基于环境DNA宏条形码的红枫湖鱼类多样性研究

2020年11月,按地理区域将贵州省清镇市猫跳河梯级水电站拦河而成的典型喀斯特高原型深水人工水库红枫湖水域划分为南湖(S1、S2、S3)和北湖(S4、S5、S6)共6个采样点,利用eDNA(environmental DNA,eDNA)宏条形码技术探究了贵州喀斯特高原水域鱼类多样性。结果:共监测到鱼类28种,隶属于4个目、13个科、25个属,其中梭鲈属(Sander)、鲚属(Coilia)、鳜属(Siniperca)、乌塘鳢属(Bostrychus)和鲈属(Perca)为优势属;南北湖鱼类群落空间分布差异性不显著(P>0.05),但各样点鱼类群落组成差异明显,其中S2鱼类群落多样性指数最高(Chao1618.9;Shannon 3.16),S6鱼类群落多样性指数最低(Chao1190.87;Shannon 0.98)。在所有鱼类组成中,鲈形目共13种,占46.43%,这表明该水域可能受人工养殖及引种放流等影响而导致外来物种入侵。结果表明,环境DNA技术可用于喀斯特高原水域的鱼类多样性及空间分布研究,并丰富了红枫湖鱼类基础资料及调查手段。

长脂拟鲿年龄与生长研究

研究长脂拟鲿的年龄和生长特征,为开展其人工养殖、种质鉴定以及资源的利用与保护提供基础资料。样品鱼于2013年2-10月采自贵州境内沅江水系氵舞阳河,共193尾,体长94~209 mm、体重9.7~59.2 g。以脊椎骨、匙骨、鳃盖骨、胸鳍棘等为年龄鉴定材料,研究了长脂拟鲿的年龄和生长特性,阐述年轮特征,计算了相对生长率、瞬时生长率、生长常数、生长指标等生长参数。脊椎骨椎体的年轮标志最清晰,其各个生长年带的径向宽度近似相等,为长脂拟鲿年龄鉴定的理想材料;脊椎骨椎体年轮为疏密型年轮,年轮形成的时间为3-7月。氵舞阳河长脂拟鲿渔获物年龄组成为1~8龄,2~4龄为优势年龄组,占总样本量的84.97%。长脂拟鲿体长与脊椎骨轮径关系的拟合方程为L=60.91R+65.709,体长与体重关系的拟合方程为W=0.00074 L2.0935。von Bertalanfy、Gompertz和Logistic生长方程对长脂拟鲿体长、体重生长的拟合度均较高(r^2>0.98),以von Bertalanfy生长方程拟合度最高。长脂拟鲿von Bertalanfy生长方程为:L_t=364.32[1-e^(-0.058(t+4.001))],W_t=170.49[1-e^(-0.058(t+3.994))]2.0935。生长拐点年龄为8.73龄,拐点年龄时体长、体重分别为190.22 mm、43.74 g。长脂拟鲿生长可以划分为1~5龄、6~7龄两个不同的生长阶段。长脂拟鲿属生长缓慢鱼类,其生长为异速生长。

基于线粒体DNA D-loop的都柳江鲇形目两种经济鱼类种群遗传多样性研究

以采自贵州都柳江的鲇鱼、斑鳠各39尾个体为样品,采用PCR和DNA测序技术,研究了这两种鱼类线粒体DNA D-loop的结构和种群遗传多样性。获得了鲇鱼、斑鳠D-loop 5′端长度分别为544～545bp、546～547bp的DNA序列,并分别检测到58、15个变异位点。同时,识别了该2种鱼类D-loop终止序列区和中央保守区的核心序列,在中央保守区之后均有一个Poly-T结构。都柳江鲇鱼、斑鳠种群D-loop序列中,分别有51、12个多态位点,并分别定义了11、8种单倍型。都柳江鲇鱼、斑鳠种群单倍型多样性指数、核苷酸多样性指数和平均核苷酸差异数分别为0.772、0.02301、12.451和0.331、0.00131、0.714。目前,都柳江鲇鱼种群遗传多样性较为丰富,具有良好的种质价值和保护前景;斑鳠种群遗传多样性贫乏,保护和恢复该种群的数量和遗传多样性刻不容缓。

引种菲牛蛭摄食与生长的研究

2014年,将广西的菲牛蛭（Hirudinaria manillensis）引种入贵州开展驯养试验,对菲牛蛭的摄食与生长进行了研究。结果显示：（1）引种菲牛蛭摄食系数随着体重的增加而降低,其中在体重小于1 g时摄食系数最大,为0.89±0.60,体重在1～4 g时为0.54±0.45,体重在4～10 g、11～17 g的摄食系数分别为0.37±0.26、0.24±0.18。（2）引种菲牛蛭平均快速代谢期随着体重的增加而延长,体重小于1 g时平均快速代谢期最短,为（3.30±0.82）d,体重在1～17 g之间时快速代谢期相近,约为6～7 d。（3）引种菲牛蛭增重率随体重的增加呈现下降趋势,其中体重小于1 g时增重率最大,可达626.67%,1～4 g时增重率下降最快,增重率为263.96%,11～17 g增重率最小,仅有64.01%。（4）体重在小于1 g、1～4 g、4～10 g、大于10 g几个阶段的饲料系数分别为209.57%、225.59%、237.12%和294.65%。研究表明,随着体重的增加引种菲牛蛭饲料系数有增加的趋势;引种菲牛蛭摄食系数在体重小于1 g、1～4 g、4～10 g、大于10 g等几个生长阶段有明显差异,投喂周期存在差异,可以以此作为菲牛蛭分级饲养的依据。

低等脊椎动物血细胞研究概况

对低等脊椎动物血细胞分类、发生和功能的研究进展进行了综述。低等脊椎动物血细胞分红细胞和白细胞2类。其中白细胞又可分为淋巴细胞、血栓细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和浆细胞等。有关低等脊椎动物血细胞发生的研究报道较少,并主要集中在鱼类。鱼类血细胞发生的部位包括胸腺、头肾、体肾、脾脏、肝脏和肠粘膜下层等。血细胞的功能与维持动物机体内环境的稳定性有密切关系,低等脊椎动物的血细胞还具有吞噬、分泌等功能,并参与了机体伤口的修复和免疫防御等生理过程。

水产动物组织胚胎学课程教学模式的改革

对水产动物组织胚胎学课程教学模式的改革内容进行分析总结,并从课程理论的授课内容、课程教学手段、实验课授课内容三个方面提出了详细的改革方向,以期在以后的教学实践中能取得较好的效果。

基于AFLP分析的乌江四川裂腹鱼种群遗传结构及多样性研究

本研究采用扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记技术,以筛选出的7对引物,对采自贵州乌江的30尾四川裂腹鱼(Schizothorax kolzovi)的遗传结构和多样性进行分析。结果显示,用7对引物获得的扩增片段数为5~73,扩增片段长度范围为69~500 bp,共检出扩增位点856个。其中,多态位点796个,占扩增总位点数的92.99%。该种群含30个基因型,其观测等位基因数(N_(a))、有效等位基因数(N_(e))、Nei多样性指数(H)、Shannon信息指数(I)平均值分别为1.9336、1.3388、0.2122和0.3387。个体之间遗传距离为0.1691~0.5319,平均为0.3068。根据遗传距离,采用UPGMA法和NJ法得到了拓扑结构相似的30个个体的系统树,该系统树由2个分支组成。其中,个体1为一个分支,而其余29个个体聚为另一个分支。乌江四川裂腹鱼种群具有较丰富的遗传多样性。然而,受水电站建坝、河流污染和酷渔滥捕的影响,该种群分布区已缩小,种群数量减少,处于生态受威胁状态,需要开展对乌江四川裂腹鱼种群及种质资源的保护。

10种复方中草药对鲟源海豚链球菌的体外抑菌效果研究

为筛选对鲟源海豚链球菌(Streptococcus iniae)有较好抑菌作用的复方中草药。采用牛津杯对九味羌活汤、桑菊饮等10种具有抑菌效果的复方中草药进行海豚链球菌体外抑菌试验,并通过二倍稀释法测定了10种复方中草药对海豚链球菌的最小抑菌质量浓度(MIC)和最小杀菌质量浓度(MBC)。结果表明:鲟源海豚链球对九味羌活汤和桑菊饮高度敏感,抑菌圈直径分别为(24.08±3.92)、(23.92±2.34)mm,其MIC值均为62.5 mg/ml,MBC值均为125 mg/ml。鲟源海豚链球菌对养阴清肺汤、八正散、五苓散和大青龙汤4种复方中草药中度敏感,而对槐花散、藿香正气散、麻黄杏仁甘草石膏汤和痰饮丸4种复方中草药低度敏感。九味羌活汤和桑菊饮对鲟源海豚链球菌具有较好的抑菌、杀菌效果。

10种复方中草药对鲟源海豚链球菌体外抑菌实验的研究

我国是鲟鱼养殖量最大的国家,也是鲟鱼种类分布较多的国家,鲟鱼具有极高的经济价值和科研价值,然而一直以来疾病是威胁众多养殖户的一个重大问题。细菌性疾病在我国鱼类的养殖中尤为普遍与常见,广大的养殖户都在使用抗生素类药物进行治疗,过多和长期性地使用抗生素类药物不仅会加剧养殖水环境的破坏,还会使病原菌产生耐药性,不利于病害的治疗。因此,寻找能替代抗生素且不会污染养殖水域环境的药物成为水产养殖的一个重要研究方向。中草药不仅具有一定的抗菌效果,而且还具有来源广泛、毒副作用小、残留少、污染小等优点,成了替代抗生素的优选。

秦岭细鳞鲑稚鱼对底质颜色、光照强度及光色的选择行为

光照、底质颜色是影响鱼类行为、生存的重要环境因子,为探究秦岭细鳞鲑(Brachymystax tsinlingensis)稚鱼对光照及底质颜色环境偏好,本研究以秦岭细鳞鲑子代为实验鱼[平均全长为(3.31±0.67)cm;平均体重为(0.42±0.18)g]开展了秦岭细鳞鲑稚鱼对底质颜色、光照强度及光照颜色的选择行为。结果显示,秦岭细鳞鲑稚鱼个体与群体均对黑色底质偏好明显;个体对3种光照强度(弱光区为1~5lx,过渡区为5~10lx,强光区为10~25lx)均无明显趋向性(P>0.05),而群体对强光(10~25 lx)有明显趋避性;在相同光照强度(1~3 lx)下,个体对4种光照颜色(黄、红、绿和蓝)无明显趋向性(P>0.05),而群体对绿光有明显趋避性(P<0.05)。秦岭细鳞鲑个体和群体对光照强度和光照颜色的差异性表现可能与其信息传递特征或环境反应机制不同有关,而个体和群体均偏好黑色底质,其偏好光照强度为1~10lx,对绿光具有趋避性,这可能与该物种生活环境特征相关。本研究结论可进一步为秦岭细鳞鲑苗种培育和增殖放流环境选择提供参考。

濒危鱼类稀有白甲鱼清水江种群mtDNA D-loop序列多态性

采用PCR、克隆结合DNA测序技术对分布于贵州清水江的30尾稀有白甲鱼个体mtDNA D-loop 3′端共计478 bp的碱基序列进行了测定分析。该序列共发现了25个多态位点,约占其核苷酸总数的5.23%。其中23个为转换位点(A-G,C-T),2个为转换与颠换同时存在的位点。30尾个体分属18种单倍型。稀有白甲鱼mtDNA核苷酸多样性(π)为0.010 7,平均核苷酸差异数(K)为5.092。单倍型多样度(H)为0.940,单倍型间平均遗传距离(P)为0.014。用单倍型间遗传距离构建的NJ系统树由2个支系组成。稀有白甲鱼清水江种群mtDNA D-loop序列存在着丰富的多态性,表明该种群具有丰富的遗传多样性。

稀有白甲鱼含肉率及肌肉营养成分分析

试验结果表明,稀有白甲鱼含肉率为69.92%;肌肉中蛋白质、脂肪和灰分含量分别为16.58%、2.05%、0.99%;肌肉中17种常见氨基酸(除色氨酸)总含量(占肌肉干重)为77.89%。其中必需氨基酸含量为36.27%,占氨基酸总含量的46.56%。必需氨基酸与非必需氨基酸含量的比值为0.87。鲜味氨基酸含量为26.26%,占氨基酸总含量的33.70%。必需氨基酸指数为70.44。缬氨酸和异亮氨酸分别为第一、二限制性氨基酸。

梵净山及邻近地区鱼类资源的现状

为了了解梵净山及邻近地区鱼类资源的现状及变化趋势,2001–2003年对这一地区乌江水系和沅江水系鱼类进行了系统的调查。本调查设立了19个调查点,共采集鱼类标本3614号,经鉴定为85种(亚种),分属5目14科61属。除胡子鲇(Clariasfuscus)为外来种外,其他均为土著鱼类。海南拟餐(PseudohemiculterHainanensis)、峨眉后平鳅(Metahomalopteraomeiensisomeiensis)和福建纹胸鱼兆(Glyptothoraxfukiensisfukiensis)为本地区土著鱼类新记录种。鱼类组成以鲤形目鲤科为主体,并以适应急流生活的鱼类占多数,小型野杂鱼类所占比例较高。乌江水系和沅江水系鱼类物种组成存在差异,分别属于长江上游鱼类区系成分和长江中下游区系成分。结果还表明这一地区土著鱼类物种数呈下降趋势,其中鲤形目鱼类物种数减少较多。导致该地区土著鱼类物种数下降的原因是酷渔滥捕和水域生境的破坏。

都柳江粗唇种群线粒体DNA Cyt b基因和D-loop序列组成及遗传多样性

以采自都柳江40尾粗唇（Leiocassis crassilabris）个体为样品,采用PCR和DNA测序技术对粗唇都柳江种群Cyt b基因和D-loop序列进行了分析。获得了长度分别为1 118 bp、776～778 bp的粗唇Cyt b基因、Dloop序列。2段序列的碱基组成均为A＋T的含量高于G＋C的含量,但Cyt b基因碱基变异率（0.27%）显著低于D-loop的碱基变异率（3.34%～3.35%）。对粗唇D-loop序列结构进行了分析,识别了其终止序列区、中央保守区和保守序列区等的特征序列。都柳江粗唇40个个体Cyt b基因、D-loop序列中分别有3、20个多态位点,分别定义了4、10种单倍型。都柳江粗唇种群Cyt b基因和D-loop序列的单倍型多样性指数、核苷酸多样性指数和平均核苷酸差异数分别为0.146、0.000 13、0.150和0.404、0.003 17、2.444。都柳江粗唇种群遗传多样性较低,开展该种鱼类种群遗传多样性的研究和保护十分必要。

都柳江鲇形目两种经济鱼类种群Cyt b基因的遗传多样性分析

【目的】研究分析贵州都柳江鲇、斑鳢种群细胞色素b基因（Cyt b）的遗传多样性,为都柳江鲇形目经济鱼类资源的保护和开发利用提供参考依据。【方法】以PCR扩增都柳江鲇、斑鳠种群的Cytb基因序列,经双向测序、拼接后采用相关在线软件进行序列变异及遗传多样性分析。【结果】都柳江鲇、斑鳠种群Cyt b基因序列均为1122 bp,分别检测到46和15个变异位点,对应定义为11个单倍型（NHap1-NHap11）和10个单倍型（BHap1-BHap10）。都柳江鲇、斑鳠种群的单倍型多样性指数、核苷酸多样性指数分别为0.646、0.00899和0.610、0.00101。都柳江鲇、斑鳠种群Cytb基因序列均编码374个氨基酸,包含20种氨基酸,以亮氨酸平均含量最高（17.65%和16.58%）、半胱氨酸平均含量最低（0.80%和0.78%）。4种碱基在这两种鱼类Cyt b基因密码子第1位点上出现频率约等,在第2、3位点上的出现频率则存在明显差异。都柳江鲇、斑鳠种群Cyt b基因密码子第3位点上的变异频率显著高于第1和第2位点,但第3位点上的变异多为同义突变。【结论】都柳江鲇种群大小稳定,具有较丰富的遗传多样性;都柳江斑鳠种群遗传多样性较匮乏,可能经历过瓶颈效应和种群扩张事件,急需开展种群保护和恢复工作。

瓣结鱼的年轮特征与年龄鉴定

根据分别采集于贵州清水江和都柳江的316例瓣结鱼标本,观察了瓣结鱼鳞片、主鳃盖骨、背鳍条、脊椎骨和匙骨等5种材料的年轮特征并进行了瓣结鱼的年龄鉴定。结果表明,瓣结鱼这5种年龄鉴定材料的年轮特征各不相同。其中瓣结鱼鳞片和主鳃盖骨的年轮最为清晰,而匙骨的年轮则较为模糊。分别采用鳞片、主鳃盖骨、背鳍条和脊椎骨等4种材料对瓣结鱼年龄鉴定的结果表明,鳞片和主鳃盖骨年龄鉴定的吻合率最高,达92.1%,瓣结鱼鳞片的年轮形成期主要在每年的5月、8月和10月。鳞片为瓣结鱼年龄鉴定的主要依据材料,而主鳃盖骨和背鳍条则为瓣结鱼年龄鉴定的重要佐证。

瓣结鱼含肉率及肌肉脂肪酸、矿质元素的分析

本文测定和分析了瓣结鱼的含肉率及肌肉中脂肪酸和矿质元素组成。结果表明,瓣结鱼平均含肉率为66.91%。瓣结鱼肌肉中共有14种脂肪酸。其中饱和脂肪酸为5种,平均质量分数为39.49%;不饱和脂肪酸有9种,质量分数平均值为58.83%。瓣结鱼肌肉9种矿质元素中,钙等常量元素的平均含量在116.35 mg/100g^1313.33 mg/100 g之间,而铜等微量元素含量的平均值则在0.19 mg/100 g^5.20 mg/100 g之间。瓣结鱼肌肉平均钙磷比为1∶4.31。相关分析表明,瓣结鱼的含肉率及肌肉中脂肪酸和矿质元素随其生长变化显著。t-检验表明,瓣结鱼肌肉中脂肪酸和矿质元素在清水江标本和都柳江标本之间存在着显著性差异。

菲牛蛭消化酶活性的测定

为菲牛蛭的资源保护及人工养殖提供参考,采用酶学分析方法对菲牛蛭不同生长阶段幼体Ⅰ组（0.21±0.01）g、亚成体Ⅱ组（1.98±0.06）g和成体Ⅲ组（7.49±0.47）g、Ⅳ组（12.96±0.55）g及摄食前后消化酶活性的特征进行研究。结果表明：1）Ⅱ组胰蛋白酶活力最强,显著高于Ⅰ组（幼体）、Ⅳ组,与Ⅲ组间差异不显著。Ⅰ-Ⅳ组的胃蛋白酶活力逐渐增高,其中Ⅲ组、Ⅳ组间差异不显著,其活力均显著高于Ⅰ组;各组均未能检测到脂肪酶活性。2）各组菲牛蛭摄食后胰蛋白酶活性均表现为先急剧下降,在摄食后1d显著上升,到达峰值,而后下降;摄食后胃蛋白酶活性迅速增强,1d后到达峰值,摄食后2-3d急剧下降,而后缓慢下降。

北盘江光唇裂腹鱼种群基因组DNA遗传多样性的AFLP分析

为了解珠江水系北盘江光唇裂腹鱼(Schizothorax lissolabiatus)种群遗传多样性的现状,采用8个引物组合对其30尾个体进行了全基因组DNA扩增片段长度多态性AFLP分析。每个引物组合扩增片段数在8~73之间,扩增片段长度为69~500 bp,基因型数为28~30。8个引物组合共计检测出扩增位点975个,平均每个引物组合扩增出121.88个位点;其中多态性位点897个,多态位点比例为92.00%。观测等位基因数(N_(a))、有效等位基因数(N_(e))、Nei遗传多样性指数(H)、Shannon信息指数(I)平均值分别为1.912 3、1.369 0、0.227 1和0.357 5。个体间遗传距离为0.214 7~0.410 9,平均为0.304 0。基于个体间遗传距离构建的UPGMA和NJ系统树具有相似的拓扑结构,均显示30尾光唇裂腹鱼聚为两支,可能分别来源于两个亚群体。北盘江光唇裂腹鱼种群遗传多样性丰富,但由于受水电站建坝、水质污染、过度捕捞等因素的影响,该种群的分布区已缩小,种群数量减少,种群遗传变异离散程度较低并存在着等位基因丢失的现象,应采取措施恢复北盘江光唇裂腹鱼的种群数量,保护其遗传多样性。

草鱼发塘池浮游生物的测定与分析

草鱼发塘池浮游植物共有6门41属，数量变幅为7．20×10^9～6．37×10^10个／L，平均为2．04×10^10个／L；优势门为蓝藻门，其次为绿藻门，分别占总数的80．5％和17．3％。浮游动物共计28属种和无节幼体，数量变幅为240～45465个／L，平均为14103个／L；优势种为轮虫，占总数的67．1％。本次试验过程中施基肥时间偏晚，施追肥数量较少和频度较低。