BBS1基因新突变导致Bardet-Biedl综合征的遗传学分析及产前诊断

1病例资料先证者,孕23+4周胎儿。孕妇,30岁,第3次妊娠,孕17+3周在外院行唐氏筛查,21三体、18三体和开放性神经管畸形(ONTD)筛查低风险,孕22+5周在外院行超声产前筛查,宫内妊娠,单活胎,胎儿左手异常(考虑多指畸形)、胎儿双肾增大并实质回声弥漫性增强(考虑多囊肾),转诊贵州医科大学附属医院(我院)产前诊断中心。

先天性胆总管囊肿的产前超声诊断

分析先天性胆总管囊肿的产前超声诊断。方法:选取我院2018年7月至2021年2月的36例产前超声检查提示胎儿先天性胆总管囊肿孕妇作为研究对象,总结其声像图特点,分析胎儿腹部超声报告、囊肿变化等情况。结果:36例孕妇胎儿孕周为24.9±2.87周,囊肿直径在8.5-80mm之内,平均直径为(40±16)mm。其中,男性胎儿有9例(25%),女性胎儿有27例(75%)。确诊胎儿有29例,确诊率为(80.55%),采取手术治疗后,无出现并发症。2例患者因手术失败而导致死亡,误诊胎儿有7例,误诊率达19.44%。结论:先天性胆总管囊肿的产前超声诊断准确率高,具有无创、操作简单等优势,值得广泛应用。

胎儿门静脉系统发育异常的产前超声诊断

分析胎儿门静脉系统发育异常的产前超声诊断价值。方法:选出本院产科2016年1月~2020年12月的24例门静脉系统发育异常胎儿,均对孕妇行产前超声检查,分析其检查结果、合并症以及预后情况等。结果:17例I型胎儿门静脉系统发育异常中,静脉导管缺失13例(76.47%),静脉导管显示4例(23.53%);合并其他结构异常(包括神经系统、心血管系统、泌尿生殖系统、骨骼系统)12例(70.59%),其中只合并心脏扩大或宫内生长受限等5例(29.41%);引产11例(64.71%),出生3例(17.65%),失访3例(17.65%)。7例II型胎儿门静脉系统发育异常中,1例(14.29%)出现静脉导管缺失,6例(85.71%)静脉导管均有显示;1例(14.29%)合并其他结构异常,另6例均为功能性变化(心脏扩大、宫内生长受限)(85.71%);3例(42.86%)行染色体检查提示检查结果正常,另4例(57.14%)染色体检查无异常;宫内感染常规检查均呈阴性;引产4例(57.14%);出生1例(14.29%),失访2例(28.57%)。结论:胎儿门静脉系统发育异常的产前超声诊断率高,可发现肝胆系统合并畸形,降低出生缺陷,为临床诊断提供有价值的参考依据,可值广应用。

胎儿肾积水的超声诊断与预后评价

随着产前超声检查的广泛应用和诊断技术水平的提高,使人们增加了对胎儿肾盂积水的认识。但是究竟这种改变对胎儿及出生后的婴儿造成多大的影响,应怎样去评估其严重程度,判断其预后,采取何种诊断措施仍然是目前函待解决的问题。现将我院2009年10月至2013年2月进行系统超声的中孕期及晚孕期胎儿正常肾脏及肾积水患儿进行归纳总结，探讨超声检查的价值及方式方法。

出生缺陷二级防控中唇腭裂产前超声检查方法的探索

唇腭裂是口腔颌面最常见的先天畸形,可以引起颌面部多器官形态和功能的障碍而备受人们的关注,影响患者的身心健康,产生不同程度的心理障碍,有的甚至会对患者产生一生的打击。

产前B超、MRI及高通量测序在先天性肾缺如中的应用

肾缺如是一种罕见的先天性出生缺陷,单肾缺如发病率约为1‰,双肾缺如发病率为0.1‰~0.3‰,遗传是其主要致病因素,但其发病机制尚不明确。临床上,大多数肾缺如胎儿并不具有典型的体征和症状,同时也缺乏高特异性的诊断指标。目前,肾缺如的胎儿往往是孕妇在孕中晚期产检时,通过产前B超检查被发现,少数孕妇会选择进一步完善MRI进行确诊。因此,临床实践中肾缺如的产前诊断具有明显的局限性。近年来,随着高通量测序技术的发展,拷贝数变异测序和全外显子测序等技术逐渐被广泛运用于妇产与遗传学科领域。高通量测序技术用于胎儿产前诊断,具备母胎安全性高、准确性高、操作简便等优势,不仅为肾缺如的产前诊断方式提供了新的选择,也为探索其遗传病因及相关机制提供了科学依据。本文将就正常胚胎肾脏发育以及产前B超、MRI、拷贝数变异测序和全外显子测序等相关产前诊断技术在肾缺如中的应用进行综述。

罕见性染色体非整倍体49,XXXXY综合征的产前诊断1例报道并文献复习

高级别染色体非整倍体(HGA)是指由于X或Y染色体数目额外增加导致染色体总数大于47条,是性染色体非整倍体(SCA)的一种罕见情况。2017—2023年在北京协和医院行介入性产前诊断的9 960名孕妇中,诊断胎儿SCA 123例(1.2%),其中HGA仅1例,为49,XXXXY。49,XXXXY是一种具有男性表型的罕见HGA。其发病机制可能与X染色体增加的剂量敏感效应有关。产前可表现为胎儿宫内生长受限,出生后主要表现为中重度智力障碍、运动和语言发育迟缓、性腺功能低下、身材矮小、特征性面容、肌肉骨骼异常等。产前咨询时应充分告知其预后不良的风险。

沉默MKRN1基因表达对人胚胎肾细胞HEK-293T增殖及凋亡的影响

背景:研究报道敲低MKRN1可以抑制肿瘤细胞的生长,但MKRN1是否作为肿瘤相关蛋白在机体发挥作用还需进一步研究。由于siRNA介导的基因沉默是瞬时表达,持续时间短且常规慢病毒技术存在脱靶效应,利用四环素调控(Tet-on)慢病毒系统构建稳定沉默MKRN1基因的细胞系有着可逆的优势,且可规避上述缺点,对于深入研究MKRN1的生物学功能有重要的意义。目的:构建Tet-on慢病毒系统介导的MKRN1基因沉默载体,研究沉默MKRN1基因表达对人胚胎肾细胞HEK-293T增殖、凋亡的影响。方法:采用RNAi技术,针对MKRN1基因设计3条shRNA(命名为sh1,sh2,sh3),将3条shRNA序列连入四环素诱导表达载体pTripz中验证连入序列;通过三质粒系统转染HEK-293T细胞,并用含有1 mg/L强力霉素的完全培养基培养,进行慢病毒包装,收取48 h及72 h病毒液,将其浓缩后感染HEK-293T细胞,感染48 h后用荧光显微镜观察病毒感染效率。通过实时荧光定量PCR、Western blot检测MKRN1的敲减效率;Western blot检测四环素诱导表达系统是否构建成功;通过集落形成实验及Western blot检测沉默MKRN1表达后对HEK-293T细胞增殖、凋亡能力的影响。结果与结论:(1)设计的3条MKRN1-短发夹RNA(sh1、sh2、sh3),均成功连入Tet-on载体,且各组载体序列正确;通过慢病毒成功感染HEK-293T细胞;(2)实时荧光定量PCR及Western blot检测发现3条shRNA序列中1号序列敲低MKRN1水平明显降低(P<0.05),且沉默组不加入强力霉素诱导后目的基因的表达得到回复;(3)集落形成实验发现沉默MKRN1后HEK-293T细胞增殖能力下降(P<0.05);Western blot检测敲低MKRN1后,增殖细胞核抗原表达下调,细胞凋亡相关指标BAX表达增加,Bcl2表达下调,Bcl2/BAX的比值下调(P<0.001);(4)结论:采用Tet-on慢病毒载体系统构建了稳定沉默MKRN1的HEK-293T细胞株,且沉默MKRN1后能够抑制HEK-293T细胞的增殖,并促进其凋亡。通过构建稳定沉默MKRN1的HEK-293T细胞可为进一步研究MKRN1的生物学功能奠定基础,也为研究其他基因的生物学功能提供一个方法学上的参考。

测序技术检测流产物拷贝数目变异的应用

目的：采用测序技术检测拷贝数变异,探讨测序技术在染色体疾病上的应用和拷贝数变异在流产物检测中的应用价值。方法：选择2013年7月至2014年4月在贵阳医学院附属医院贵州省产前诊断中心就诊孕妇中胚胎停止发育的50例患者,孕周为7-23周,留取流产物,提取DNA,制备文库,高通量测序,对流产物DNA进行测序分析,得出流产物的拷贝数变异。同时对孕妇和流产物做染色体核型分析。结果：50例孕妇的流产物染色体基因拷贝数变异检测,除1例为母源性污染,未得出结果外,测序检出率78%,染色体核型检出率为28%。结论：测序技术检测流产物的检出阳性率高于染色体核型检出率,流产物染色体核型能检出的整倍体改变、非平衡易位改变,测序技术均能检出,且在染色体微缺失微重复检出上优于染色体核型检出,推荐临床上使用对流产物进行测序技术检测查找流产原因。

高通量测序技术筛查单基因隐性遗传病

目的探讨用高通量测序技术筛查新生儿单基因隐性遗传病,评估其用于孕前筛查或产前诊断的可行性。方法用目标基因筛选和高通量测序分析法分别对非孕妇的血液基因组DNA和孕妇的血浆游离DNA样本进行400多种遗传病相关基因的全面筛查分析。结果用高通量测序技术成功地在非孕妇的血液中检测出相关的致病基因,并在疑似地中海贫血患者的基因组中发现了导致地中海贫血症的致病突变基因HBB（chr11：5246595 C/G）;成功地从孕妇血浆游离DNA检测出来自胎儿的遗传病相关致病基因突变,平均每个样本中有1～4个突变,基因型为杂合型。结论高通量测序技术可用于隐性基因携带者的孕前筛查及产前诊断。

MIF基因沉默对肝癌细胞系增殖凋亡及ERK/RSK2信号通路的影响

目的探讨RNA干扰介导的巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因沉默对肝癌细胞系SMMC-7721与Hep G2凋亡的影响及可能的作用机制。方法将MIF-si RNA干扰序列转染SMMC-7721与Hep G2细胞,以Con-si RNA序列转染的细胞作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)及Western blot检测MIF沉默效果,CCK-8法测定细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。采用Western blot检测MIF沉默后凋亡相关基因BCL-2、BAX、P53的蛋白水平及细胞外信号调节激酶(ERK)、P90核糖体s6激酶2(RSK2)、糖原合成激酶3β(GSK3β)、Bad蛋白水平及其磷酸化水平。结果沉默组细胞中MIF m RNA及蛋白表达水平与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),沉默组低于对照组;两组细胞增殖能力比较,差异有统计学意义(P<0.05),MIF沉默组细胞增殖能力低于对照组;两组凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05),MIF沉默组细胞凋亡率高于对照组;两组细胞BAX、P53、BCL-2蛋白水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),MIF沉默组细胞BAX、P53的蛋白表达水平高于对照组,而BCL-2蛋白水平低于对照组;沉默组与对照组细胞中ERK、RSK2及Bad蛋白水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而沉默组与对照组细胞中GSK3β、p-GSK3β、p-ERK、p-RSK2及p-Bad蛋白水平比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 MIF基因沉默抑制SMMC-7721与Hep G2细胞的增殖能力并促进细胞凋亡可能是通过调节ERK/RSK2信号通路实现的。

绿茶对高糖环境下乳鼠海马神经细胞的保护作用

目的探讨绿茶对高糖环境下乳鼠海马神经细胞的保护作用。方法取SD雄鼠6只,分别用绿茶浓缩液、生理盐水灌胃,按血清药理学方法制备绿茶浸出液血清和空白血清。取出生24 h内SD乳鼠的海马组织,采用酶消化法分离培养海马神经细胞,分为8组,对照组培养基葡萄糖浓度为25 mmol/L;高糖组葡萄糖浓度为45mmol/L;空白血清低、中、高浓度组葡萄糖浓度为45 mmol/L,并分别加入25%、50%、100%浓度的空白血清;绿茶低、中、高浓度组葡萄糖浓度为45 mmol/L,并分别加入25%、50%、100%浓度的绿茶浸出液血清。干预后48 h,采用倒置显微镜和透射电镜观察各组神经细胞形态及超微结构改变;干预后第7天,采用乳酸脱氢酶(LDH)试验及CCK-8法检测神经细胞活性和损伤程度。结果与对照组相比,高糖组海马神经细胞出现损伤现象,如胞体不规则、突触减少等;绿茶低、中、高浓度组较高糖组均有不同程度改善。高糖组LDH水平高于对照组(P<0.01);绿茶低、中、高浓度组LDH水平均低于高糖组,且高浓度组低于低浓度组(P均<0.01);绿茶各浓度组LDH水平均低于相应空白血清对照组(P均<0.05)。高糖组CCK-8低于对照组(P<0.01);绿茶低、中、高浓度组CCK-8均高于高糖组,且高浓度组高于低浓度组(P均<0.05);绿茶各浓度组CCK-8均高于相应空白血清对照组(P均<0.05)。结论高糖能够引起海马神经细胞的损伤,绿茶能够有效改善海马神经细胞形态和结构,升高细胞活性,降低其损伤程度,具有一定的神经保护作用。

四种有机溶剂对斑马鱼眼睛发育的影响

目的评估乙醇、异丙醇、丙酮和二甲基亚砜四种有机溶剂对斑马鱼胚胎发育,尤其是眼睛发育的影响,为其作为溶剂在斑马鱼眼睛疾病模型研究中提供参考。方法将发育至12 hpf斑马鱼胚胎暴露于0.5%乙醇、1%异丙醇、1.5%丙酮和2.5%二甲基亚砜至72 hpf,观察其存活率、致畸率及眼睛发育状况。结果对照组和乙醇、异丙醇、丙酮、DMSO暴露组存活率分别为96%和93%、90%、90%、86%。对照组斑马鱼幼鱼形态正常,而有机溶剂暴露组则出现了不同程度形态变化如心包水肿、出血、卵黄缺损和身体弯曲等。其中,以DMSO致畸作用最严重,乙醇的致畸作用最弱。方差分析显示,斑马鱼幼鱼眼睛长度/身体长度比值在有机溶剂暴露组和对照组之间没有显著差异;但是DMSO暴露组斑马鱼幼鱼眼睛面积/身体面积比值显著低于其他组。另外与对照组相比,四种有机溶剂暴露组的视网膜分层均为正常,乙醇、异丙醇、丙酮暴露组视锥细胞、视杆细胞和视网膜神经元细胞信号正常,但DMSO暴露组各细胞信号均较弱。结论因此,在以斑马鱼为模型动物进行眼睛疾病的相关研究时,我们应谨慎选择有机溶剂作为药物或其他化学受试品的溶解载体,并且应该进行预实验来确定其最佳使用浓度。

甲磺酸阿帕替尼通过p53抑制结肠癌细胞HCT116增殖的作用及机制

目的探讨阿帕替尼对人结肠癌细胞HCT116及敲除野生型p53的HCT116细胞抑制作用的差异并探讨其机制。方法以0、15、30、60μmol/L阿帕替尼处理HCT116 p53^+/+、HCT116 p53^-/-细胞24、48 h,以CCK-8法检测阿帕替尼对两株细胞增殖的抑制作用;流式细胞术(Annexin V/PI法)检测0、15、30μmol/L阿帕替尼处理细胞24 h后凋亡率变化;实时荧光定量PCR法和Western blot法检测0、15、30μmol/L阿帕替尼处理细胞24 h后,p53、NF-κB p65、Caspase-3 mRNA和蛋白表达变化。结果CCK-8结果显示,阿帕替尼能抑制HCT116 p53^+/+、HCT116 p53^-/-细胞的增殖,抑制作用具有剂量依赖性(P<0.01)。流式细胞术结果显示,阿帕替尼干预后,HCT116 p53^+/+、HCT116 p53^-/-细胞凋亡率升高(P<0.01)。与HCT116 p53^+/+细胞相比,阿帕替尼处理后HCT116 p53^-/-细胞的凋亡率较低(P<0.05)。阿帕替尼处理后,HCT116 p53^+/+、HCT116 p53^-/-细胞中p53、NF-κB p65、capsase-3 mRNA和Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。阿帕替尼干预后,HCT116 p53^+/+细胞中p53、NF-κB p65蛋白表达下调而HCT116 p53^-/-细胞中NF-κB p65蛋白表达上调(P<0.01)。结论阿帕替尼可能通过p53/NF-κB通路抑制HCT116 p53^+/+、HCT116 p53^-/-细胞增殖并促进细胞凋亡,结肠癌细胞可能通过野生型p53对阿帕替尼产生耐药。

产前诊断Miller-Dieker综合征胎儿一例

目的对1例超声显示大脑外侧裂形态异常胎儿行遗传学诊断。方法应用染色体G显带和染色体微阵列技术对胎儿进行遗传学诊断。结果胎儿羊水染色体核型分析未见异常,染色体微阵列分析提示胎儿17p13.3-p13.2位置存在1.4 Mb的缺失,确诊为Miller-Dieker综合征。结论提高对Miller-Dieker综合征临床特征的认识,合理选择遗传学检测方法对诊断本病有重要价值。临床上应重视微缺失微重复病例的诊断,避免漏诊。

海马神经元原代细胞培养方法的改良

目的:旨在建立一种简单、稳定的SD乳鼠海马神经元的分离及原代培养方法。方法:选用出生24 h内的SD乳鼠,在数码显微镜下分离双侧海马体,剥离去除海马体上的包膜血管,剪碎吹打海马组织、胰酶消化后,获得细胞悬液,用含胎牛血清的DMEM高糖型种植培养基培养8 h后,再用添加B27的Neuralbasal维持型培养基行原代培养,第7天采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色鉴定神经元纯度,CCK-8法检测海马神经元细胞活力。结果:提取的海马神经元细胞形态完整,胶质细胞少,基本无杂质,生长状态良好,胞体丰满,培养的海马神经元之间能形成密集的网络结构;NSE免疫组化鉴定培养的海马神经元纯度达90%,CCK8显示培养第1~6天培养的海马神经元活性逐渐增强,第7天达峰值。结论:本方法能够提高海马神经元细胞纯度以及细胞活性,是一种稳定高效的海马神经元原代培养方法。

高糖诱导大鼠海马神经元细胞模型建立及细胞凋亡的影响

目的通过不同葡萄糖浓度和不同作用时间诱导SD大鼠海马神经元,建立稳定的糖尿病脑病细胞模型,探讨高糖对海马神经元凋亡情况的影响。方法 (1)海马神经元的原代培养及纯度鉴定。(2)最适高糖浓度探索:CCK-8法检测海马神经元各组细胞活性。(3)最适浓度下高糖作用时间的探索:Western blot检测海马神经元细胞Bcl-2、Bax的表达情况。(4)最适浓度和作用时间下,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果 (1)成功培养海马神经元,神经元细胞经鉴定纯度达85%以上。(2) 45 mmol/L组海马神经元存活率均> 80%。(3) 45 mmol/L-48 h为最适作用时间组,细胞内Bcl-2表达下降、Bax表达升高(P <0. 01)。(4)最适高糖组细胞凋亡率显著升高(P <0. 01)。结论高糖浓度为45 mmol/L、作用时间48 h为理想的糖尿病脑病细胞模型,且高糖通过影响Bcl-2、Bax的表达导致海马神经元凋亡率升高。

神经管缺陷防控的孕期超声检查方法探索

目的:通过对神经管缺陷产前超声方法的探索,提高神经管缺陷产前诊断率。方法:对3 490例进行超声检查孕妇的胎儿头颅及脊柱各超声切面的图像进行分析,并记录引产病例相关尸检结果,对分娩后新生儿进行追踪随访。结果:3 490例受检者中,检出神经管缺陷畸形共12例,开放性脊柱裂6例、露脑畸形2例、无脑儿4例,无漏诊。结论:对孕期胎儿进行规范的超声检查可有效防止神经管缺陷儿的出生。

斑马鱼作为模式动物在人类眼睛疾病研究中的应用

斑马鱼(Zebrafish,Danio rerio)作为一种优良的动物模型已经被广泛用于发育生物学、遗传学和毒理学等研究领域。由于斑马鱼在眼睛形态、解剖结构、基因表达及功能等方面与人类存在极大的相似性,并且具有发育快、体外受精、胚胎透明、易于观察等优势,目前已越来越多地用于眼睛发育及相关疾病如眼睛缺损、青光眼、白内障、视杆视锥细胞变性、糖尿病视网膜病变等的研究。本文综述了斑马鱼眼睛发育及结构,以及作为研究眼睛疾病模型的优缺点,从而探讨斑马鱼在人类眼睛疾病研究中的应用价值。

国产果糖胺测定试剂盒(NBT法)在西门子ADVIA1800的性能验证

目的:验证某国产果糖胺测定试剂盒(NBT法)在西门子ADVIA1800全自动生化分析仪上的性能指标是否满足相关法规和试剂说明书要求。方法:此次实验参考WS/T420-2013和CLSI EP文件制定性能验证方案,依次对最低检测限(空白限)、精密度(重复性精密度和期间精密度)、线性范围、正确度(相对偏差、回收试验)、参考区间和干扰试验进行验证。结果:最低检测限为0.011 3,批内精密度为0.65%、1.62%,批间精密度为6.7%、6.8%,线性范围为0~8.4mmol/L(R=0.998 7),正确度相对偏差为-2.4%、1.11%、-0.5%,回收率为99.60%和98.27%,参考区间验证结果显示所用样本均在参考值范围之内。结论:验证结果均满足相关法规和试剂说明书要求,验证结论为合格。