高效液相色谱法测定金感胶囊中微量成分马来酸氯苯那敏的含量

目的:建立以反向高效液相色谱法测定金感胶囊中马来酸氯苯那敏含量的方法。方法:色谱柱为依利特Sinochom ODS-BP柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(含1%三乙胺和0.005 mol/L庚烷磺酸钠,用磷酸调节pH至3.0)(V∶V=60∶40),流速为0.8 ml/min,柱温为25℃,检测波长为262 nm。结果:马来酸氯苯那敏在0～1.287 6μg范围内的线性关系良好(r=0.999 99);马来酸氯苯那敏的平均回收率为98.76%,RSD=1.22%(n=90)。结论:本方法操作简单,重现性良好,可用于金感胶囊中马来酸氯苯那敏的含量测定。

替芬泰片在健康人体的耐受性及药代动力学分析

目的分析替芬泰片在健康人体的耐受性及其药代动力学。方法本研究采用随机、双盲的方法于2017年1~6月纳入的26例健康志愿者作为研究对象,所有患者给予300、600 mg替芬泰,两种剂量分别单、多次给药,多次给药为给药1次/d,连续给药7 d,其中药物洗脱周期为2周。采用高效液相色谱法检测不同时间点的药代动力学参数[最高血药浓度(Cmax)、最低血药浓度(Cmin)、平均血药浓度(Cavg)、一段时间内的血药浓度曲线面积(AUC0-t)、无穷远的血药浓度曲线面积(AUC0~∞)、积累指数];分析药代动力学参数、高效液相色谱特征及相关不良反应。结果健康志愿者多次口服不同剂量的替芬泰片后,替芬泰的达峰时间(Tmax)为(1.02±0.13)h,半衰期(t1/2)为(3.08±0.09)h;M8的Tmax为(3.05±0.07)h,t1/2约为(9.56±0.67)h;M9的Tmax为(4.11±0.15)h,t1/2为(6.17±0.21)h。300 mg给药剂量下,替芬泰多次给药与单次给药的Cmax、Cmin、Cavg、AUC0-t、AUC0-∞、积累指数比较,差异无统计学意义(P>0.05);代谢物N-苯甲酰基-O-(二甲氨基乙基)-L-酪氨酸(简称M8)和代谢物N-苯甲酰基-L-酪氨酸-O-(N-氧化-二甲氨基乙基)-L-酪氨酸(简称M9)多次给药的AUC0-t和AUC0-∞高于单次给药,差异有统计学意义(P<0.05);M9多次给药的Cmax高于单次给药,差异有统计学意义(P<0.05)。600 mg给药剂量下,替芬泰多次给药的Cmax高于单次给药,差异有统计学意义(P<0.05);替芬泰多次给药与单次给药的Cmin、Cavg、AUC0~t、AUC0-∞、积累指数比较,差异无统计学意义(P>0.05);M8和M9多次给药的Cmax和AUC0-t高于单次给药,差异有统计学意义(P<0.05);M9多次给药的AUC0~∞高于单次给药,差异有统计学意义(P<0.05)。600 mg给药剂量下,多次给药使替芬泰Cmax升高,对其暴露量AUC0~∞没有显著影响;代谢物M8和M9的Cmax增高,同时暴露量AUC0-∞增加。健康志愿者多次口服(剂量300、600 mg)替芬泰片后,600 mg剂量时1例志愿者发生了1次轻度咽喉部不适,有异物感的不良事件,判定为与药物无关,无志愿者因不良事件退出试验。结论替芬泰片600 mg仍未表现出明显的蓄积作用,安全性高,为了取得较好的抗病毒效果,可建议每日参考剂量为600 mg。

替芬泰对HepG2 A64细胞基因水平表达的影响

目的探讨替芬泰对HepG2 A64细胞基因水平表达的影响。方法选取HepG2 A64耐药细胞株作为研究对象,根据有无使用替芬泰将其分为观察组与对照组,观察组采用抗乙型肝炎病毒(HBV)效果较好的剂量122.5μg替芬泰,对照组除不加替芬泰外,其余处理同观察组。应用基因芯片的方法,检测并分析两组HepG2 A64细胞中的基因表达水平。结果实验结果提示,观察组细胞与对照组细胞比较,许多基因的表达出现相应的上调或下调,编码基因中表达差异10倍以上的基因有11个,分别为:ZNF503反义RNA 1(ZNF503-AS1)、丝氨酸肽酶抑制剂Kazal 4型(SPINK4)、白介素21受体(IL-21R)、钙与整合素结合家族成员4(CIB4)、糖蛋白NMB(跨膜)(GPNMB)、CELF2反义RNA 2(CELF2-AS2)、酸性磷酸酶5(ACP5)、含有7B的kelch域(KLHDC7B)、突触结合蛋白4(SYT4)、MRPL23反义RNA 1(MRPL23-AS1)、智人H19印迹母系表达的转录本(H19),其中IL-21R与免疫相关;把差异表达倍数在1.5倍以上的基因取出,应用KEGG通路分析,有9个,分别为:层粘连蛋白β3(LAMB3)、肿瘤坏死因子(TNF)、周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、B细胞慢性淋巴细胞白血病/淋巴瘤2(Bcl2)、周期蛋白依赖激酶6(CDK6)、转录激活因子4(CERB)、蛋白激酶C(PKC)、蛋白酪氨酸激酶2(Pyk2)、小鼠骨肉瘤病毒致癌基因同源(FOS),参与HBV感染相关分子调节网络,从而通过干预胞内信号通路钙依赖性酪氨酸激酶-2(Calcium-Pyk2)传导发挥体外抗HBV作用。结论替芬泰可通过调控HBV复制下游Calcium-Pyk2信号通路和p21因子,从而对HBx蛋白的功能产生影响,达到抑制HBV复制的作用,并可通过影响细胞IL-21、Bcl2等免疫因子,提高细胞抗HBV作用。

替芬泰对2.2.15细胞分泌HBsAg的影响

目的探讨替芬泰(TFT)对2.2.15细胞分泌乙肝表面抗原(HBsAg)的影响。方法以乙肝病毒的脱氧核糖核酸(HBV-DNA)克隆转染人肝癌细胞HepG2 2.2.15细胞系作为实验模型,TFT配制成102、51、25.5μm的药液,另设拉米夫定(LAM)218μm阳性对照组(简称为LAM 218μm组)和病毒对照组,分别加入24孔细胞培养板中,0.6 ml/孔,每浓度4孔。每4天换液1次,第8天收集细胞上清液。采用酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液中HBsAg的滴度,比较各组3个批次的OD值,并记录其平均抑制率。结果LAM 218μm组的OD值明显低于病毒对照组,差异有统计学意义(P<0.05);TFT 102、51、25.5μm组的OD值均明显低于病毒对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。LAM 218μm、TFT 102、51、25.5μm组的平均抑制率分别为37.49%、56.26%、47.33%、36.82%。结论TFT能有效抑制HBsAg分泌,从而发挥出抗HBV的作用,可为进一步研发TFT成为抗HBV新药提供数据支持及参考。