基于琼脂糖-中性红法的简易空斑试验应用研究

目的 建立一种检测呼吸道合胞病毒(RSV)滴度的简易空斑试验方法。方法 应用琼脂糖覆盖细胞单层、中性甲醛固定及中性红染色的试验流程检测病毒滴度,并比较试验组和空白对照组的检测效果。结果 试验组形成典型合胞病变,即感染细胞发生融合后形成多核巨细胞,直径为1.5~2.5mm,合胞形态不规则,细胞界限不清。空白对照组未见典型细胞病变。试验组有绿色荧光表达,且可见细胞核聚集现象。空白对照组未检测到非特异性的荧光标记。中性红染色后,正常Hep-2细胞呈红色,而RSV感染的Hep-2细胞不能染色,形成空斑。镜下空斑形态与RSV形成的合胞病变一致。空斑肉眼清晰可见,为类圆形或圆形,大小1.5~2.5mm,边缘不规则。随着病毒稀释度的增高,空斑数目逐渐较少。通过简易空斑试验可计算出病毒滴度为7.5×10^(8) PFU/mL。结论 基于琼脂糖-中性红法的简易空斑试验可直接观察空斑计算病毒滴度,不需要进行免疫荧光染色和显微镜检查,且检测结果可无限期保存,具有方法简单、经济等优点。