一株鸡源志贺氏菌的分离、鉴定及耐药性分析

为了对鸡源志贺氏菌性腹泻进行快速准确的诊断和耐药性研究,试验对由贵州省动物疫病研究室提供的一株鸡源志贺氏菌进行进一步的分离、PCR鉴定及药敏试验。结果显示,经细菌分离培养、革兰氏染色及生化鉴定试验,该菌符合志贺氏菌的特点及其生化特性;PCR检测结果显示,针对志贺氏菌ipa H基因设计的一对引物可扩增出393 bp的目的条带,与预期大小一致,具有高度的特异性;对其耐药性的研究显示,该株志贺氏菌对参试的20种药物产生不同程度的耐药性。研究鸡源志贺氏菌的分离与鉴定中所结合的PCR方法具有快速、简单、特异性强的特点,能够迅速确定病原菌,并在药敏试验中发现了针对该菌敏感性较高、疗效更好的药物。结果为鸡源志贺氏菌耐药性的有关研究与临床用药提供了科学的参考依据。

PRRS不同疫苗组合对仔猪血清抗体水平和CD3、CD4、CD8分子表达量的影响

为了探究猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）不同疫苗组合对仔猪血清抗体水平和CD3、CD4、CD8分子表达量的影响,试验于规模化猪场筛选健康未免疫的仔猪30头,随机分为3个组。其中试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和对照组均在仔猪14日龄首次免疫经典猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）弱毒疫苗,试验Ⅰ组仔猪在35日龄加强免疫高致病性PRRSV灭活疫苗,试验Ⅱ组仔猪在35日龄加强免疫经典PRRSV弱毒疫苗,对照组在14,35日龄均注射0.9%Na Cl溶液,然后对各组仔猪在不同时间点通过前腔静脉采血,应用ELISA法检测血清中PRRSV抗体和CD3、CD4、CD8分子表达量。结果表明：除了CD8分子外,试验Ⅰ组和试验Ⅱ组抗体水平和CD3、CD4分子表达量在部分时间点显著或极显著（P〈0.05或P〈0.01）高于对照组,但两个试验组之间无统计学差异。说明在生产实践中PRRSV弱毒疫苗和灭活疫苗联合使用能产生一定的效果,从安全角度考虑,建议采用经典弱毒疫苗结合高致病性灭活疫苗进行免疫。

猪病毒性腹泻弱毒疫苗与灭活疫苗联合使用的免疫效果评价

为研究猪病毒性腹泻弱毒疫苗与灭活疫苗联合使用的免疫效果,本实验应用"猪流行性腹泻病毒(PEDV)-猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)-猪轮状病毒(PoRV)三联弱毒疫苗"和"PEDV-TGEV二联灭活疫苗"对100头妊娠母猪和所产140头仔猪进行不同免疫,在不同日龄对仔猪前腔静脉采血并离心取上清,利用直接ELISA方法测定其免疫抗体滴度。结果表明,妊娠母猪于产前40 d首次免疫和产前20 d二次免疫,所产仔猪3日龄滴鼻接种三联弱毒疫苗,28日龄二次免疫和65日龄三次免疫后14 d,抗体滴度开始上升。通过本实验基本分析猪病毒性腹泻疫苗母源抗体和免疫抗体水平的消长规律,为猪病毒性腹泻疫苗免疫程序提供理论参考。

不同免疫程序接种PRRS疫苗对仔猪血清抗体水平的影响

为了解仔猪以不同免疫程序接种猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗后产生的血清抗体水平,在规模化猪场筛选猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和抗体均为阴性的仔猪40头,随机分为4组。其中试验A组、试验B组和试验C组均为14d首次接种经典PRRS弱毒疫苗,试验A组在35d二次免疫高致病性PRRSV灭活疫苗,试验B组在35d二次接种经典PRRS弱毒疫苗,试验C组在35d注射生理盐水,对照组D组在14d、35d均注射生理盐水。在仔猪免疫接种后0、7、14、21、28、35、42、49、56和63d分别采血,用N-ELISA和G-ELISA两种试剂盒检测PRRSV特异性抗体。结果显示,N-ELISA抗体水平A组与B组差异不显著(P>0.5),而G-ELISA抗体水平在免疫后35d、56d、63dA组显著高于B组(P<0.5)。表明14d首次接种经典PRRSV弱毒疫苗和35d二次接种高致病性PRRSV灭活疫苗的免疫效果优于仅单独一次或两次接种PRRSV弱毒疫苗效果。

蓝耳病弱毒苗与灭活苗组合免疫中和抗体水平更优

为探究猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗与灭活疫苗联用的免疫效果,笔者进行了免疫对比试验,现将结果呈现如下。猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染引起的以怀孕母猪繁殖障碍以及各年龄段猪呼吸道疾病为主要特征的传染病。

规模化养殖场—“3331”疫病防控措施

近年来，随着我国集约化、规模化养殖业的高速发展，动物疫病呈现出多样性、复杂性态势，给养殖业造成重大经济损失。在养殖业的两大风险（市场风险和疾病风险）中，应对疫病风险的挑战在不断增大，也给动物保健行业的发展带来了新的机遇与挑战。多年来，笔者在从事动物疫病预防及控制的探索过程中，总结出了“3331”疫病防控措施，现介绍如下，与同行业者探讨和交流。

冬春季节猪传染性腹泻的防控措施

猪传染性腹泻是指由猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和轮状病毒单独或混合感染引起的一种急性、高度接触性传染病的总称。本病的发生有明显的季节性，多发于寒冷的冬季和早春季节。

贵州某猪场猪伪狂犬病的抗体检测与控制

为摸索规模化猪场猪伪狂犬病的防控措施,于2015年3月份—2016年3月份对贵州省某规模化猪场猪只进行了抗体监测、制订免疫程序和疫苗免疫等一系列猪伪狂犬病净化工作。结果表明:整个猪群的PRV-gE抗体阳性率由65.22%降至41.43%,猪只的临床症状得到了控制,生产成绩有所提升。说明取得了比较理想的净化控制效果。

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗不同免疫程序对细胞因子分泌的影响

为分析仔猪首次免疫猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒疫苗对血清细胞因子分泌水平的影响,本试验筛选PRRSV抗原与抗体均为阴性的7日龄仔猪40头,平均分为4组,其中试验A、B、C组均为14日龄首次免疫经典弱毒疫苗,试验A组35日龄二免用高致病性灭活疫苗,试验B组35日龄二免用经典弱毒疫苗,试验C组35日龄注射生理盐水,对照组均注射生理盐水。分别于首免后1,2,3周和二免后1,2,3,4,5,6周前腔静脉采血分离血清,采用细胞因子ELISA方法检测IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-10和IL-12细胞免疫水平。结果显示,仔猪14日龄首次免疫弱毒疫苗后能迅速分泌细胞因子,首免3周以内,试验组IFN-γ分泌量均高于对照组,差异极显著(P<0.01);试验组TNF-α分泌量高于对照组,差异极显著(P<0.01),且试验A组>试验B组>试验C组,其差异不显著(P>0.05);试验组IL-2分泌量高于对照组,试验A组最高,其差异显著(P<0.05);试验组IL-10分泌量高于对照组,试验C组最高,其差异显著(P<0.05);试验组IL-12分泌量高于对照组,试验A组最高,其差异显著(P<0.05)。35日龄二免弱毒疫苗或灭活疫苗3周后,除IFN-γ外,试验A组的TNF-α、IL-2、IL-10和IL-12分泌水平均高于试验B组和试验C组。结果表明,14日龄首免PRRSV弱毒疫苗和35日龄二免PRRSV灭活疫苗的免疫效果优于仅单独2次免疫PRRSV弱毒疫苗或1次免疫PRRSV弱毒疫苗。

仔猪免疫PRRSV疫苗后病毒血症的荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立一种快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）疫苗免疫后在猪体内病毒血症持续时间的方法。根据GenBank中PRRSV基因序列,设计1对针对N基因扩增的特异性引物,经RT-PCR扩增后连接到pMD19-T载体上,构建含有N基因片段的重组质粒。采用SYBR GreenⅠ染料法进行荧光定量RT-PCR扩增,建立标准曲线并进行特异性、敏感性及重复性试验,比较分析该方法与商品化试剂盒检测结果的阳性符合率。结果显示,所构建方法的扩增效率为1.063,标准品各稀释度质粒拷贝数与Ct值之间相关系数为0.999,引物特异性强,可检测的最低核酸模板浓度为1.0×10~2copies/L,比常规PCR敏感性高10倍,重复性试验的变异系数均小于1%,与商品化试剂盒检测的阳性符合率达100%。两种方法检测结果均表明,在猪体内PRRSV疫苗病毒血症可持续3周。本研究建立的猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR具有快速、特异、敏感和重复性好等优点,可为PRRSV感染（包括疫苗毒）的调查、监测和防控提供可行性和操作性强的技术支持。