贵州地方猪种及三元商品猪氟烷基因的检测

旨在对贵州地方猪种"抗应激敏感基因专门化品系"的培育提供技术支撑,运用PCR-RFLP技术对白洗猪、黔北黑猪、宗地花猪、糯谷猪和从江香猪5个地方猪种及三元商品猪共151份样本进行了氟烷基因检测,筛选出猪群中应激敏感基因隐性携带型HalNn、抗应激敏感基因型HalNN和应激敏感基因型Halnn。结果表明,贵州5个地方猪种全为HalNN型;三元商品猪群无Halnn型,HalNn型检出率为52.63%,Haln型等位基因频率为26.32%。

贵州三个地方猪种的系统发育分析

采用PCR产物直接测序方法首次测定贵州3个地方猪种(白洗猪、从江香猪、黔北黑猪)共计57个个体线粒体DNA控制区的全序列,将它们与GenBank上已知的25个国内外猪种一起计算遗传距离,并构建系统发育树。结果表明,3个贵州地方猪种mtDNA D-loop区的序列长度为1 254-1 314 bp之间,贵州地方猪种遗传距离在0.002 9-0.007 2之间,白洗猪与黔北黑猪、从江香猪之间的距离最大,均为0.007 2。系统发育分析的结果支持中国家猪分别有南北两个母系起源的观点,且各地方猪种之间可能有基因交流。

贵州白山羊DQB1基因外显子3的多态性及生物信息学分析

为筛选贵州白山羊DQB1基因外显子3序列的SNPs位点,并进一步研究MHC基因多态性与山羊免疫性状的相关性奠定基础,以贵州白山羊为研究对象,采用混合DNA池与直接测序相结合对DQB1基因外显子3多态性及生物信息学进行分析。结果表明:贵州白山羊DQB1基因外显子3中有17个SNPs位点,其中,G+115A(Arg→Gln)、C+156T(Leu→Phe)、G+206A(Met→Ile)、G+238A(Arg→His)和T+270A(Ser→Thr)位点为错义突变;C+20T位点具有最小的自由能,其RNA二级结构最为稳定;各基因型蛋白质二级结构均由β折叠和无规则卷曲构成且比例相近,易于抗原决定簇的形成;参考序列与错义突变5种基因型均存在5段抗原决定簇,且均具有较高的平均抗原倾向性。

贵州白山羊线粒体转录因子B2基因在组织中的表达

为探明线粒体转录因子B2(TFB2 M)基因在贵州白山羊组织中的表达规律,采用实时荧光定量PCR技术测定TFB2 M基因在贵州白山羊心、肝、脾、垂体和下丘脑组织中的表达量。结果表明:目的基因TFB2 M和内参基因β-actin的熔解曲线均呈单一峰形,说明所选条件可准确定量TFB2 M基因在贵州白山羊各组织中的相对表达量。TFB2 M基因在贵州白山羊心、肝、脾、垂体和下丘脑组织中的相对表达量分别为1、0.5092、3.9228、1.9138和0.6744,表现为脾>垂体>心>下丘脑>肝。

三种癌细胞株中Bloom综合征解旋酶(BLM)的表达水平高于正常细胞

由于Bloom综合征解旋酶（Bloom’s syndrome helicase，BLM）基因缺陷引起的Bloom综合征（Bloom’s syndrome，BS）是一种罕见的常染色体隐性遗传病，BS患者的临床特征表现为严重的生长迟缓、学习障碍、免疫缺陷等。BLM解旋酶在睾丸和胸腺中高表达，另一方面，BLM基因的突变和高表达与肿瘤发生相关，如结肠癌、肺癌、白血病等。本研究观察了A549人肺癌细胞、SGC7901人胃癌细胞、PC3人前列腺癌细胞与HL-7702[L-02]人正常肝细胞中，BLM解旋酶在mRNA水平及蛋白水平表达量的差异，为寻找新的特异分子治疗靶点提供依据。

敌百虫致小鼠外周血淋巴细胞DNA-蛋白质交联作用研究

为探讨敌百虫致DNA-蛋白质交联作用,以昆明小鼠为受试动物,敌百虫按0、20、40、60 mg·kg-14个剂量水平,灌胃染毒小鼠2周。第5组以提取的正常小鼠外周血淋巴细胞经50μmol·L-1的H2O2处理为阳性对照组。采用经改进的彗星试验方法来检测染毒后外周血淋巴细胞DNA-蛋白质交联效应。结果表明,与空白组相比,各敌百虫染毒组都能引起DNA损伤作用(P<0.01)并引起一定程度的DNA-蛋白质交联效应,在较高浓度(40、60 mg·kg-1)时DNA-蛋白质交联尤为明显,存在一定的潜在突变风险。

糖萜素对杜长大杂种猪生长性能及肉质的影响

为研究糖萜素对杜长大杂种猪生长性能及肉质的影响,试验选取胎次和日龄相近、生长发育良好、体重在20 kg左右杜长大三元杂种仔猪30头,公母对半,随机分为3组,即对照组、糖萜素组、益生素组,每组10头,试验期为120 d,肥育并进行屠宰性能测定。结果表明,在生长肥育猪饲粮中添加糖萜素,能明显减少疾病,提高猪生长速度,降低料重比;屠宰测定表明,糖萜素能提高肥育猪屠宰性能,改善猪肉品质。

Mg^(2+)对Bloom综合症解旋酶与G4DNA结合的影响研究

利用荧光偏振技术检测了Mg2+对G4DNA、BLM-G4DNA复合物和BLM642-1290解旋酶与G4DNA结合的影响.结果表明,G4DNA荧光偏振值随着Mg2+浓度的增加而增加(P<0.01);BLM-G4DNA复合物的荧光偏振值随着Mg2+浓度的增加出现下降—升高—下降的变化趋势(P<0.01);G4DNA与BLM642-1290解旋酶结合的荧光偏振值随着Mg2+浓度的增加而逐渐下降(P<0.01);分析不同Mg2+浓度下两种分子结合的Kd值,发现Mg2+浓度为3.0mmol/L时,BLM642-1290解旋酶与G4DNA最容易结合,表明适量Mg2+浓度会促进BLM642-1290与G4DNA的结合,但会引起两种分子结合的形状、流动性和电荷等性质的改变.这些结果可为进一步研究BLM解旋酶对G4DNA的作用机理提供相关资料.

竹乡乌骨鸡与珍珠鸡人工授精效果观测

本试验将人工授精技术应用于竹乡乌骨鸡与珍珠鸡的远缘杂交中,探讨不同输精时间间隔对种蛋受精率的影响。试验以10只竹乡乌骨鸡作父本,150只珍珠鸡作母本,进行一周一次人工授精和两次人工授精的种蛋受精率比较。结果显示一周二次人工授精的种蛋受精率比一周一次高9.18%,差异极显著(P<0.01),一周二次人工授精效果优于一周一次。

卵泡刺激素诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究

文章探讨了卵泡刺激素(FSH)诱导鸡胚胎干细胞(ESCs)向雄性生殖细胞分化的作用效果。首先对FSH的适宜诱导浓度进行筛选,再将传至2代的ESCs,在RA和支持细胞诱导的基础上添加适宜浓度的FSH进行诱导,通过形态学观察、实时荧光定量PCR及免疫细胞化学对诱导结果进行检测。筛选出适宜的FSH浓度为25 ng/mL。单独使用FSH诱导,未出现类SSCs样细胞;FSH与支持细胞诱导至第6天出现类胚体,至第12天,出现少量精原样细胞;FSH联合支持细胞和维甲酸(RA)进行诱导,至第2天出现类胚体,第12天出现类SSC样细胞。实时荧光定量PCR结果显示,FSH+支持细胞组、FSH+支持细胞+RA组中,Stra8、integrinβ1、Dazl表达量都持续上调,ESCs标记基因Nanog、Sox2表达量均呈持续下调趋势。添加FSH的诱导组中Stra8的表达量相对于各对照组上调显著。FSH单独诱导不能引起ESCs向雄性生殖细胞分化,但具有促进支持细胞和RA诱导ESCs向雄性生殖细胞分化的作用效果,该结果为进一步研究雄性生殖细胞的形成和调控机制提供理论基础。

兴义矮脚鸡GDF5基因外显子2的克隆及与胫骨长相关性研究

为探讨GDF5基因外显子2的SNPs以及与鸡胫骨长的关联性,以兴义矮脚鸡GDF5基因为研究对象,采用基因克隆技术得到外显子2序列,直接测序后检测SNPs,并与胫骨长进行相关性分析。结果表明,共检测到5个SNPs,前4个位点(C146A、C296T、G326A和C578G)均为两种基因型,第5位点(C704T)为三种基因型。基因型与胫骨长性状关联分析显示,C578G位点CC基因型个体胫骨长显著高于GC型个体(P<0.05),其余SNPs均差异不显著(P>0.05)。研究表明,GDF5基因可能是影响鸡胫骨长的主效基因或与主效基因相连锁,C578G位点有望成为胫骨长性状选择的分子遗传标记,为家禽的选育提供理论依据。

敌百虫致小鼠外周血淋巴细胞遗传毒性研究

为研究敌百虫致小鼠外周血淋巴细胞遗传毒性,将小鼠外周血淋巴细胞悬液随机分成4组,3个试验组分别用30%敌百虫乳剂按30,150,300 mg/L浓度对外周血淋巴细胞进行体外染毒,同时设空白对照组,采用慧星试验对小鼠外周血淋巴细胞DNA损伤进行检测。结果表明:敌百虫可致外周血淋巴细胞DNA损伤,随着染毒剂量的增加,DNA受损程度加剧,并呈现一定的剂量-效应关系。

糖萜素对外三元猪生长及肉质的影响

为研究糖萜素对外三元杂交猪屠宰性能的影响,试验选取胎次和日龄相近、生长发育良好、体重在20 kg左右的"杜长大"三元杂交仔猪30头(公母各半)随机分为3组,每组10头,即1组(对照组)、2组(糖萜素)、3组(黏杆菌+杆菌肽锌),进行120 d的育肥试验;育肥试验结束后进行屠宰性能测定。结果表明:在日粮中添加糖萜素能明显减少生长育肥猪腹泻病的发生,提高猪生长速度,降低料重比,提高饲料转化率;还能提高育肥猪屠宰性能,改善猪肉品质。

前列腺癌PC3细胞表达鸭SREBP1基因的分析

为了探讨鸭SREBP1基因对前列腺癌PC3细胞增殖的影响,通过构建携带His标签鸭SREBP1基因第310位至403位氨基酸序列的真核表达载体p EGFP-N3+SREBP1+His,转染前列腺癌PC3细胞,空载体p EGFP-N3为对照,结果表明:p EGFP-N3+SREBP1+His和空载体均成功转染前列腺癌PC3细胞,p EGFP-N3+SREBP1+His转染效率高于空载体,通过检测转染48 h的细胞数量和SREBP1表达量,p EGFP-N3+SREBP1+His组细胞数为0.82×10~6个,SREBP1基因表达量为124.128 pg/m L;空载体组细胞数为0.74×10~6个,没有检测到His标签表达量。研究结果揭示,鸭SREBP1基因第310位至403位氨基酸序列对前列腺癌PC3细胞的增殖有促进作用。

黔北麻羊GDF9基因多态性与产羔性能关系的研究

为了研究黔北麻羊GDF9基因多态性与产羔性能的关系,试验采用直接测序的方法对黔北麻羊的生长分化因子9(GDF9)基因外显子2核苷酸多态性及其与产羔数的关系进行了分析。结果表明:在黔北麻羊群体GDF9基因外显子2的959 bp处存在A→C的碱基突变,导致所编码的氨基酸由谷氨酰氨(Gln)突变为脯氨酸(Pro)。通过最小二乘法分析SNPs及其与产羔数的关联,结果表明:该突变对黔北麻羊平均产羔数有极显著影响(P<0.01),平均产羔数在所检测到的2种基因型中呈现出AC>AA,AC基因型比AA基因型平均产羔数多0.85只,突变杂合子个体产羔数极显著增加(P<0.01)。

斑嘴野鸭圈养模式下行为研究

为探讨斑嘴野鸭在圈养模式下的行为习性,制订福利式的饲养方法,合理开发利用这一优良品种,研究采用Media Record进行跟踪记录,并用Observer XT(11.5)行为学软件对斑嘴野鸭的行为进行定义,对行为时间分配和持续时间进行统计分析。结果表明:斑嘴野鸭白天主要以站立(0.297 8)为主,其次是卧立(0.275 1),插翅(0.154 3)、理羽(0.072 2)、摆头(0.066 3)、伸头(0.057 1)、采食(0.024 9)、行走(0.018 8)、饮水(0.009 9)和摆尾(0.001 4)、爪抓(0.004 6)等行为所占比例较少。休息时间在12:00—13:00达到明显峰值,9:00—10:00和15:00—16:00是全天活动高峰期。理毛高峰出现在13:00—16:00,采食高峰出现在13:00—14:00。饮水曲线趋于平缓,饮水高峰出现在8:00—9:00和14:00—15:00。站立高峰在9:00—10:00和15:00—16:00,11:00—12:00达到峰谷。对28种行为类型之间的逻辑紧密度转换关系的分析结果表明,摆头与插翅和理羽有一定相关性,卧立与站立、站立与行走、伸头与摆头具有相关性,其他行为之间没有逻辑转换关系。相关分析结果表明,戏水与快走、饮水与警觉以及摆爪与连续点头呈极显著正相关(分别为R=0.981,R=1.000,R=1.000;P<0.01),卧立与站立和点头以及采食与飞翔之间呈极显著负相关(分别为R=-0.996,R=-0.895,R=-0.965;P<0.01)。

猪场B超早期妊娠诊断声像图识别研究

为了在养殖过程中更好地利用B超对母猪进行早期妊娠诊断,试验采用便携式兽用B超仪对300头次母猪进行早期妊娠诊断;同时对11头母猪进行了跟踪检测,得到各时期的声像图及相应的诊断数据。结果表明:B超早期妊娠诊断准确率在配种后21天即可达到100%。

ESRα基因外显子7和外显子8的多态性分析

为了寻找繁殖主效基因雌激素受体(ESR)α基因新多态性(SNP)位点,试验采用PCR-单链构象多态性(RCR-SSCP)以及测序的方法检测了60头糯谷猪母猪ESRα基因外显子7和外显子8的多态性。结果表明:在外显子7中未发现多态性,外显子8中发现了2个新的多态性位点,在3'UTR区检测到1个多态性位点,分别是472位点的胸腺嘧啶(T)→胞嘌啶(C)突变,562位点的腺嘌呤(A)→鸟嘌呤(G)突变,623位点的T→C突变,A、B基因频率分别为0.816 7,0.183 3,初步推测这3个位点具有连锁效应。

绿壳蛋鸡ESR1基因与早期产蛋性能的关联性研究

为了提高绿壳蛋鸡的产蛋性能,筛选出有利的分子辅助标记,试验采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和DNA测序技术对124只长顺绿壳蛋鸡雌激素受体1(ESR1)基因进行多态性分析,并与其产蛋性能进行关联性分析。结果表明:绿壳蛋鸡群体ESR1基因In4片段出现CC、CD和DD 3种基因型,其中C为优势等位基因,该位点群体遗传处于Hardy-Weinberg非平衡状态(P<0.05),多态信息含量(PIC)为0.359 5,遗传杂合度(He)和有效等位基因数(Ne)分别为0.474 6,1.903 3。基因型与产蛋性能关联性分析显示,3种基因型个体间的开产体重、开产蛋重、平均连产天数差异均不显著(P>0.05),而CC与DD基因型个体的开产日龄和300日龄产蛋量均存在显著差异(P<0.05)。在该试验群体中,选择DD基因型个体可增加产蛋量,提高产蛋性能。