贵州矮马与伊犁马生长激素基因5’侧翼区的结构特征

为了摸索贵州矮马生长发育的调控机制,探明贵州矮马与伊犁马生长激素基因5’侧翼区的结构特征,以4～5龄的贵州矮马和7～8龄的新疆伊犁马为研究对象,采用直接测序法从两种马基因组中克隆了生长激素(GH)基因5’侧翼区的DNA序列,并进行生物信息学分析。结果表明:1)从基因组中克隆的711bp片段为GH基因5’侧翼区序列;2)两个马品种的GH基因5’侧翼区中都存在TATA box、CAATbox、GC box和Octamer位点等真核生物启动子结构;3)从伊犁马GH基因5’侧翼区中检测到1个位于30bp处的突变位点发生了G→C颠换,由此新增了1个转录因子upstream stimulatory factor(USF)结合位点;4)从贵州矮马和伊犁马GH基因的5’侧翼区序列中发现了MZF1、CdxA、Nkx-2、AML-1a和c-Myc等19种共58个转录因子的结合位点。结论:克隆的711bp基因序列中存在大量的转录调控元件。

贵州矮马、西南马和伊犁马刺豚鼠信号蛋白基因的多态性

为了探索贵州矮马、西南马、伊犁马刺豚鼠信号蛋白(Agouti signaling protein,ASIP)基因与马品种毛色之间的关系,采用缺口PCR技术分析了141份贵州矮马、西南马、伊犁马的ASIP基因型,并进行克隆测序。结果表明,扩增出的793 bp和385 bp 2个片段为ASIP基因,793 bp片段中缺失一段11 bp的核苷酸,定义为a基因型,385 bp片段结构完整,定义为A基因型;3个马群体中A等位基因在骝毛中占优势;但aa基因型对应的毛色只有小部分为黑毛,绝大部分为栗毛、骝毛和复色毛,与已知的aa基因型决定黑毛的规律不相符,说明aa基因型可能不是中国马品种黑毛的决定基因型。

利用微卫星标记研究贵州矮马和伊犁马的遗传多样性

试验通过9个微卫星座位对贵州矮马和伊犁马2个品种共84匹马进行了遗传多样性检测,以8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR扩增产物,并用银染法显色,计算各微卫星位点的等位基因频率、有效等位基因数(Ne)、杂合度(H)和多态信息含量(PIC)。结果表明,9个微卫星座位中COR059检出的变异最大,AHT040的变异最小;伊犁马的Ne、H和PIC的平均值高于贵州矮马;2个群体的平均遗传分化系数为0.041。说明2个品种都有丰富的遗传多样性,贵州矮马的基因较伊犁马更为纯合。

贵州地方猪品种对氧磷脂酶1基因的多态性研究

本试验以欧洲猪种为参照,研究贵州地方猪对氧磷脂酶1(paraoxonase,PON1)基因的多态性,探讨基因多态性与地方猪的脂肪沉积之间是否存在相关性。研究采用锚定聚合酶链反应技术对香猪、糯谷猪、萝卜猪和可乐猪共138个贵州地方猪品种PON1基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)进行研究。结果表明,猪群PON1基因的163/165位点出现A/T、G/A变异,515位点检测到C/T突变,均以3种基因型存在。经卡方(χ2)检验,贵州地方猪群PON1基因515位点的基因型频率和基因频率与欧洲猪品种间的差异不显著(P>0.05);163/165位点中,贵州地方猪种A等位基因的频率为83.7%,明显高于欧洲猪品种(25.2%)。贵州地方猪品种PON1基因的163/165位点A等位基因占优势,编码的第55位氨基酸为甲硫氨酸(Met55),与脂代谢异常人群的基因型相同;欧洲猪种以B等位基因为主(P<0.01),编码的第55位是亮氨酸(Leu55),与正常人群的基因型一致。以人PON1蛋白的晶体结构为模板,推导出香猪PON1蛋白的三维结构。地方猪PON1基因变异导致的Met55突变可能影响PON1水解酶活性中心的疏水环境,可能使蛋白的水解酶活性下降,使得地方猪品种的脂肪沉积量和肉质不同于欧洲猪种。由此推测,贵州地方猪品种PON1基因163/165位点存在多态性,可能与地方猪种的脂肪沉积和肉质有一定的相关性。

贵州黄鸡与珍珠鸡杂交后代生长特征研究

家鸡与珍珠鸡分属不同的科,分类地位相差较远,但借助人工授精技术可获得远缘杂交个体,远缘杂交个体常表现出比亲本更为优异的生长、肉质等性状。本文选择贵州黄鸡与珍珠鸡进行杂交,研究杂交鸡的生长、外貌等特点。

农田土壤中毒死蜱降解菌的分离与鉴定

为分离出能降解有机磷农药的有效菌株,从长期施用有机磷农药的土壤中筛选出101株菌株,利用紫外分光光度计在293 nm处测定了分离菌株的降解效率,结合形态学和16 S rDNA序列初步分析了随机挑选的10株分离菌株的遗传多样性。结果表明,长期施用农药的土壤中存在大量能够降解毒死蜱农药的微生物,其中以杆状菌居多,共获得68株杆菌。经初步鉴定,10株菌株分别为葡萄球菌属(Staphylo-coccus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、肠杆菌属(Enterobacter)、芽孢杆菌属(Bacillus)、气单胞菌属(Aero-monas)和黄杆菌属(Flavobacterium)6个属。首次分离出气单胞菌属的毒死蜱降解菌。

三个猪品种为父本对大约克母猪繁殖性能的影响

选择长白猪、杜洛克猪和可乐猪3个猪品种为父本,以大约克猪纯繁(大约克×大约克)和杜洛克猪纯繁(杜洛克×杜洛克)组为对照,研究大约克母猪繁殖性能的变化。结果表明:可乐猪为父本时,大约克母猪的妊娠期缩短了2 d,仔猪的有效乳头数略有下降,但产活仔数(11.0±1.41)头/窝、断奶仔猪数(9.7±1.45)头/窝、断奶育成率(94.41±2.826)%均为最高(P<0.05),死胎数(0.3±0.25)头/窝和死胎率(3.25±3.250)%显著低于其他试验组(P<0.05),总产仔数最高(11.3±1.81)头/窝,说明有良好适应性的可乐猪为父本可明显提高后代的成活率;从窝重上来看,可×大杂交组的初生窝重(14.850±2.443 2)kg/窝、20日龄窝重(45.700±12.3641)kg/窝、断奶窝重(67.500±9.565 7)kg/窝均高于其他试验组。相关性分析显示,死胎数影响仔猪的初生窝重、20日龄窝重及断奶窝重。这些结果说明以可乐猪为父本,可明显改善大约克猪的繁殖力,值得在毕节地区推广应用。

3份高羊茅材料吡咯琳-5-羧酸合成酶基因的结构及酶活性比较

吡咯琳-5-羧酸合成酶(Pyrroline-5-Carboxylate Synthetase,P5CS)是经谷氨酸途径合成脯氨酸的关键酶,脯氨酸的积累有助于提高植物的抗逆性。本研究以黔草一号高羊茅(Festuca arundinacea cv.Qiancao No.1,QC1)、黔草二号细叶高羊茅(F.arundinacea cv.Qiancao No.2n,QC2n)和黔草二号宽叶高羊茅(F.arundinacea cv.Qiancao No.2b,QC2b)为材料,经RT-PCR克隆得到P5CS基因,基因长2 151bp,含有完整的开放读码框(OpenReading Frame,ORF),编码716个氨基酸,与朝鲜碱茅(Puccinellia chinampoensis)P5CS基因的相似性为94%。对3份高羊茅材料P5CS基因编码的氨基酸序列进行比较,有6个氨基酸差异,这些氨基酸均处于P5CS蛋白的谷氨酸激酶(Glu-5-Kinase,G5K)功能区,其中第37、85及142位的氨基酸所带电荷发生了改变。比较干旱处理后3份高羊茅材料叶片的P5CS酶活性及其脯氨酸含量,QC1叶片的P5CS酶活性及其脯氨酸含量最高,其次为QC2n,QC2b最低。说明P5CS中谷氨酸激酶(G5K)功能区重要氨基酸种类的改变,可能影响高羊茅P5CS的酶活性及其脯氨酸的生成量,也是高羊茅抗逆性差异的主要原因。

务川臭蛙皮肤及指趾组织学特征

务川臭蛙仅分布于贵州省务川县溶洞内,属极危物种。以牛蛙为对照,通过形态解剖学和组织学方法对务川臭蛙的皮肤和吸盘结构进行研究,结果显示,务川臭蛙头部背侧、后肢背侧以及躯干腹侧皮肤总厚度分别为372.50μm±29.7μm、453.25μm±13.9μm及237.92μm±31.8μm,各部分皮肤真皮层所占比例分别为(88.86±1.41)%、(90.65±0.81)%和(86.59±1.77)%,其中分布着大量的颗粒腺和粘液腺;前后肢每个指(趾)末端的吸盘,腹面有明显的柱状凸起表皮结构,其间有小孔和粘液腺,是务川臭蛙在溶洞壁上攀爬捕食的结构基础。务川臭蛙具有的特殊生理结构,是珍贵的遗传资源,应当加强科学保护。

两个高羊茅品种苗期抗旱性的比较

黔草1号(Qiancao No.1,QC1)和黔草2号(Qiancao No.2,QC2)是从贵州本地野生高羊茅(Festuca arundi-nace)中选育出的品种。用PEG6000(0 Mpa、-1.5 MPa、-2.5 MPa)处理两个高羊茅品种幼苗4d,以测定叶片中脯氨酸(proline,Pro)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。随着胁迫时间的延长,两个高羊茅的Pro、MDA含量均增加,SOD酶活性先增加再下降;同时,-2.5 MPa处理条件下各参数测定值最大,0 MPa处理最小且差异不明显。表明在干旱胁迫下两个高羊茅都是通过积累较多的脯氨酸、维持较高的SOD酶活性,以清除细胞中的氧自由基,减缓细胞中MDA的生成,保护细胞的结构和功能,叶片细胞对-2.5 MPa胁迫的响应程度高于-1.5 MPa胁迫条件。与QC2相比,QC1叶片中Pro含量和SOD酶活性较高、丙二醛含量较低。说明QC1的抗旱能力强于QC2。

激素对大约克母猪人工催情与同期发情的效果

为筛选出适合毕节地区环境和饲养条件的母猪发情控制技术,进行了不同激素对乏情青年母猪和经产母猪的同期发情处理试验。结果表明,孕马血清促性腺激素(Pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotrophin,HCG)对生理性乏情母猪的人工催情效果最明显,发情率达66.7%;三合激素对子宫发育不良青年母猪的效果较好,发情率达44.4%;对经产母猪进行同期发情处理,用PMSG 600+HCG、苯甲酸雌二醇(Estradiol benzoate,E2)+HCG的效果最好,发情率均达100%。

三个猪品种Myf5基因的克隆及序列分析

为明确猪Myf5基因的蛋白结构及功能位点,从香猪、大白猪和大白×长白杂交猪背最长肌提取总RNA,采用RT-PCR技术克隆Myf5基因,其cDNA长893 bp,包括完整的开放阅读框768 bp,编码255个氨基酸。将所测序列与GenBank上已知猪种序列进行相似性比较,结果表明:香猪Myf5基因中有3个碱基变异,其中2个突变不改变编码的氨基酸为无义突变,1个突变使其编码的氨基酸由甲硫氨酸(M)变为亮氨酸(L)。大白猪没有碱基变化;大白×长白杂交猪Myf5基因中的1个突变,使其编码氨基酸由甘氨酸(E)变为谷氨酸(G)。将香猪与其他物种进行核苷酸和氨基酸编码区序列的相似性分析及生物信息学分析。相似性分析表明,香猪Myf5基因氨基酸编码区序列与绵羊、牛、马、兔、黑猩猩、非洲象和小鼠的相似性较高,均在88%以上,推测Myf5基因在哺乳动物具有一定的保守性;Myf5蛋白二级结构以无规则卷曲为主,其次为α螺旋,偶有β转角。预测Myf5蛋白不含信号肽序列,有29个磷酸化位点。

人工草地不同措施对杂草发生状况的影响

通过在人工草地设置不同管理模式、不同种植类型的2个实验组。对不同管理模式下杂草入侵情况进行分析,用重要值来反映各种杂草的入侵程度。人工管理组分别设置6种种植类型:鸭茅(80%)+菊苣(20%)、鸭茅(80%)+白三叶(20%)、车前草(80%)+白三叶(20%)、黑麦草单播、车前草单播、鸭茅单播,以研究其对杂草抑制能力的大小和物种竞争力的大小。结果表明:共发现杂草18个科38个种,无人工管理组杂草入侵严重,有31种,占81.5%,优势杂草为灰菜、豨签、小飞蓬、空心莲子草;人工管理组有杂草10种,占26.3%,优势种为空性莲子草。不同种植类型下,黑麦草中入侵杂草种类只有4种,密度12.5株/m2,皆为最低,表明黑麦草竞争能力强于车前草和鸭茅。

糯谷猪解耦联蛋白3和心脏型脂肪酸结合蛋白在骨骼肌中的表达和定位

为了探索解耦联蛋白3(uncoupling protein 3,UCP3)和心脏型脂肪酸结合蛋白(heart fatty acid-bind-ing protein,H-FABP)对骨骼肌细胞中脂肪代谢的调节作用,采用RT-PCR和免疫组织化学方法,研究了地方猪品种糯谷猪骨骼肌细胞中UCP3和H-FABP基因的表达和细胞内定位,并与外二元杂交猪相比较,结果表明,糯骨猪的肌细胞及其细胞间隙较大,血清游离脂肪酸和肌内脂肪含量较高;但UCP3和H-FABP基因表达量和蛋白分布密度均较杂交猪低。说明糯谷猪肌细胞中UCP3和H-FABP的表达量较少,肌细胞中ATP的生成效率较高,对脂肪酸供能的依赖性较低,脂肪得以贮存。提示UCP3和H-FABP主要以蛋白量的变化参与猪骨骼肌细胞的脂肪代谢调节,从而影响地方猪种的肉质等性状。

糯谷猪瘦肉率相关基因的表达与骨骼肌细胞生长的相关性

本试验旨在探讨肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶2(cyclin-dependent-kinase 2,CDK2)、胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)和激素敏感脂肪酶(hormone sensitive lipase,HSL)对地方猪品种骨骼肌细胞生长及脂肪代谢的调节作用。选用贵州省地方优良品种糯谷猪为试验材料,外二元杂交猪(长×大)为对照,应用RT-PCR和免疫组织化学方法研究骨骼肌MSTN、IGF2及HSL基因的表达,及其蛋白在肌细胞中的定位和分布,并测定肌细胞中CDK2的活性。结果表明:糯谷猪骨骼肌MSTN mRNA的表达量略高于外二元杂交猪(P>0.05),IGF2基因表达量极显著高于对照(P<0.01),HSL基因表达量低于对照(P<0.05)。骨骼肌细胞中MSTN、IGF2、HSL阳性信号均定位于细胞质,与外二元杂交猪相比,糯谷猪骨骼肌细胞中MSTN和IGF2的表达量较高(P<0.05),HSL的表达量较低(P<0.01),CDK2的活性较低(P<0.01)。相关性分析结果提示,MSTN和IGF2基因的高表达、CDK2的低活性使糯谷猪骨骼肌细胞的数量减少,MSTN和IGF2协作使糯谷猪肌细胞出现一定的增生效应,HSL和IGF2共同促进糯谷猪的脂肪沉积,这些因子综合作用导致糯谷猪的瘦肉率较低。

可乐×大约克后备母猪能量代谢与沉积规律

为给毕节地区内二元后备母猪的科学养殖和制订《毕节高寒山区猪饲养标准》提供技术参数,选用8周龄、体重（18.89±0.61）kg的毕节内二元（可乐×大约克）健康后备母猪19头,进行生长试验和比较屠宰试验。结果表明,20~100 kg体重段消化能（DE）转化为代谢能（ME）的效率为94.82%,维持的代谢能（ME）需要为466.89 kJ/W0.75;20~50 kg、50~100 kg体重段每增重1 kg的代谢能（ME）需要分别为18.80 MJ、28.21 MJ;可乐×大约克后备母猪的能量需要模型：为20~50 kg体重段ME/（MJ/d）=0.467W0.75＋18.80ADG,50~100 kg体重段ME/（MJ/d）=0.467W0.75＋28.21ADG。

香猪H-FABP和UCP3基因的表达与IMF和血清FFA的相关性

为了研究心脏型脂肪酸结合蛋白(heart fatty acid-binding protein,H-FABP)和解耦联蛋白3(uncoupling protein,UCP3)基因对贵州香猪肉质的调节作用,采用RT-PCR和免疫组织化学方法,以外二元杂交猪(大白×长白)为对照,研究H-FABP和UCP3基因在骨骼肌细胞中的表达和细胞定位,并与血清中游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)和肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量进行相关性研究。结果表明:香猪骨骼肌细胞中的H-FABP和UCP3基因表达量及其蛋白分布较杂交猪低,但血清FFA和IMF含量较杂交猪高。说明,香猪骨骼肌细胞中H-FABP的表达量不足,其肌细胞从血液中摄取FFA的量较少;同时香猪骨骼肌细胞中UCP3的表达量较低,因此,进入骨骼肌细胞的FFA消耗较少,大量存在于血液中,使脂肪沉积在肌肉细胞间或皮下等部位的机会增加。通过相关性分析表明,H-FABP基因的表达变化与IMF呈中度正相关,UCP3基因的表达变化与FFA呈中度负相关,表明,H-FABP和UCP3以蛋白量的表达变化为主影响骨骼肌细胞中的脂肪代谢,并以此调节香猪的肉质性状。

基于血浆DNA检测妊娠山羊的胚胎性别研究

为快速进行山羊无创伤产前的性别诊断,同时对家畜的遗传缺陷检测和胚胎移植等研究提供科学依据,采用改良酚/氯仿法提取妊娠母羊血浆DNA,通过双重PCR技术扩增雄性性别决定(sex deter-mining region Y,SRY)基因,并以真核生物延伸生长因-子1(elongation factor 1 alpha,EF-1α)基因为内参照进行试验。结果显示,15例孕有雄性胎儿的孕母羊血浆样品中,13例扩增出SRY基因片段,检出率为86.67%(13/15);孕有雌性胎儿的孕母羊血浆中均未检出SRY基因片段,雌性和雄性检测的正确率为92.86%(26/28)。

毒死蜱降解菌腺苷酸激酶基因的分离及结构特征

本研究以1株有机磷农药毒死蜱的降解菌施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)75为研究材料,从该菌基因组中克隆到腺苷酸激酶(adenylate kinase,ADK)基因。序列长810 bp,包含完整的ADK基因编码区648 bp,编码215个氨基酸组成的ADK75蛋白。经比对分析,施氏假单胞菌75的ADK基因与假单胞菌属的相应基因相似性最高达99.5%;对ADK75的二级和三级结构分析结果显示,ADK75蛋白具有典型的腺苷酸激酶结构特点,与同属的ADK蛋白相比,AMPbd结构域和LID结构域分别有3～13与5～16个氨基酸差异,这些氨基酸变化可能与施氏假单胞菌75能够以毒死蜱作为唯一碳源生长的代谢特点有关。

下司犬线粒体DNA的遗传多样性研究

为调查下司犬种群的遗传资源,采用PCR扩增和测序方法获得10只下司犬线粒体D-loop序列,发现其D-loop 5’端高变区Ⅰ582bp碱基序列的A+T含量明显高于G+C含量,表现出强烈的反G偏倚。并于下司犬高变区Ⅰ序列检测到11个多态位点,构成7种单倍型,单倍型多样性为0.867,说明下司犬线粒体D-loop的单倍型类型丰富,但其高变区Ⅰ的核苷酸多样性(P i=0.005 19)和平均核苷酸差异(k=3.002)却提示,下司犬的遗传多样性较低。聚类分析结果显示,中国家犬有3个母系来源,下司犬起源于C ladeⅠ并与藏獒的亲缘关系最近,因此藏獒可用于对下司犬的选育和复壮。