绿原酸、咖啡酸、阿魏酸对微血管内皮细胞的损伤作用

微血管内皮细胞具有重要的生理功能.诸多因素会损伤微血管内皮细胞,从而导致微血管内皮功能的失衡,进而引起多种病征和损伤.其中,药物损伤是一个重要的因素.绿原酸（chlorogenic acid,CGA）是金银花、杜仲等药材中的重要活性成分,也是诸多中药民族药的质量控制的主要指标之一,同时也是具有重要应用开发前景的活性物质.

原矛头蝮蛇毒及其组分对凝血功能的影响

目的研究原矛头蝮蛇毒（PMV）及其组分作用于血液循环系统的部分生物学活性,进一步探讨其毒性机制。方法采用Sephadex G-75凝胶层析方法分离不同分子质量范围的蛋白组分FⅠ,FⅡ和FⅢ。贫血小板血浆调节富血小板血浆使血小板为3×1011L-1,血小板悬液分别与PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ0.03 g·L-1预孵育5 min,血小板聚集仪测定PMV及其组分诱导血小板聚集活性;PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ0.05 g·L-1分别与纤溶酶原0.1 U·L-1预孵育10 min,采用单一时间点测定和酶动力学测定PMV及其组分酶切发色底物S-2251的作用;将大鼠血浆与PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ1.0 g·L-1分别孵育5和30 min,测定凝血酶时间（TT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）和纤维蛋白原（FIB）水平;PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ10,50和250 mg·L-1处理微血管内皮细胞24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活;PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ0.1 g·L-1与含卵磷脂和不含卵磷脂的豚鼠红细胞悬液分别孵育不同时间,计算溶血率。结果与对照组相比,PMV和高分子质量蛋白组分FⅠ（〉71 ku）诱导血小板聚集率显著升高〔（61.0±5.8）%和（56.9±5.9）%vs（12.4±4.1）%〕（P〈0.01）。酶切发色底物S-2251结果显示,PMV与中分子质量组分FⅡ（18~37 ku）具有酶切发色底物的作用（P〈0.01）。PMV和FⅠ可引起血浆凝固。与对照组相比,FⅡ组分和低分子质量蛋白组分FⅢ（〈10 ku）明显使TT,APTT和PT的时间延长（P〈0.01）。PMV,FⅠ及FⅡ导致内皮细胞解离悬浮,与对照组相比,细胞存活率下降,分别为（56.8±3.6）%,（71.6±3.8）%和（58.2±5.5）%。在无卵磷脂条件下,PMV和FⅡ可缓慢地引起红细胞轻度溶血;在卵磷脂参与下,PMV和FⅡ引起豚鼠红细胞急剧溶血,与正常对照组相比,在0.5 min内溶血率从（17.7±1.0）%分别升高至（81.0±4.0）%和（81.0±1.0）%（P〈0.01）。结论 PMV在体外表现出多方面的血循毒性质的活性,不同分子质量蛋白组分活性机制及作用不同。

补体旁路激活导致内皮细胞炎症反应及干预

目的基于补体旁路与一系列病征的重要关联,研究补体旁路激活导致微血管内皮细胞发生的变化及干预.方法采用眼镜蛇毒因子特异激活血清补体旁路途径.将补体旁路激活产物作用于培养的人微血管内皮细胞,分别检测黏附分子、炎症介质、纤溶凝血相关分子的表达和炎症相关信号通路的活化,采用多种化学小分子对上述炎症反应进行干预.结果补体旁路激活产物刺激微血管内皮细胞后,炎症相关信号通路JAK2、p38MAPK和NF-κB先后出现活化高峰,P-selectin和vWF先后瞬时释放,黏附分子（E-selectin、ICAM-1、VCAM-1）、炎症介质（IL-8、MCP-1）、纤溶凝血相关分子（t-PA、PAI-1、TF）的表达上调,而TM和NO下调.AG490、SB203580、PDTC以及白藜芦醇对内皮细胞的炎症反应表现出多样的干预作用及影响.结论补体旁路激活能导致微血管内皮细胞发生炎症反应,从而介导微血管内皮的生理结构与功能发生炎性变化;相关化学小分子能在一定程度上干预上述炎症反应,提示JAK2可能是一个重要的调控位点.

补体旁路激活致小鼠急性肺损伤的炎症病理机制研究

目的研究补体旁路激活所导致的小鼠肺部急性炎症的发生发展及相关指标的变化,为药物筛选及干预研究提供理想的小鼠肺部急性炎症病理模型。方法 SPF级昆明小鼠尾静脉注射眼镜蛇毒因子(CVF)激活血清补体旁路途径,根据注射后取样时间不同,分为15 min、30 min、1 h、2 h、6 h组,同时平行设置PBS对照组。取肺组织测定肺系数、肺含水量,并行病理切片检查,肺组织匀浆测定髓过氧化物酶(MPO)活性;制备支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清,测定BALF中的细胞数和蛋白含量,采用ELISA法分别测定BALF和血清中的IL-6、TNF-α、P-selectin和ICAM-1含量。结果小鼠尾静脉注射CVF后可致肺部炎性细胞明显浸润,MPO活性明显上调,BALF中细胞总数和蛋白浓度明显增加。BALF和血清中的IL-6、TNF-α、P-selectin水平及血清中ICAM-1的含量均明显升高,其中,BALF中P-selectin含量在30 min时间点出现1个小高峰,IL-6和TNF-α在1 h时间点出现1个高峰,在2 h时间点均无进一步上升,但在6 h时间点各指标均又明显升高;血清中IL-6和TNF-α含量在1 h时间点达到峰值,随后浓度降低,P-selectin和ICAM-1水平随着时间的延长持续上升。而肺系数、肺含水量及BALF中ICAM-1的含量与PBS组相比无明显变化。结论补体旁路激活可导致小鼠肺部急性炎症的发生,以30 min至1 h的炎症反应最为明显,该实验可以为药物筛选及干预研究提供理想的动物肺部急性炎症病理模型。

眼镜蛇毒因子在生命科学中的应用

补体是免疫系统的重要组成部分,在机体的天然防御和免疫调控中发挥重要作用。补体的过度激活会引起炎症和组织损伤,尤其是补体旁路途径的过度激活在一系列疾病和病征的发生发展中扮演了重要角色。从眼镜蛇毒中分离获得的补体旁路特异激活蛋白——眼镜蛇毒因子在补体相关研究中发挥了重要作用。现就眼镜蛇毒因子在生命科学中的应用情况做一综述。