鲟鱼子酶解产物对酒精损伤肝细胞的保护作用及活性肽虚拟筛选

本研究旨在探究鲟鱼子酶解产物对酒精损伤肝细胞的保护作用,并深入阐明其作用机理。以鲟鱼子为研究对象,结合酶解效率和体外活性等关键指标,对其酶解工艺进行优化。借助酒精损伤HepG2细胞模型,系统研究鲟鱼子酶解产物对肝细胞的保护作用。运用计算机虚拟筛选技术,探索潜在的生物活性多肽序列。研究结果表明,在碱性蛋白酶(1343 U/g)及胰酶(27 U/g)1:1复配酶解8 h的条件下获得的鲟鱼子酶解产物最优,蛋白回收率为49.30%±0.57%,水解度为46.05%±0.92%,ABTS+自由基清除率为51.45%±0.66%。不同浓度下均表现出显著的乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase,ADH)激活率(P<0.05),在5 mg/mL时为168.64%±1.42%。在此酶解条件下制备的产物,0.3~2 mg/mL时与模型组相比能显著提升酒精损伤HepG2细胞内超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量(P<0.05),显著降低丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量(P<0.05)。此外,酶解产物在0.3~2 mg/mL时显著降低丙氨酸氨基转移酶(Alanine Aminotransaminase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate Aminotransferase,AST)的活性(P<0.05)。虚拟筛选结果显示,鲟鱼子酶解产物中的LPG和FLPR等5条多肽显示潜在的酒精损伤肝细胞保护作用。因此,本研究为进一步发展鲟鱼子等水产原料的精深加工利用提供了基础支持。

pH渐变条件下多酶分步连续酶解工艺制备鲟鱼硫酸软骨素与胶原蛋白肽

pH渐变条件下采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶分步连续酶解鲟鱼软骨,同时制备鲟鱼硫酸软骨素和胶原蛋白肽。分别通过温度、酶解时间、酶用量3个单因素实验,研究其对连续酶解效果的影响。综合分析得出最佳条件:碱性蛋白酶酶解温度为45℃,酶解时间为2 h,酶用量为100 U·g^(-1)底物;木瓜蛋白酶的酶解温度为50℃,酶解时间为2 h,酶用量为50 U·g^(-1)底物;菠萝蛋白酶的酶解温度为50℃,酶解时间为2 h,酶用量为30 U·g^(-1)底物。该工艺条件下制备的鲟鱼硫酸软骨素提取率为85%,纯度93%,胶原蛋白肽的提取率为82%,纯度为90%。研究建立的pH渐变条件下多酶分步连续酶解工艺,产率与纯度较国内现有生产方法均有提高,且碱液使用量减少,避免了有机溶剂的引入,从而可以降低生产成本,减轻环境污染负担。