贵州白香猪FSHβ基因多态性与产仔数的关联分析

运用PCR-SSCP技术和直接测序技术,对贵州白香猪的FSHβ基因编码区3个外显子SNPs位点进行检测,利用一般线性模型分析其与产仔数的关联性。结果在贵州白香猪FSHβ基因外显子2中发现1个多态位点,对于初产母猪,AB基因型母猪比AA基因型母猪的产仔数多2.57头(P<0.05);在外显子3中发现1个多态位点,对于初产母猪和经产母猪,AB基因型母猪比BB基因型母猪的产仔数分别多2.97头和2.08头(P<0.05)。B等位基因为优势等位基因。研究表明,FSHβ基因可以作为贵州白香猪产仔性状改良的分子标记基因。

贵州畜禽种质资源库及信息库建设研究

通过采集、分装、冻存18种贵州地方畜禽血样,初步建立了畜禽血液库;提取贵州省地方畜禽品种的基因组DNA构建了DNA库;通过信息化处理,搭建并整合了包括遗传特性、品种信息等在内的交互式访问数据信息库,旨在为贵州畜禽种质资源的保存、利用与创新提供保障,为科研教学单位提供基础资料,同时为推进贵州畜禽种质资源信息化发展奠定基础。

贵州巨熊蜂亚属 Megabombus 种类及其访花植物调查

为探明贵州省巨熊蜂亚属Megabombus种类及其访花植物情况,对贵州省50余县不同生态环境进行熊蜂标本采集,并记录其访花植物,利用体视显微镜Leica MZ 12.5、数码成像系统Nikon SMZ 25对熊蜂外部形态及外生殖器进行观察与物种鉴定。结果表明,巨熊蜂亚属Megabombus在贵州省分布有菲熊蜂Bombus(Megabombus)irisanensis Cockerell,1910(中国新记录种)、双色熊蜂Bombus(Megabombus)bicoloratus Smith,1879、三条熊蜂Bombus(Megabombus)trifasciatus Smith,18523种,主要访花植物为豆科Leguminosae、菊科Asteraceae、唇形科Lamiaceae和蔷薇科Rosaceae等植物。研究结果丰富了中国及贵州省熊蜂种类资源,为熊蜂种质资源开发与利用提供参考资料。

赤水乌骨鸡ADSL基因的组织表达特征及其干扰载体构建

【目的】探究赤水乌骨鸡胸肌组织中腺苷琥珀酸裂解酶基因(ADSL)表达特征及其目的基因的干扰载体构建,为深入研究畜禽组织肌肉中肌苷酸(IMP)的表达规律及ADSL基因影响畜禽风味的机制提供理论参考。【方法】以不同月龄(3、4、5和6月龄)的赤水乌骨鸡(公鸡和母鸡各半)为试验材料,运用实时荧光定量PCR检测不同月龄及不同性别赤水乌骨鸡胸肌组织中ADSL基因的表达情况;同时根据GenBank中鸡ADSL基因mRNA序列(NM_205529.2)设计4对短发夹RNA(shRNA)干扰序列(sh1-ADSL、sh2-ADSL、sh3-ADSL和sh4-ADSL)和1对阴性对照序列(sh-NC)与pGPH1/GFP/Neo载体连接后进行测序,将构建成功的ADSL基因干扰载体转染至成肌细胞,检测并筛选出干扰效率最高的干扰载体。【结果】ADSL基因在不同月龄赤水乌骨鸡胸肌组织中的相对表达量排序为5月龄>4月龄>6月龄>3月龄,赤水乌骨母鸡3月龄母鸡的ADSL基因相对表达量极显著高于公鸡(P<0.01,下同),4月龄母鸡ADSL基因的相对表达量显著高于公鸡(P<0.05),6月龄母鸡ADSL基因的相对表达量极显著低于公鸡;ADSL基因质粒的测序结果显示干扰质粒构建成功,质粒转染后干扰组及阴性对照均可见绿色荧光,空白对照不发光,说明各重组质粒成功转染赤水乌骨鸡成肌细胞;ADSL基因沉默结果显示,sh2-ADSL沉默效果最佳,干扰效率为90.30%。【结论】赤水乌骨鸡胸肌中ADSL基因的相对表达量随着月龄增加表现为先上升后下降的变化趋势;3、4和5月龄赤水乌骨母鸡ADSL基因的相对表达量高于公鸡,随着月龄增加ADSL基因的相对表达量增加,公鸡和母鸡间的差异减小。成功分离提取赤水乌骨鸡成肌细胞,并筛选出RNA干扰效果最佳载体sh2-ADSL,为后续研究ADSL基因调控鸡肉肌苷酸及风味的分子机制提供参考。

农药对熊蜂的生态毒理研究进展

熊蜂(Bombus spp.)因其独特形态特征及生物学特性成为农业生产中重要传粉昆虫,在维持自然及农业生态系统平衡发挥重要作用。近年来,熊蜂多样性呈减少趋势,农药不合理施用为重要因素之一。本文基于农药对熊蜂的毒理学研究现状,系统整理了熊蜂急性致死和慢性亚致死毒理研究方法,围绕农药对熊蜂的急性毒性,亚致死剂量农药对熊蜂精子活性及体温调节等生理发育,颜色分辨及学习记忆行为、肠道微生物结构及解毒因子等方面影响展开综述,对研究中存在的问题和未来研究方向进行了思考和展望,旨在为农药的科学使用、生物环境安全评估及熊蜂多样性保护提供参考。

关岭牛MEF2A基因干扰载体构建及其转染对成肌细胞的影响

旨在构建肌细胞增强因子MEF2A(myocyte enhancer factor 2A)基因的重组干扰载体,探究MEF2A基因对牛成肌细胞的影响。本研究选择3头健康的3日龄雌性关岭牛,体重约为21 kg,采集背最长肌组织成功培养成肌细胞。设计MEF2A基因的4对shRNA干扰序列和1对NC阴性对照序列,将其连接至pGPU6-GFP-Neo载体上,转染重组载体至关岭牛成肌细胞。采用qRT-PCR法筛选干扰效率最佳的载体,并检测干扰MEF2A基因对肌生成因子MEF2B、MEF2C、MEF2D,周期与凋亡因子CDK2、CCNA2、BCL2 mRNA表达水平的影响;随后利用流式细胞仪与酶标仪探究干扰载体对成肌细胞增殖生长的影响,各试验组别设置3个生物学重复。同时运用在线软件预测牛MEF2A蛋白理化性质与网络谱图。结果显示,本研究成功筛选出干扰效率最佳的shRNA-MEF2A-3载体(P<0.01)。MEF2A基因被抑制后,成肌细胞中MEF2B、MEF2C与MEF2D基因表达量均极显著上调(P<0.01);CDK2与BCL2表达量皆显著下调(P<0.05),CCNA2表达量极显著下调(P<0.01);与对照组相比,干扰组细胞周期明显延长,干扰组成肌细胞在6 h后的增殖活性均极显著低于对照组(P<0.01)。由此可初步推测,MEF2A干扰载体成功转染至牛成肌细胞后,可有效抑制MEF2A基因表达,改变基因表达模式,影响了关岭牛成肌细胞的分裂增殖,为进一步探究MEF2A基因对关岭牛肉质性状调控机制和挖掘地方种质资源提供数据支撑。

MMP15、PICK1基因在山羊睾丸中的表达研究

MMP15、PICK1基因均是哺乳动物性腺组织中影响性腺生理功能正常发挥的重要影响因子,但它们在黔北麻羊睾丸组织中的表达规律尚不明晰。为研究黔北麻羊不同月龄的睾丸中MMP15、PICK1基因的表达情况,本试验以黔北麻羊为研究对象,通过qRT-PCR技术分别检测MMP15与PICK1基因在1、3、6、9、12月龄的黔北麻羊睾丸中的表达水平并建立基因表达的标准曲线。结果显示:MMP15、PICK1基因在黔北麻羊不同月龄睾丸组织中均有表达;MMP15基因在黔北麻羊不同月龄睾丸中的表达量从高到低排列为:12月龄>1月龄>9月龄>3月龄>6月龄;12月龄与1月龄的表达差异不显著(P>0.05),二者表达量均极显著高于3月龄、6月龄、9月龄(P<0.01);9月龄表达显著高于3月龄(P<0.05),极显著高于6月龄(P<0.01);3月龄表达极显著高于6月龄(P<0.01)。PICK1基因在黔北麻羊不同月龄睾丸中的表达量从高到低排列分别是:3月龄>6月龄>12月龄>9月龄>1月龄;3、6月龄其表达量极显著高于9、12月龄(P<0.01);1月龄与其他几个月龄相比,其表达量均极显著低于其他月龄(P<0.01)。结合黔北麻羊的生理机能发育情况,黔北麻羊在6月龄时已经基本达到性成熟,所以此时睾丸内细胞活动增强,睾丸机能活跃。本次试验结果表明,黔北麻羊睾丸生精功能的正常发挥或与MMP15及PICK1基因的表达量有关。

5-Aza-dC对牛成肌细胞MyoD1启动子甲基化及mRNA表达的影响

旨在探究5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dC)对牛成肌细胞的增殖和肌分化因子(myogenic differentiation 1,MyoD1)启动子甲基化以及mRNA表达的影响。本研究复苏了前期冻存的关岭牛成肌细胞,并进行培养,待其生长到对数生长期,再通过不同浓度的5-Aza-dC对牛成肌细胞进行处理,利用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期;结合高通量检测方法检测MyoD1启动子甲基化水平,并利用qRT-PCR检测MyoD1及相关基因的表达水平。研究发现,0.1μmol·L^(-1) 5-Aza-dC为最适浓度,该浓度下细胞抗凋亡因子Bcl的表达极显著降低(P<0.01),促凋亡因子Bax的表达极显著提高(P<0.01),促凋亡因子Caspase-9的表达显著提高(P<0.05);周期因子Cyclin A2的表达显著提高(P<0.05),而细胞因子Cyclin B1、Cyclin D的表达无显著变化;检测空白组和试验组MyoD1启动子甲基化水平发现,试验组甲基化水平极显著低于空白组(P<0.01);而mRNA的表达水平极显著高于空白组(P<0.01)。5-Aza-dC能够通过改变Caspase-9、Bcl、Bax、Cyclin A2等基因的表达来调节关岭牛成肌细胞的增殖和凋亡,并能够有效降低MyoD1基因启动子的甲基化水平(P<0.01);极显著提高其mRNA的表达量(P<0.01)。低浓度的5-Aza-dC能通过促进细胞凋亡及调控关岭牛MyoD1的甲基化水平来调控MyoD1的表达;同时推测,MyoD1基因启动子的甲基化水平能够影响关岭牛成肌细胞的生长发育,可为遗传标记辅助关岭牛的改良提供理论参考。

动物胰岛素抵抗的发生机制及治疗

胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是2型糖尿病、心血管疾病等慢性代谢性疾病的主要诱因,常与糖脂代谢紊乱、氧化应激、相关细胞因子含量变化、内质网应激等因素有关,严重影响动物健康生长且降低畜牧业经济效益。明确动物胰岛素抵抗的发生机制及影响因素对寻找有效改善胰岛素抵抗的药物和治疗方法具有重大意义。文章从胰岛素抵抗的发生机制、影响因素和治疗措施等方面进行论述,以期为有效缓解胰岛素抵抗及治疗相关疾病提供参考。

从江香猪miR-146b-3p的组织表达、靶基因预测及其初步研究

本研究以从江香猪和大白猪为实验对象,用颈环qRT-PCR法分析miR-146b-3p在从江香猪和大白猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、大肠、小肠8种组织中的表达量,利用软件miRNA22.2和TargetScan预测从江香猪miR-146b-3p的靶基因及其结合位点,并用普通PCR技术对从江香猪miR-146b-3p前体序列进行克隆验证,构建其真核表达载体并转染至从江香猪肌细胞,同时采用qRT-PCR方法检测生长相关基因生长激素受体(Growth hormone receptor,GHR)与IGF-1的表达情况。结果显示:miR-146b-3p在从江香猪小肠组织中的相对表达量最高,显著高于其他组织,在背最长肌组织中表达量最低(P<0.01);miR-146b-3p在大白猪肝脏和肺脏组织中表达量最高,心脏中最低(P<0.01)。除心脏与大肠外,miR-146b-3p在从江香猪其余组织中的表达量均显著高于大白猪(P<0.05)。分析发现miR-146b-3p与GHR 3’UTR存在靶位点;在从江香猪肌细胞中超表达miR-146b-3p后能极显著下调GHR的表达,而对IGF-1表达量的影响不显著。以上结果表明miR-146b-3p在动物生长发育过程中扮演着至关重要的角色,该结果为下一步研究miR-146b-3p调控相关基因参与动物生长发育的分子机制奠定了理论依据和实验基础。

鸡TATA结合蛋白的亚细胞定位及基因组织表达特性分析

为探究鸡TATA结合蛋白(TATA-binding protein,TBP)的亚细胞定位以及TBP基因在鸡胚不同发育阶段不同组织中的表达情况,首先扩增鸡TBP基因的蛋白质编码区(CDS),将其亚克隆至真核表达载体pCMV-Myc构建重组真核表达载体pCMV-Myc-TBP,转染人胚胎肾细胞(HEK-293T),然后利用蛋白质印迹法和间接免疫荧光法分别检测重组蛋白的表达和亚细胞定位;进一步通过RT-qPCR方法检测TBP基因在鸡胚胎期14 d(E14 d)、出壳后1日龄(1 d)、7日龄(7 d)和14日龄(14 d)4个时间点各组织中的表达情况。结果表明,成功构建了鸡TBP基因的重组真核表达载体pCMV-Myc-TBP,转染细胞后获得与预期大小一致的Myc-TBP重组蛋白条带。亚细胞定位分析结果显示,鸡TBP蛋白主要定位在细胞核。RT-qPCR检测结果显示,鸡TBP基因在E14 d到14 d的各组织中均有表达,但均以肺脏中的表达量高,其中在1 d鸡的肺脏中表达量最高。对鸡TBP基因组织表达变化趋势分析发现,在E14 d至14 d,TBP基因在眼球、脑、心脏、肝脏、肌胃、胸肌、腿肌中的表达整体呈下降趋势,没有明显的变化规律;而肺脏中的TBP基因表达水平先升高后降低再升高,整体呈"N"型变化趋势。本研究证实鸡TBP蛋白主要定位在细胞核,TBP基因在鸡胚发育不同阶段的各组织中都有表达,但以肺脏中的表达量高。

黔北麻羊RARs基因在不同组织中的表达分析

为研究视黄酸受体α(Retinoic Acid Receptor Alpha,RARA)、视黄酸受体β(Retinoic Acid Receptor Beta,RARB)与视黄酸受体γ(Retinoic acid receptor gamma,RARG)基因在黔北麻羊不同组织中的表达情况,本研究提取黔北麻羊心、肝、脾、肺、肾、下丘脑、垂体、子宫、输卵管、卵巢10个组织总RNA并逆转录合成cDNA第1链,随后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RARA、RARB与RARG基因在黔北麻羊10个组织中的表达水平。结果显示:RARA、RARB、RARG 3个基因在黔北麻羊10个组织中均有不同程度的表达,其中,RARA基因表达量由大到小依次为肝>心>下丘脑>脾>垂体>肺>输卵管>子宫>肾>卵巢,肝脏RARA基因表达量最高,卵巢RARA基因表达量最低,两者之间差异极显著。黔北麻羊RARB基因表达由大到小依次为输卵管>下丘脑>子宫>卵巢>肝>心>肺>肾>垂体>脾,其中,输卵管RARB基因的表达量极显著高于其余组织;而RARG基因表达顺序依次为下丘脑>卵巢>输卵管>肝>心>子宫>肾>肺>垂体>脾,RARG基因的表达量在下丘脑中极显著高于其余9个组织,除下丘脑外,卵巢RARG基因表达量也极显著高于其余8个组织。本研究探明了RARA、RARB与RARG在黔北麻羊不同组织中的表达规律,研究结果为今后进一步探明其功能及对黔北麻羊繁殖性状的调控机理奠定基础。

鼠抗鸡膜联蛋白A2多克隆抗体的制备及应用

为制备鼠抗鸡膜联蛋白A2(ANXA2)多克隆抗体,检测ANXA2蛋白在鸡不同组织中的表达情况,先构建鸡ANXA2基因的重组原核表达载体pET-32a-ANXA2,将其转化入大肠埃希菌中进行诱导表达;采用切胶纯化和切胶免疫小鼠的方法制备鸡ANXA2多克隆抗体,然后利用该抗体检测ANXA2蛋白在4周龄SPF鸡不同组织中的表达情况。结果表明:鸡ANXA2重组蛋白His-ANXA2在IPTG终浓度为0.1 mmol·L-1、诱导时间为5 h的条件下表达量高。通过切胶纯化和切胶免疫方法获得了具有较高效价和特异性的鸡ANXA2蛋白鼠多克隆抗体。组织表达检测结果显示,ANXA2蛋白在鸡法氏囊、胸腺、十二指肠、肾脏、脑、腿肌和心脏中有表达,而在肝脏、脾脏、肺脏、腺胃和胰腺中未检测到表达。这一研究获得的鼠抗鸡ANXA2蛋白多克隆抗体为后续研究鸡相关病毒的复制和致病机制奠定了基础。

关岭牛MEF2C基因克隆与差异表达性分析

旨在分析牛肌细胞增强因子MEF2C(myocyte enhancer factor 2C)基因的分子特征和在不同组织中的表达特性。以关岭牛为试验材料,扩增MEF2C基因CDS区,对MEF2C基因序列和蛋白结构进行分析,RT-qPCR检测MEF2C在不同组织中的表达特性。结果显示:牛MEF2C基因的CDS区全长为1326bp,编码441个氨基酸。MEF2C蛋白相对分子质量约为48kDa,理论等电点为7.71,主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,含有1个MADS结构域,亚细胞定位显示MEF2C主要位于细胞核(60.90%)。牛MEF2C基因与牦牛同源性较近,与火鸡的同源性较远。RT-qPCR结果表明,MEF2C基因在关岭牛和杂交牛的7个组织中皆可表达,在肺脏和脾脏中差异极显著(P<0.01);心脏和肝脏以及背最长肌中差异显著(P<0.05);在成年牛的脾脏和心脏中表达量极显著高于犊牛(P<0.01);其他组织在犊牛阶段的表达量极显著高于成年牛阶段(P<0.01)。在成肌细胞分化过程中,MEF2C基因的表达量在0,12,24,48h呈逐渐上升趋势,不同时间段的表达量差异极显著(P<0.01)。结果表明MEF2C基因在关岭牛生长发育过程中发挥着重要的作用,为进一步探究MEF2C基因对关岭牛组织器官发育的影响,挖掘地方种质资源提供了数据支撑。

含溴结构域蛋白2结构与功能的研究进展

含溴结构域蛋白2(bromodomain-containing protein 2,BRD2)具有两个串联的溴结构域和一个末端外结构域,是溴结构域和末端外结构域蛋白家族成员之一。BRD2蛋白能够特异性结合组蛋白乙酰化赖氨酸,参与基因的转录调控、染色质重塑和细胞增殖与凋亡等生物学活动。近年来研究表明,BRD2蛋白通过溴结构域和乙酰化组蛋白之间的表观遗传相互作用来调控基因转录和细胞周期、神经发育、炎症和脂肪生成,并且在肿瘤细胞增殖以及病毒感染和复制过程中也有着重要作用。该文主要从BRD2蛋白的结构特征、细胞功能和参与病毒复制的作用机制等方面进行综述,以期为深入研究BRD2蛋白的功能提供参考。

HSL与FAS基因在苏太猪不同组织器官中的表达研究

为了探究HSL及FAS基因在苏太猪不同组织器官中的相对表达水平,试验运用实时荧光定量PCR法检测HSL及FAS基因在苏太猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、皮下脂肪和背最长肌8个不同组织器官中的相对表达量。结果表明:HSL与FAS基因在苏太猪各组织器官中均有一定的表达。HSL基因在皮下脂肪中的表达水平最高,在背最长肌中的表达水平最低,表达水平顺序依次为皮下脂肪>肺脏>心脏>脾脏>肾脏>肝脏>胃>背最长肌。FAS基因在皮下脂肪中的表达水平最高,在背最长肌的表达水平最低,表达水平顺序依次为皮下脂肪>脾脏>肺脏>胃>肝脏>肾脏>心脏>背最长肌。

N-乙酰半胱氨酸对努比亚山羊PLCB3和MMP2基因表达的影响

为了探究N-乙酰半胱氨酸(N-Acetylcysteine,NAC)对山羊繁殖性能相关基因PLCB3与MMP2的影响机制,试验以努比亚山羊为研究对象,将其分为饲喂组(0.07%NAC)和空白组,采用实时荧光定量PCR法检测饲喂组和空白组子宫、输卵管、垂体、下丘脑、卵巢5个器官中PLCB3和MMP2基因表达量的变化。结果表明:空白组和饲喂组PLCB3和MMP2基因在5个器官中均有表达。组内比较,空白组各器官中PLCB3基因的表达量由高到低的顺序为垂体>子宫>下丘脑>输卵管>卵巢,饲喂组中的顺序为垂体>子宫>下丘脑>卵巢>输卵管;组间比较,空白组垂体中PLCB3基因的表达量显著高于饲喂组(P<0.05);总体来看,空白组各器官中PLCB3基因的表达量高于饲喂组。组内比较,空白组各器官中MMP2基因的表达量由高到低的顺序为垂体>子宫>下丘脑>输卵管>卵巢,饲喂组中的顺序为垂体>子宫>下丘脑>卵巢>输卵管,其中垂体和子宫中的表达量极显著高于输卵管、下丘脑和卵巢(P<0.01);组间比较,饲喂组垂体中MMP2基因的表达量极显著高于空白组(P<0.01),子宫中的表达量显著高于空白组(P<0.05);总体来看,饲喂组各器官中MMP2基因的表达量高于空白组。说明在饲粮中添加0.07%的NAC会使PLCB3基因在性腺器官中的表达量降低,MMP2基因在性腺器官中的表达量升高,推测NAC会通过影响性腺轴中PLCB3和MMP2基因表达量来影响努比亚山羊的繁殖性能。

NCOA1基因mRNA表达及多态性与黔北麻羊产羔性状关联性分析

为了研究核受体辅激活蛋白1(NCOA1)对黔北麻羊繁殖性能的影响,试验采用DNA测序技术,利用SeqMan软件分析测序结果初步筛选SNP位点,根据筛选出的SNP位点应用RNA在线二级结构预测软件中的RNA secondary structure prediction、ProtScale、DNAStar软件中的EditSeq分析NCOA1基因突变位点的二级结构、理化性质、亲疏水性、结构域,运用SPSS 20.0软件分析NCOA1基因型与产羔数的关联性;再应用实时荧光定量PCR方法检测NCOA1基因在黔北麻羊子宫、输卵管、垂体、下丘脑、卵巢5个器官中mRNA的表达水平。结果表明:在外显子7处发现2个SNP位点,命名为G144A和G155A,其中G144A属于同义突变,编码的氨基酸未发生改变,G155A属于错义突变,编码的精氨酸突变为赖氨酸,导致外显子7所编码的氨基酸自由能升高,稳定性降低,分子质量变大,等电点升高,疏水性增强,但未发现保守结构域和特殊结构域,即NCOA1基因外显子7编码的蛋白无特异结构和独立功能;对G155A位点进行基因分型,发现GG基因型个体产羔数分别比GA、AA基因型个体多0.249只(P>0.05)和0.377只(P<0.05);NOCA1基因mRNA在黔北麻羊5个器官中均有表达,在下丘脑中的表达量最高,在输卵管中的表达量最低,且卵巢、下丘脑中的表达量极显著高于输卵管、子宫(P<0.01),垂体中的表达量显著高于子宫和输卵管(P<0.05)。说明NCOA1基因对黔北麻羊繁殖性能有一定影响,有G155A突变位点的GG基因型也对黔北麻羊高产有一定影响,可作为筛选黔北麻羊高繁殖力品系的一个潜在指标。

关岭牛MyoD1与MSTN基因相互表达调控

[目的]旨在验证牛MyoD1与MSTN在表达调控上的相互作用。[方法]首先,以构建的p EGFP-N3-MyoD1和p EGFP-N3-MSTN过表达载体,分别在两组关岭牛原代成肌细胞中过表达MyoD1和MSTN,细胞转染24 h后,qRT-PCR检测并分析各处理组细胞中MyoD1和MSTN相比表达情况。其次,以海肾荧光载体pRL-TK为内参质粒,在转染p GL-3-MSTN-pro质粒的关岭牛原代成肌细胞中过表达MyoD1,在转染p GL-3-MyoD1-pro质粒的关岭牛原代成肌细胞中过表达MSTN,共转染36 h后,双荧光素酶试剂盒检测分析各组细胞中相对荧光素酶活性变化。[结果]过表达MyoD1组细胞中MyoD1相对表达量相比对照组上调至8 283.987±2 337.534(P=0.004),MSTN的相对表达量上调至7.849±1.089 (P=0.000 4);而MSTN过表达组细胞中MSTN相对表达量相比对照组上调至121 131.802±12 474.046(P=0.004),MyoD1基因的相对表达量下调至0.103±0.016(P=0.000 1)。进一步试验中,过表达MyoD1组细胞中相对荧光素酶活性变化相比对照组从1.131±0.051上调至3.030±0.212(P=0.0001);而过表达MSTN组细胞中相对荧光素酶活性变化相比对照组从1.797±0.136下调至0.543±0.092(P=0.000 2)。[结论]MyoD1的过量表达(P=0.004),会导致MSTN表达显著上调(P=0.000 4);而MSTN的过量表达(P=0.004),可负向调节MyoD1表达(P=0.000 1)。此外MyoD1的过表达会增强MSTN启动子活性(P=0.000 1);而MSTN的过表达会降低MyoD1启动子活性(P=0.000 2)。综上,MyoD1可正向调控MSTN表达,而MSTN也对MyoD1表达起负反馈调节作用。