Cyto-C和Bax蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:白桦脂酸联合沙利度胺可以促进多发性骨髓瘤U266细胞凋亡,其机制可能与凋亡分子Survivin、Bcl-2、Cyto-c和Bax相关。